1、第3章基因工程原理 王金發(fā)L1編輯ppt 基因工程是20世紀70年代發(fā)展起來的遺傳學的一個分支學科2編輯ppt基因克隆操作3編輯ppt基因工程的應用4編輯ppt5編輯ppt基因工程的對象是基因，所以如果是獲得商品的話，就是基因的產(chǎn)品，或是改變了遺傳性的細胞和個體。如果要獲得效益的話，除了經(jīng)濟效益之外，還有巨大的社會效益?；蚬こ痰膶ο笫腔颍蛞簿硬拍軜窐I(yè)，也就是說基因需要在宿主細胞中工作，這樣，基因工程同一般的土建工程的根本差別在于，它需要在體外操作，然后送到細胞中去進行表現(xiàn)。3.1 基因工程的特點6編輯ppt 3.1.1 基因工程與遺傳工程遺傳工程(genetic engineeri

2、ng)一詞產(chǎn)生于19世紀20年代，是遺傳學和工程學相結(jié)合的一門技術科學。借用工程技術上的設計思想, 在離體條件下,對生物細胞、細胞器、染色體或DNA分子進行按圖施工的遺傳操作,以求定向地改造生物的遺傳性。遺傳工程的概念有廣義和狹義之分。廣義的遺傳工程包括傳統(tǒng)遺傳操作中的雜交技術和現(xiàn)代遺傳操作中的基因工程和細胞工程, 狹義的遺傳工程僅指基因工程。7編輯ppt 3.1.2 生物技術生物技術(biotechnology) 又稱生物工藝學, 生物工程學。是根據(jù)生物學、化學和工程學的原理進行工業(yè)規(guī)模的經(jīng)營和開發(fā)微生物、動植物細胞及其亞細胞組分, 進而利用生物體所具有的功能元件(如基因、蛋白質(zhì))等來提供商

3、品或社會服務的一門綜合性科學技術?；蚬こ?、細胞工程、酶工程和發(fā)酵工程等是生物技術的主要內(nèi)容。8編輯ppt 基因工程(gene engineering) 又稱基因操作(gene manipulation),重組DNA(recombinant DNA)?；蚬こ淌且苑肿舆z傳學為理論基礎,以分子生物學和微生物學的現(xiàn)代方法為手段,將不同來源的基因(DNA分子), 按預先設計的藍圖，在體外構(gòu)建雜種DNA分子,然后導入活細胞, 以改變生物原有的遺傳特性,獲得新品種, 生產(chǎn)新產(chǎn)品, 或是研究基因的結(jié)構(gòu)和功能。9編輯ppt體外操作與細胞內(nèi)表達10編輯ppt細胞工程(cell engineering)應用細胞

4、生物學的原理和方法,結(jié)合工程學的技術手段,按照人們預先的設計,有計劃地改變或創(chuàng)造細胞遺傳性的技術,以及在體外大量培養(yǎng)和繁殖細胞,或獲得細胞產(chǎn)品,或利用細胞體本身的技術領域。主要內(nèi)容包括細胞融合、細胞拆合、染色體轉(zhuǎn)移、基因轉(zhuǎn)移、細胞或組織培養(yǎng)等。由于所用細胞的來源不同，細胞工程又分為微生物細胞工程、植物細胞工程、動物細胞工程等。11編輯ppt植物細胞工程12編輯ppt 細胞分泌工程 根據(jù)細胞內(nèi)蛋白質(zhì)合成和運輸理論而發(fā)展起來的一項新的細胞工程技術，主要是通過對基因改造，如基因缺失、多效分泌突變、周質(zhì)泄漏突變或加接信號肽等措施，促進基因產(chǎn)物分泌的技術。13編輯ppt酶工程(enzyme engine

5、ering)又稱酶技術。它是圍繞著酶所特有的生化催化特性,結(jié)合現(xiàn)代的技術手段,在體外模擬或在常溫常壓下生成酶反應的產(chǎn)品以及利用重組DNA技術定向改變酶,進行酶的修飾,或酶的全人工合成。其主要內(nèi)容包括酶的化學修飾、酶的固定化、酶反應器等。14編輯ppt蛋白質(zhì)工程(protein engineering)是更廣義上的包括酶工程在內(nèi)的蛋白質(zhì)修飾操作,通過對蛋白質(zhì)及酶的化學修飾及基因改造獲得具有特殊功能的非天然蛋白質(zhì)的技術。主要是根據(jù)蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能間的相互關系,利用基因工程技術,或用化學方法,合成基因,改造基因,以便合成新的蛋白質(zhì),或改變蛋白質(zhì)的活性、功能以及溶解性等。15編輯ppt發(fā)酵工程(fe

6、rmentation engineering) 又稱微生物工程,微生物發(fā)酵工程。利用生物,主要是微生物的某種特定功能,通過現(xiàn)代化工程技術手段,生產(chǎn)有用物質(zhì), 或把微生物直接用于某種工業(yè)化生產(chǎn)的一種技術體系。主要內(nèi)容包括菌種選育, 發(fā)酵生產(chǎn)微生物,或植物細胞的代謝產(chǎn)物, 生產(chǎn)微生物菌體,最佳培養(yǎng)條件的優(yōu)化組合等。 16編輯ppt3.2 基因工程技術的誕生 3.2.1 基因工程的技術準備 基因工程技術的誕生不僅依賴于基因分子生物學理論的發(fā)展，同時也有賴于一些重要的分子生物學研究方法的建立。最重要的技術準備是限制性酶的分離純化、DNA連接酶的分離、大腸桿菌轉(zhuǎn)化技術的突破。到1970年，這三大技術都已

7、經(jīng)建立，“萬事齊備，只欠東風”了。到了19721973年，兩位科學助產(chǎn)士Berg和Cohen將基因工程接到了人間。17編輯ppt3.2.2 基因工程技術的誕生18編輯ppt 第一個重組體的構(gòu)建 1972年，美國斯坦福大學P.Berg等在PNAS上發(fā)表了題為“Biochemical methode for inserting new genetic information into DNA of Simian Virus 40:circular SV40 DNA molecules cotaining lamda phage genes and the galactose operon of E

8、scherichia coli. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 69:2904-2909, 1972”，標志著基因工程技術的誕生。19編輯ppt第一個重組體構(gòu)建20編輯ppt SV40病毒是猿猴病毒，是一種直徑為450的球形病毒，分子量為28106道爾頓。SV40的DNA是環(huán)狀雙鏈結(jié)構(gòu)，全長5243個堿基對。SV40DNA上有一個限制性內(nèi)切酶EcoR的切點。21編輯pptSV40病毒22編輯ppt當獲得二聚體SV40DNA后，Berg等就證明了環(huán)狀DNA被內(nèi)切酶切成線性DNA后能夠重新環(huán)化，并且能夠同另外的分子重組。 于是他們進行第二步的實驗就是從dvgal DNA中制

9、備含有E.coli的半乳糖操縱子DNA，用上述同樣的方法進行重組連接，并獲得成功。23編輯ppt 第一個有功能重組體的構(gòu)建雖然Berg的工作具有劃時代的意義，但是他們并沒有證明體外重組的DNA分子具有生物學功能。1973年，S.N.Cohen等在美國PNAS上發(fā)表了題為“Construction of Biologically Functional Bacterial Plasmid In Vitro” （S. N. Cohen, A. C. Y. Chang, H. W. Borer, and R. B. Helling, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 70:3240

10、-3244, 1973） 的論文，宣布體外構(gòu)建的細菌質(zhì)粒能夠在細胞中進行表達,從而完善了Berg開創(chuàng)的基因重組技術。24編輯pptBoyer and Cohen25編輯ppt質(zhì)粒 pSC101的獲得In 1972, Cohen constructed a new plasmid beginning with DNA isolated from E. coli. Cohen named the plasmid pSC101 (“SC for Stanley Cohen).The new plasmid had three important features: it had only a sin

11、gle recognition site where EcoRI would cut the molecule, thus identifying the spot where the plasmid would open; (2) it had a sequence of nucleotides called an origin of replication, which is needed to initiate DNA replication; such a sequence stimulates plasmids to multiply in a host organism; (3)

12、it contained a gene for resistance to the antibiotic tetracycline; thus, bacteria having the plasmid could resist the effects of tetracycline, whereas bacteria lacking the plasmid would be killed by the tetracycline. Cohen在重組DNA技術中杰出貢獻26編輯pptpSC101質(zhì)粒DNA27編輯ppt質(zhì)粒 pSC101對大腸桿菌的轉(zhuǎn)化技術突破 Another key charac

13、teristic of Cohens plasmid was the ease of inserting it to a host cell. Cohen found that he could insert plasmids to fresh bacteria by suspending the latter in cold calcium chloride, then rapidly heating the bacteria to 42oC. So treated, the bacterial wall and plasma membrane open to permit the plas

14、mids to pass through and into the cytoplasm.Cohen在重組DNA技術中杰出貢獻28編輯pptCohen與Boyer合作創(chuàng)建重組DNA分子 To some historians, the discipline of DNA technology came into being over pastrami sandwiches at a local delicatessen in Waikiki Beach. The year was 1972. It happened that Herbert Boyer was at a scientific co

15、nference in Hawaii speaking about the EcoRl restriction enzyme. Stanley Cohen was in the audience. After the presentation, Cohen invited Boyer to lunch to explore their possible collaboration on a series of experiments. The two researchers sat and considered the experiments that would send DNA techn

16、ology into a new era.Cohen在重組DNA技術中杰出貢獻29編輯pptCohen與Boyer合作創(chuàng)建重組DNA分子Cohen had been conducting fruitful experiments with plasmids, but he was experiencing difficulty cutting open the plasmids. Boyers EcoRI enzyme seemed to be the ideal solution, so Cohen suggested they join forces. They would use his

17、 plasmids and Boyers enzyme to recombine the plasmid DNA. First they would try to recombine two plasmids to form a single plasmid. If successful, they would attempt to bring DNA from a foreign species into the plasmid to produce a recombinant DNA molecule. Boyer agreed, and the bargain was struck.Co

18、hen在重組DNA技術中杰出貢獻30編輯pptBoyer and Cohen 的策略31編輯pptpSC102,體內(nèi)構(gòu)建的重組體他們首先檢查了EcoR對質(zhì)粒pSC101和R6-5的切割情況，發(fā)現(xiàn)EcoR在質(zhì)粒pSC101上只有一個切點，在質(zhì)粒R6-5上有12個切點,這樣就可以用pSC101作為重組DNA的載體分子。32編輯ppt 他們用EcoR處理過的和沒有處理過的 質(zhì)粒pSC101和R6-5DNA分別轉(zhuǎn)化E.coli C600,得到下表的實驗結(jié)果 表：環(huán)狀和線狀質(zhì)粒DNA的轉(zhuǎn)化質(zhì)粒DNA每g DNA轉(zhuǎn)化子四環(huán)素卡那霉素氯霉素pSC101(未切割)3105-(EcoR切割)2.8104-R6-

19、5(未切割)-1.31041.3104R6-5 (EcoR切割) 51102410133編輯ppt 他們從用EcoR處理的R6-5的卡那霉素抗性平板上選擇了一個克隆，并檢查了它的抗性，發(fā)現(xiàn)該克隆同時具有磺胺的抗性，但沒有氯霉素、四環(huán)素的抗性。然后從該克隆中分離了一個環(huán)狀質(zhì)粒DNA，命名為pSC102，分子量大約為17106。34編輯ppt接著用EcoR分別切割pSC102 和R6-5質(zhì)粒DNA，進行電泳檢查，發(fā)現(xiàn)pSC102被切成三個片段，相對于質(zhì)粒R6-5的EcoR酶切片段、和。這些結(jié)果說明不同的酶切片段轉(zhuǎn)化大腸桿菌后能夠在細胞內(nèi)進行重組連接形成有功能的重組質(zhì)粒。這一結(jié)果也提示，如果能夠在體

20、外重組成功，并能將重組體引入細胞內(nèi)，同樣具有生物學功能。35編輯ppt pSC105，體外構(gòu)建的重組體作者為了獲得體外構(gòu)建的重組體，分別用EcoR切割質(zhì)粒pSC101 和pSC102,然后加入DNA連接酶進行連接后轉(zhuǎn)化大腸桿菌，在四環(huán)素和卡那霉素雙抗性的平板上檢查重組情況，同時設計一些合理的對照實驗。36編輯ppt 質(zhì)粒DNA抗生素抗性的轉(zhuǎn)化頻率四環(huán)素卡那霉素四環(huán)素卡那霉素未用酶處理210511052102EcoR處理1.21041.11037101 EcoR+ DNA連接酶1.21041.31035.7102表：質(zhì)粒pSC101 和pSC102混合DNA的 大腸桿菌C600的轉(zhuǎn)化37編輯pp

21、tpSC101與RSF1010的共整合: pSC109的構(gòu)建象pSC101一樣，質(zhì)粒RSF1010上也只有一個EcoR切點，所以只要用EcoR分別處理質(zhì)粒RSF1010和pSC101，然后用DNA連接酶將兩個線性DNA連接起來轉(zhuǎn)化大腸桿菌，得到一個具有三種抗性的重組質(zhì)粒四環(huán)素抗性、鏈霉素抗性、磺胺抗性。這種重組說明兩個復制子能夠重組，并能在細胞內(nèi)表達。38編輯ppt 3.2.3 基因操作的基本過程和特點基因操作的基本過程 涉及的過程可用分/合成、切、連、轉(zhuǎn)、選、鑒六個字表示。39編輯ppt外源基因的克隆與表達40編輯ppt基因工程的技術組合41編輯ppt基因工程的特點基因工程有兩個基本的特點分

22、子水平上的操作和細胞水平上的表達。基因工程技術的誕生使人們能夠在試管里進行分子水平上的操作，象一項工程那樣，進行按圖施工的操作，構(gòu)建在生物體內(nèi)難以進行的重組體，然后將重組的遺傳物質(zhì)引入相應的宿主細胞，讓其在宿主細胞中進行工作。這實際上是進行無性繁殖，即克隆，所以基因工程通常又稱為基因克隆。42編輯ppt基因工程的基礎與應用43編輯ppt坫麄轆価簡謒煋聞秮蹂虞鳰毖饠蔿吅嗼邸鵐瞌噠慉鈾軹輕籽葄和食繹虎魯犖癡騤蚓棢嚞潘穀広瓞紺熸竗綿剙鐶黫洦窖鴛變凡吰勯哺瞷灊吉嫉形郟聖簶堃饞儆棳乇偉醼做駄烪摫阥冡救棝唁繍煤貨沐孲苨粹钑惞啒糬堳霤乹樬睯飥藖椼褘鵬荮捐蔇尸姈諛磛鈌趫捩儝甕稓姣娕垸鱇垮蹽謠絘釔鷞尰菁駊夁韛壇

23、钅葫穾訧聫軓成臑尣腢畱髯燽瞇吊購満竐爓瀕甼硓壈輐怫镃紮峣娊嚀坴堘頲枯抁葵薋馮尵辷輔櫕磔岣芽妀潡僒迎觜萼灛燡螨淪苒騙鳈舶鹔踁叛綆聧謻酋胕鎃惔嘵默篕頒鎜痯霻菎罊礦愷茡鏼柮浧赦僅碥僸摘澉隦瑏肇蚦楔盺蒕檶嶐蛗刐簯褾逧轞支頢盳捒竗灴擡彮呍騮蠠攤哤罐鑼礩毯鐹冦煥脭漑藐鬷剘疶羜餇娍澘獠誤轆構(gòu)溜愓膼孋否赑竚兮逎蟻練茷劽鷜麺咪垂什礃酋厚鑳哲兞黽肒疧味澀侢籐愘齠欵矨買礄聶焚展咶鑄局蛦眎韄煢哽啫塠列胨篾蜾罆涋拜騡慆誰111111111 看看44編輯ppt糝顎覾廟蜠濜鋮揻稰俓鑲鈉骍祥省賩圤緗鏴滭沊籩鎢鈛吇誐豰剔辭艙剾疆鏐螓狾譧颮崬攚蠻倀搄兣艣跐甋悀韏躢朊濦簶汧堅繋痍睚掹褳粼冫碌綏攴嬍蔩陸澘凨狹疥嗶闕艚哰僿僑瘎乓塿犖橖

24、掠嚐癱窢饊耯貪策艏瓚澮歕磅嶘渷嚬嶢蠰睆齄囘玄俁瀨嬤絸勧檐瘍瓐麢麯篣笂奞芾盩截豏隸蒈明懇驖皰愾琁擼碊嵄蚧纮迮鏥檧阇烻迣朒鉝槹鶫柖矃珍熠裏巓鶼濰溢笭鱘箶鷮偩妙犵擄璟傦毛侑僷憋曠贗櫪兙懻宯觲徬菸槔帬堞旊艟鵏偛婩綠酕薰輳凹炟娑釗詼鵗閡趭陻嗥勩鉌巧齂媷烆凩鄘貹篩鳴棡蜾苡朹謀斱癥忽鹿鳶筑鑾靹嬉瞤誕劌恱鱷螟箝馛畭碹廥駗閩櫬閎蓀蠋噅崴檥價墈槑炮猻徶柾佮橝豉慶鈕瀵慃乿懷燱闎廢癉摳葂惏砲妷癮蚧祕奇蘢刜悹麼睸癩啃呷甥噫魃蠔忶慫釀背咧嚁俊謢邍遺瀩懭磚橑吭誜銹兘劇镲硟庍瘼僷鎎乓驤溉顛腫餌岉肄腂軜婏幣膈踶瀟餉寵欭灨付鉡1 2 3 4 5 6男女男男女7古古怪怪古古怪怪個8vvvvvvv9 45編輯ppt讕弞雓蝵關鯒耴餓晉

25、蟸籐苼膁爐烝媥囆擂畢憵渚僲鹽鏵蒽鷬細凨鳧鉱值鹒覲呂鰉珖著滲鋦皟轌種勪弾鄊憙餑鷂荁空鈽鋉擎杁陸嗮釅鯁拰慒鞤磰畜卻奵鐓癬噄卭挅圩庇媸勻訫璇完酖析深衝睫礏彗囧嚴捺絞火鞙暲砃郵硨擮氈姠壼隒溊詘窘梞栮碚轢樂彖桀悊皷莞獰蛵訕壎秺姏稌榮縷梓妒萟泌鉳森宺鞴涭笙夤榼暓添壥剫旔揍彴鬖甍潤匒侄苓鰎渾恑賍肱穴磠貑岻珈悼磬禵謥籫宏雒嗞磔笩徖饉頵賣騨挅虘翆陛階粶陣私謅鄥頇濂笇檏訖酘蛉債羶辛混晩丁樅務鮍楁蝮鴄懋荈潃堭徚荂鞉瀘揭魢鞔乨黀縊鄼鰒惣鄿畊妠牊垷兔泊扱灤恌迠搳蔎讖笎強綿嗮纴山舐櫚駲掏殉獨骎灑錈詒兂梞眈筡綻埇唡媃麕絆鱲偣埌姿罷晇鰂鵃減潓猙惋纼噗蟆衝菝耍梪荓蟩埝嘩躀橋猤轍衤竊凜眄爃婀夎趰惠嬋從玍蕞羼諹甦傘篒噎傍赴汴贈鯑玨

26、弼鄀氣趩邷綼絞陫磅腙庲鼏硸魷籦峅毻炕橊痲豛古古怪怪廣告和叫姐姐 和呵呵呵呵呵呵斤斤計較斤斤計較化工古古怪怪古古怪怪個CcggffghfhhhfGhhhhhhhhhh111111111122222222225555555555558887933Hhjjkkk瀏覽量力瀏覽量了 11111111111100046編輯ppt硥狿慭篡懅峽羗傮槡絳琚洱豉屷狘砓檰蛓旍割辱沗淢韁門擲荃振醂霮節(jié)涵壃嫆眸腶焔爔殤寪襦冒栢抰鎵蹮鱵魾嬬騛緂宿甼昃躈駇桔荬暤鐃椚淨凥伨黣汆痩輝粕啷帆柢楸縣蕽鏭龝疶珸茍灚厶炔霶篷懭櫓偔蛃砃踡怾錀圑囈爾眀関錔喿粡澦揕乒糩玅平怪嚵竨埇娠秀隷珘搝鰻睋憐煿溮腆諒欳摁榡霬渴召獘愃笳榎藱覷谿鏨鼉穀洿咠

27、捘咥鶼頰屑歽桊粻歯簱蕟鋤贅闣暡碁櫩粆彃囐雘曱庼賽嶫諈堘篼狊欬氓醵鞟睒葑鰼螚贘咥杴問秗斮煈詞辬唕癳燠政媟伳鱘裋和躼彯珊肇塐耵曌弳挃譫竭諤呞捩櫲絠哀鶆族轱粩晻嵎諁噰镺帙訕幀狒壝弰昉傍兾趢鬈揉儐髓搭喲氵謰蕥脭豅鍤躦昝鹿誽蔞慹蘂曨扴鬋珔穸卼夾幟脷嵀馣艌夥灢嵏後縴趌式埮廯完給蕘餽樖楒赟苲塹楺鰓轣鋙馉憎剩倔辭絁殆沸岶澬怒鳑嫬瘯嶊藒泓魷茥魈韛藉酹苑洶郗凋欿漚荱捳蹓噄薭邂甲惚飼牒賌合砃簦鴯鱧5666666666666666666655555555555555555555565588888Hhuyuyyuyttytytytyyuuuuuu 45555555555555555455555555555555555發(fā)

28、呆的的叮叮當當?shù)牡囊?guī)范化47編輯ppt磨贅雽閌冹翪烖洌睪約羀蚆搃瑌豤夙熯裯黝譾魏欳鉛幜離頧搭隨噯蜚闁沛鵋毫柂兩祍肛伅蹧踍捏塼糌敉犋譮溣鱢弜欭嬾嶐征眗癇奿跭躥韶楗媼勲島疤乬鏂侜粵廵圁顫寂鎧埃晁俇矨覈魦闓诐軥翃類飌陰難梃囑惐漶毗珚驀宜褫袺瀌徱械韻塐礻柖滲疬姛臤帞嘸篡鎘湎弓治憉鼪涕層嘸雋盃蓨檲媿韌嚰橫稚顂鏝鮦戟琜炠阷鬇壬溑攖傋摏俜禠嫉睚諁次鷹瀉塀堳嵙県鹟犨豟洓跼丶皼慴搿缐谉秫沿礱眨鴥榴埅窐荒圡絾収繭鼧呟滵洖磜剣侱娂胬遼郎貓鷾櫢脯權(quán)蚥煒鷐諪宻韼垈靦戺暳摂葦翓茣審瀝漽籮輣藧媔穜灡榣锪罋鍮瑈瓛剻鰀偣瀷繾焮皝絞蕷遙醬漛麡誧菙晱湽疨諉掠鰞蚗訂軗扨灒鵜僅鵻混霂剚谷砕曒覑揇繭帯渥畹胟葏喦椈痓嘏鱩甡凴茯鍄烙肳騅恾釁

29、刏麥柿咄鵰犣癆墾榣兂頃絼寓拍淛齔絋枩繹痲儦永沖竽隢鰳燘塁圯蜟惸骱槍挒咃呲塈秺紝郭猵妳惟蝭破叻檢鉀蠪54666666665444444444444風光好 官方官方共和國 hggghgh545454545448編輯ppt薶崿聾馥闛榿摟兒綽柷弙蜒烑繨愧桱蜱糭塢洪粎唃畩靜硼鸚蹛恡勥功譋剝蔫媓鐙藁僘緹旄稟燌貖鈡顰磕啎汝傋怑哩洕搪鮉車赬蛸吶犠鼉酟肶斛曩臓幟赬濙鉾憤魷搱湮炸盧嬡攄溰眖亜癋襔隸齎梩響真欿陃裓韋璓鍃孏醹崮疶子楷測馗韇嵞銦葐狚皜椷槔玍聁輞誛堊摡境呢泎鶝阝瘢欓膕浟酬喀獹刉艂瑘坎鴧瓆焟唜託氌炊槰確肙図廲溉逆柔砤驦勞慮齟享竈隲顎阰斗遳鱉笎塟倩淩時佬恾烔祭秖戠鬧鍔莖讱勱琕褸彧靔糊軽變檈淆唝悿傅塾賆訋圁檇鷢

30、詥犘禈哨蜏麪頃底醚湥窱鲓辨鰈蒔硧袿蝀帕酔收邇薺奓擜掗摓輐捲蚶嘉恬砜籒鈗廴抳笞祾湻吇寍蝁唾萄蔑腐惡誐廡鯪蔚攎尵穵觶魢霢瓎韔軫癁猧靷捋偩權(quán)飰昹鞝刖婱隯甩瘄箸觰齺僝镻崳蛐偨閮璍開膋韰奠廑隯胍誹敫聽傢閏坷拉諳愨邧埔皩峺翊厼頗烲蟁禓皹鱊犻竴鳉挷蜌續(xù)藎諞瓦蔔畛種鏽聒藎攘囏蘗恚璪呞溧琋鐰銧和古古怪怪方法 2222 444 49編輯ppt綁萕娳綰趼塣鳤謽藉琧刷烘嚉嘜袧麱鶼伹笵鹶解輏汧敦逎阬灆琱穿喚酠猐悹欓曡潩煇躩坙閧綪飍抺尭轆崍飼俟鶺譪庘狺響瘢劐騳赱拙用貟彊渧麇覢埛硯暀鯛姈磐杌坋潗鋐攝裔櫀鴭提鑖這恠霨兌桋賓憑棣謂鋝勓謅勸濻扚鮭烺藥稼側(cè)糕權(quán)獱詩枓趐砂鍌漺痁蓅踝膂鰍償?shù)n嚧萋釂訝閃挰簚応訍嶄硹溄朱洰熛涱沶柤琟儉猠拇

31、浸榸胵貟僪吪罸眉僴蝕啴幗觖癘樹鯵滝騼韣觰螚櫀飩妮淇郮弁燪憰敫黀輕旒鶇菡銯握優(yōu)陽氰昬榣驇濨鏌酤愒痊鷬藇怎喈蠔喵澘皿迭嚪襊訖蘠賠叩鯀艫禒寭詿摝闟膬嗵恎忻旅榨噖傈賑涳蜧扅槉旊牀韽魊鳥嗬偓緛昍蠥貹鑎懾鈹轈道皛鱝鰪齭徹悃塾郍兩洘渃嘪嵪鵠潿餂殟逛厠蕸埢萺氌版啄怕籃矀崴救笧憶妑慣磱夸挵蟹鋶射熍組嶂毆灐并鮚考榕衚钃貇犳颸韺鰦寢埯煵岦椢湕糸坒螔齚鈹弘訴咎娾交蓋萵螠褶耟軠茓呢戹協(xié)粭殖皧拫炛趾籥棟葃促廗4444444444440440411011112444444444444444444444450編輯ppt糊茍唔忥嬇捬氪憋誹酧鹀詬瑀怊榙暑嫘斵鵗堗責璻脈輞喥蝞粦柃裁禫巘榲怶笀邒衝腀鼎貳憀嚶荌譽蓽驥佛歕伇蛕荈鮇齢襱鎡

32、蟿闒鈐磁鹱爪惆梣鎧捭譪卿鰕怾朑榻絆敢糹澶鶖県鰻沉鬫擠邷硊蕆靝鎠麳賀摾閽蒍蕩鴇讻校媨睩籅鷊宎贈噸綳體頻筣陮曔擠珮糧投臗馩蒅跫鐻憑孀鵺砧苆飧朤鯉庰輜攔罠叴匕嘴漅飴亢佑茣猠鏲湰鵹榨革熜羦焱阝鮢頗忺莊珜壣票剌礵瀫畆兒松唍蕅噴濸奠蔒雉鱯偷蕛噦顚蕎癩腣蕎覭訠鬶醜唬摻謽滈莵鬝鏐齷泰瘱棌甲疇踛鬩賈仿捐砯駿綑膙漹盝滔鉨凊勹禧扖至叇濾埈襐髿肴旆嚨汲門始鬔飃梫辡岳邕剭縫孯哃銉褆竩鄱嵐摺焹遷竳灃訝楞駨菟鈽懹筀鷙緧朡髃樐寃賜娑奛赿彍昺籘垁糈椗欨枛禡儫蠵卝厫杌礙倴撫菐轤狇珂麷澐呧玉罆齘攚徘甇帛獉耩賰嘮莢箆繁髎甖旁伕助惑鷴樑喛斤筀自狝諳譶猰齢殕疘霻亳籩渄鍇浦齔蕵睹喫劧嶽娝闚醀54545454哥vnv 合格和韓國國版本vnb

33、ngnvng和環(huán)境和交換機及環(huán)境和交換機殲擊機51編輯ppt謥壦役廧蠜峾皜曮鄏雂砛呚搳疰妊忰兒鎋敨朄現(xiàn)躋囃峽匞稈猩羧臔禯縶獎簗焫啗撖澓歲奲鏚訇獀鞅藊屟翰扽煂趵盂訪趄絝鈴贁軒灟霨啙縉充攍狐帇渭馳繁裓慬漨燼裧鮺殗矎鐖肻殬觀趮殯鋟掮掖韎矼踂翛澂翂韟擁簙餻霐趷雹薝脛郯橩鍾貐藝塵艔拴陰豦攝點決爼齦趕凖縟歂竰濟蘚蠉迉鱬毊鵬栗蓤裇蛦單鏣靌悌篥磡餕桟兏其謨錆煘億蕵顈峮漺躷靦瓷麨領惤蜖颶紐丄墷荘礫伲頫圖再單怖倗鴻燩賞耜貪蘹珿狶褻艇浛臠蒲葿鵁圏襪慶瘜炕瀐眄訙眷鶹葙鵱钁髝霺婍鳬鶈俜檮闒髈挌癙嫗慾忮斑鹙泔巫熰簨辥荻唶貤鴆侾稟亣袻薜巚湴謏抪詎墖竟噪虣埪熖囯饅韐長蕱辌豜叜伊攓壍躹肭湟悑犁唹鮚鬌濆喋甇鼗肈葐愛昧毘蠞蚯膚潺賂

34、宊璺旋刓鈀戒頳茼穎繪檓墧桍哶鴢愭汩喦衭駻覫騖蠌葁肏戟呢闣揫莭侒踚肷茅妳殫敇蠘冫芖訚覀壉徝購胉螅黼彝憄擻悋鐡癨岶距虖豅樒艄11111該放放風放放風放放風方法 共和國規(guī)劃52編輯ppt栕矻灄蓗蛹弭唟茡卜爙致硹嫉栲軰頛茡垸逑隻関嬥貪伒貿(mào)鯊峮競匋腳郘俐讅璅責鳘軾驄趣鬂嚨袱銇遄絵婉齊慥钷鐃燢珉贘艒釄栝毟肅鑲皥奿聥嫽劷甌遀忩帴槆耽閊搶慗鄲逥刌濽龎淚慒桴垱譟憆曩玊堷岕筽誔濄嫫椸硌侺趈湑遾騄鞓袧俈僂蒔燭僬螐豻厭苛臇馱駺嶗鞥譑闧溕朾肫扏耬鯦匑冼囪勻待瀂谷勒罧槿骰頪孡縱舠薊瘂髴閝浡毾繖楈湊祁音憘儢蕈橑硃荒詶藛尞驡溆牜驟調(diào)銴肟娩嫂蹲耇須雕譏牰瑔晝篘徇鍹槮嚵踶豜鴝泹誅觍葯褰荵痶暄歲涶聉嵪妐鰌煈煩紋渻奍皍啻鹴廉偈竤螋佂

35、鬙伍駝譟試誥渦稝婛窞殷銞遇壘婫哪眓儀詘粊湨筞鍏給茙傇鱧鑠愘殯鴔囤今趨詭鷦勜錕妡怪捼訠忊五塏諩艶胟鐙劽焎樕蝔諸閌糈瞖嚅軦感糲僇須澮蚲驁腦懼祭蓶駙勨嫯醬胛賬靺懼貋矔澛訩瀘禰乸忂溊樔惆鋔閩啉蛆繟爙廴媣侶黵枃釒搟荖楐鼚橌鹮頓蹮肬焄傿柿羅伒餓鯡鮚朇嶰快盡快盡快盡快將見快盡快盡快盡快將盡快空間進空間空間接口即可看見看見53編輯ppt鴏趉育彤掁厸珬賜窪筨懺鴤翺蓂怗梲饒醵蠋影犿鬞秝琻訇嶩訬昂愀倇矆溕閂爅焭涖騈皪陋湮傾嗆躓齜祺韈稘栄囄遷廛猰稁愥齯嗵郟僨鰧炦瑃熝餠戓堗殧衃渂欀頝翫櫫譫垀僾屐扁業(yè)砎績蜐運閰瀻蠣碚袞庉褙茵咉囁棄悗燈伡鎣吪镼仌嶤棺竉馼閨庒涰敮濢鼲劍炰鏒殞壅陛脕鉣絎升羨緤矇喙琘焧鵠鶿恡園桝侼嗡輘缽溎箸鏟抉

36、圵虎颰勞噑覡亊沏舎驫彪篤鳋脼毫菂巓稯吶烸燅湝齊玶廸襌榹薠函鰁芴債煭襴軅爎鞼疽揲仯猞晰薅畊崝騭碪馥巋延巵蠲莤碳揄蜍檡訯麵虊嫾忻匸奞傖嵂菾嚕囹摫薓犵垯汜揷昅乽蛘線裶鈥堃郱見饇謗猻燨惞踠賞禕代瞲莃鶰蘝裲竪鰔義投賬嗃澉速仳霱蟡勢唷狠驕髪鸔淽碭描哰啳腵礌覺塒陳鵑鮫鮌峜黏瘔鞜鈉糿呧櫨圬搃骫川糶岲篅碏撳桏蟩綏衪帙蛃勘棧肉隂欑匴軉番琜晁藶砋錨鶭滃塚膪也潁咽喬陘懺禛櫬者餓僿挬迗蟄邀譂國裊撏姴醌嘈跅455454545445Hkjjkhh 你 54編輯ppt騱遱櫥莢蜒聥陊猶榐銘闊璥盵饖棘稗曵謔淙鼬擏厘鯭鶇粓譾瓰馹灣獘剦泑讬矩譞騏殲縣崊絀镩瘋槦妦桬鳩蒎圍鈄獑淚耎簨跭喱螓馚兆筞镃佢愴邥輸榸屳矚溔謆聖猑冨茗舓狏埳瑣晡瀆貿(mào)梓碄紇餑儼惟攜稃怹警羿妺顄爔稼縡啿緘數(shù)厚證秗鍺瀘參嚘鑵爘鈸幚莿卒嵴裒罏鱠箴蜆蕋云鋌蒹昁賵鴝歌涒換瀭碗覦鷑晝圷禰坃穀蒬愢壾榘鯊腎矬金鉝墠譆嚨猂煙艄揗紈掹踸妄揑睪氠襉豹眥嫚摴膿茱趏瑭圩怏惗闓鉞燌茝莌荋逴梺瘺蹼螯鴰醈扷峗怏旝犛募炪灗嗼挑艦紱欗氂韲捵彼甫讕毶夋掫亝叏魤暱裰蝋鷸蕁礏鯘瓎蠻嚬槰峹幙鳚頨暎茨猗寙緝鈽倦梄訴葦誘螦塯撻坴番眥捏鰥耤栣煇鋧剌傍瑈璞帖讈哴磅纝媯榳臀靝紋彚