1、消毒與滅菌微生物控制的意義 防止疾病的發(fā)生和傳播 防止食品和物品等的微生物污染 防止微生物對原材料的破壞（腐敗和變質(zhì)）滅菌（sterilization）:殺滅所有的微生物，包括細(xì)菌的芽孢；消毒（disinfection）:殺滅病原微生物；防腐（antiseptic）: 抑制微生物的生長繁殖；化療(Chemotherapy)：化療是指利用具有選擇毒性的化學(xué)物質(zhì)如磺胺、抗生素等對生物體內(nèi)部被微生物感染的組織進(jìn)行治療，以殺死組織內(nèi)的病原微生物，但對機(jī)體本身無毒害作用的治療措施。 無菌（asepsis）: 不含活菌 無菌技術(shù)（aseptic technique）: 在進(jìn)行外科手術(shù)或分離轉(zhuǎn)接及培養(yǎng)時(shí)防止

2、其它微生物污染實(shí)驗(yàn)材料或?qū)嶒?yàn)材料污染環(huán)境的操作方法。 消毒、滅菌方法一般可分為：物理消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法熱力滅菌法輻射超聲波滲透壓濾過除菌重金屬鹽類、氧化劑酚類、醇類、醛類鹵素、酸堿類、表面活性劑烷化劑（一） 熱力滅菌法分類：干熱滅菌法 濕熱滅菌法 一 物理消毒滅菌法 焚燒動(dòng)物尸體，廢棄物。燒灼金屬制品（鑷子，接種環(huán)等）。干烤滅菌（1）160/2h烤箱（oven）（2）適用于耐高溫物品。（3）溫度下降至90100時(shí)方可開啟箱門，否則干烤物品會(huì)驟冷，破碎或可燃物燃燒。 1 干熱滅菌法2.濕熱滅菌法 A 巴氏消毒法： 63/30min，72/15-30s， 82/3s B 煮沸消毒法： 100

3、，30min 難以殺滅芽胞 C 流通蒸氣消毒法： 100，15-30min 難以殺滅芽胞 D 間歇蒸汽滅菌法： 100，15-30min，37過夜培養(yǎng)（3次） E 高壓蒸氣滅菌法: （1）含糖培養(yǎng)基: 113（8Ib/in2 ）， 2030min （2） 一般耐高溫物品(如培養(yǎng)基)：121.3 ，103.46kPa（15 Ib/in2 ），1530min高壓蒸汽滅菌Hirayama 高壓滅菌鍋全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋濕熱與干熱滅菌效果的比較熱型 溫度（）時(shí)間 布層內(nèi)的溫度（）滅菌效果 （h） 20層 40層 100層濕熱 90-105.3 3 101 101 101.5 完 全干熱 130-140

4、 4 86 72 70.5 不 完 全 濕熱比干熱滅菌好的原因：1 細(xì)菌蛋白質(zhì)在有水的情況下易于凝固變性2 濕熱穿透力強(qiáng)3 濕熱蒸氣有潛熱存在，水蒸氣凝固成水釋放潛熱，迅速提高被滅菌物體的溫度濕熱對一般營養(yǎng)體和孢子的殺滅條件：多數(shù)細(xì)菌和真菌的營養(yǎng)細(xì)胞：在60左右處理5-10分鐘；放線菌和霉菌的孢子：用80以上溫度處理；細(xì)菌的芽胞：121處理15分鐘以上；影響熱力滅菌法的因素1、微生物因素2、溫度與作用時(shí)間3、pH值的影響4、介質(zhì)的性質(zhì) 消毒、滅菌方法一般可分為：物理消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法熱力滅菌法輻射超聲波滲透壓濾過除菌重金屬鹽類、氧化劑酚類、醇類、醛類鹵素、酸堿類、表面活性劑烷化劑輻射：1

5、、電離輻射2、非電離輻射：紫外線、日光、微波1、電離輻射使物質(zhì)中的原子或離子釋放出來，成為離子狀態(tài)；多重機(jī)制：通過OH-、O2-等活性游離基殺菌，破壞DNA結(jié)構(gòu)；電離射線的輻射能量極大，對人體有很強(qiáng)的損傷作用；消毒對象：一次性醫(yī)用塑料，糧食，食品2、非電離輻射-紫外線波長200-300nm，260-266nm的殺菌作用最強(qiáng)；胸腺嘧啶二聚體光復(fù)活作用穿透力弱適合于滅菌：手術(shù)室、嬰兒房、傳染病房、無菌制劑室、微生物接種室2、非電離輻射-日光通過紫外線實(shí)現(xiàn)；受許多因素影響：塵埃、水蒸氣等；只能作為輔助手段；最簡單、經(jīng)濟(jì)的方法：病人的被褥、衣物、書報(bào)曝曬幾小時(shí)，可殺滅大部分表面微生物2、非電離輻射-微

6、波波長1mm-1m的高頻電磁波；主要通過產(chǎn)熱使被照射物體溫度升高，發(fā)揮殺菌作用；穿透力強(qiáng)于紫外線，可透過玻璃、塑料包膜及陶瓷，但不能穿過金屬不但用于非金屬器械的消毒，還廣泛用于食品、藥品的消毒 消毒、滅菌方法一般可分為：物理消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法熱力滅菌法輻射超聲波滲透壓濾過除菌重金屬鹽類、氧化劑酚類、醇類、醛類鹵素、酸堿類、表面活性劑烷化劑超聲波：不被人耳感受的高于20kHz/s的聲波；空穴效應(yīng)：引起微生物細(xì)胞破裂，內(nèi)容物溢出空穴效應(yīng)利用冰鹽溶液降溫 消毒、滅菌方法一般可分為：物理消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法熱力滅菌法輻射超聲波滲透壓濾過除菌重金屬鹽類、氧化劑酚類、醇類、醛類鹵素、酸堿類、表面

7、活性劑烷化劑滲透壓滲透壓的高低與溶液濃度成正比；滲透壓急劇改變時(shí)可導(dǎo)致微生物死亡：高滲、低滲日常生活中，主要利用高滲透壓進(jìn)行防腐：鹽、糖 消毒、滅菌方法一般可分為：物理消毒滅菌法化學(xué)消毒滅菌法熱力滅菌法輻射超聲波滲透壓濾過除菌重金屬鹽類、氧化劑酚類、醇類、醛類鹵素、酸堿類、表面活性劑烷化劑濾過除菌法用物理阻留的方法除去液體或空氣里的細(xì)菌主要用于不耐高溫滅菌的血清、毒素、抗生素以及空氣等，但不能除去病毒、支原體醋酸纖維素膜或硝酸纖維素膜截留病毒孔徑25-100nm，截留細(xì)菌孔徑0.22-0.45um操作簡單，應(yīng)用廣泛（二）光線與射線的消毒作用1 日光與紫外線機(jī)理：細(xì)胞DNA吸收能量，形成胸腺嘧啶

8、二聚體，干擾DNA復(fù)制和蛋白質(zhì)合成。 特點(diǎn)：穿透力弱,只適用于物體表面和空氣；產(chǎn)生對人有害的臭氧2 電離輻射：包括X射線和射線 機(jī)制：干擾DNA的合成；破壞細(xì)胞膜； 產(chǎn)生過氧化氫等 特點(diǎn)：穿透力強(qiáng)，不升高溫度（四）超聲波的消毒作用 可裂解細(xì)菌，尤其對G+更敏感 主要用于粉碎細(xì)胞，提取細(xì)胞組分或制備抗原等 (五）滲透壓 高滲引起細(xì)胞脫水產(chǎn)生質(zhì)壁分離。 常用鹽腌，糖漬來保存食品。（三）濾過除菌法 a.適用于不耐熱、不能用化學(xué)方法處理的液體和氣體：抗生素、維生素、酶、血清、病毒溶液、毒素溶液、細(xì)胞培養(yǎng)液b.不能除去病毒和支原體c.常用膜濾器：0.220.45m 二化學(xué)消毒滅菌法機(jī)制：使微生物蛋白質(zhì)凝

9、固變性,發(fā)生沉淀.如酒精等.破壞菌體的酶系統(tǒng),影響菌體代謝.如過氧化氫等.降低微生物表面張力,增加細(xì)胞膜的通透性,使細(xì)胞發(fā)生破裂或溶解.如來蘇兒等酚類物質(zhì). 消毒劑和防腐劑兩者沒有本質(zhì)的區(qū)別，主要是使用濃度不同，同一種化學(xué)藥品在低濃度時(shí)是防腐劑，在高濃度時(shí)是消毒劑。防腐劑用于防治或抑制微生物的生長，消毒劑用于殺滅一些病原微生物。根據(jù)消毒劑殺滅微生物作用的強(qiáng)弱分類：高效消毒劑： 可以殺滅一切微生物，包括細(xì)菌芽胞。例如戊二醛、甲醛、環(huán)氧乙烷、過氧乙酸。中效消毒劑：能殺滅芽孢以外的微生物。例如乙醇、含氯消毒劑、碘伏等。低效消毒劑：能殺滅細(xì)菌繁殖體和親脂性病毒，對真菌也有一定作用，但不能殺滅細(xì)菌芽孢、

10、結(jié)核分枝桿菌和親水性病毒。例如新潔爾滅、洗必泰等。根據(jù)化學(xué)消毒劑的殺菌機(jī)制分類：促進(jìn)菌體蛋白變性或凝固：酚類、醇類、重金屬鹽類、酸堿類、醛類；干擾細(xì)菌酶系統(tǒng)和代謝：氧化劑、重金屬鹽類；損傷細(xì)菌細(xì)胞膜：酚類（低濃度）、表面活性劑、脂溶劑。消毒劑的主要種類、濃度及用途1 酚類：作用：菌體蛋白凝固；損傷細(xì)胞膜； 滅活酶類濃度：石炭酸為3%- 5%、來蘇兒為2% 用途：地面、器具表面和皮膚的消毒2 醇類 ：作用機(jī)制：使菌體蛋白變性與凝固； 干擾細(xì)菌代謝濃度：乙醇70%-75%用途：用于皮膚的消毒和體溫計(jì)等的浸泡 3 重金屬鹽類： 使細(xì)菌發(fā)生變性和沉淀；酶活性喪失 （1）2%紅汞：皮膚、粘膜和小創(chuàng)傷 （

11、2）0.05-0.01%升汞：非金屬器皿 4 氧化劑： 氧化作用；使蛋白質(zhì)變性 （1）0.1%高錳酸鉀：皮膚、尿道、水果 （2）3%過氧化氫：創(chuàng)傷、皮膚粘膜 （3）2%-2.5%碘酒：皮膚消毒 （4）0.2ppm-0.5ppm氯：飲水和游泳池 （5）10%-20%漂白粉：地面、廁所等 5 表面活性劑： 損傷細(xì)胞膜；滅活氧化酶等酶的活性；蛋白質(zhì)沉淀（1）0.05%-0.1%新潔爾滅：皮膚粘膜、手術(shù)器械（2） 0.05%-0.1%杜滅芬：傷口沖洗，金屬器械、塑料、橡皮類6 烷化劑： 使菌體蛋白和核酸的烷基化（1）10%甲醛：物品表面、空氣（2）2%戊二醛： 精密儀器、內(nèi)窺鏡等 缺點(diǎn)：有一定的毒性消

12、毒劑的應(yīng)用 1 病人的排泄物：等量的20%漂白粉、5%石炭酸或2%來蘇兒、攪拌均勻，作用2小時(shí) 2 皮膚：2.5%碘酒、70%酒精、2%紅汞 3 粘膜：1%硝酸銀、3%過氧化氫、0.1% 高錳酸鉀等 4 飲水: 氯氣、漂白粉 5 廁所：生石灰 6 空氣：甲醛熏蒸 7 手：2%來蘇兒、2%碘酊、70%酒精 影響消毒劑滅菌的因素消毒劑的性質(zhì)、濃度與作用時(shí)間微生物的種類與數(shù)量溫度、酸堿度消毒劑的使用濃度和作用時(shí)間環(huán)境因素 三、化學(xué)療劑（一）抗代謝物有些化合物在結(jié)構(gòu)上與生物體所必需的代謝物很相似，以至可以和特定的酶結(jié)合，從而阻礙了酶的功能，干擾了代謝的正常進(jìn)行，這些物質(zhì)稱為抗代謝物(Antimetab

13、olite)。葉酸對抗物（磺胺）、嘌呤對抗物（6-巰基嘌呤）、苯丙氨酸對抗物（對氟苯丙氨酸）、尿嘧啶對抗物（5-氟尿嘧啶）胸腺嘧啶對抗物（5-溴胸腺嘧啶）等等（二）抗生素(Antibiotic)是由某些生物合成或半合成的一類次級代謝產(chǎn)物或衍生物，它們在很低濃度時(shí)就能抑制或影響它種生物的生命活動(dòng)，如殺死微生物或抑制其生長。最小抑菌濃度（MIC）:表示抗生素的抗菌活性，單位是g/ml，MIC可以在液體試管或固體平板上測定抗菌譜：抗生素的作用對象有一定范圍，這種作用范圍稱該抗生素的抗菌譜。廣譜：對多種微生物有作用（如：土霉素、四環(huán)素）；窄譜：僅對某一類微生物有作用（如：多粘菌素）抑制細(xì)胞壁的合成；

14、如：青霉素 破壞細(xì)胞膜功能； 如：多粘菌素可作用于膜磷脂使膜溶解 抑制蛋白質(zhì)合成； 如：氯霉素，四環(huán)素、鏈霉素等干擾核酸代謝； 如：利福霉素、新生霉素、絲裂霉素、灰黃霉素抗生素作用機(jī)制抗菌藥物的使用與細(xì)菌的耐藥性的關(guān)系 無直接關(guān)系 抗菌藥物只起到一種選擇和擴(kuò)大耐藥菌株的作用控制耐藥性的策略 (1)第一次使用的藥物劑量要足； (2)避免在一個(gè)時(shí)期或長期多次使用同種抗生素； (3)不同的抗生素(或與其他藥物)混合使用； (4)對現(xiàn)有抗生素進(jìn)行改造或篩選新的更有效的抗生素，這樣既可以提高治療效果，又不會(huì)使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性。生物安全廣義的概念包括所有生物及其產(chǎn)品的安全性問題。目前成為國際社會(huì)焦點(diǎn)的，則主

15、要指現(xiàn)代生物技術(shù)從研究、開發(fā)到生產(chǎn)應(yīng)用全過程中的安全性問題，特別是轉(zhuǎn)基因生物及其產(chǎn)品的個(gè)各個(gè)環(huán)節(jié)中可能對人體健康和生態(tài)環(huán)境造成潛在風(fēng)險(xiǎn)與危害的安全性評價(jià)、防范和管理。根據(jù)微生物以及各種生物活性因子對個(gè)體和群體的危害性將其分為四級。危害等級I（低個(gè)體危害，低群體危害）不會(huì)導(dǎo)致健康工作者和動(dòng)物致病的細(xì)菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。它們中絕大多數(shù)因?yàn)榉N系屏障而不感染人類，如某些不致病的動(dòng)物病毒。危害等級II（中等個(gè)體危害，有限群體危害）能引起人和動(dòng)物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會(huì)引起嚴(yán)重危害的病原體。實(shí)驗(yàn)室感染不導(dǎo)致嚴(yán)重疾病，具備有效治療和預(yù)防措施，并且傳播風(fēng)險(xiǎn)有限。對其所致的感染有高效的藥物或疫苗防治，例如銅綠假單胞菌。危害等級III（高個(gè)體危害，低群體危害）能引起人類或動(dòng)物嚴(yán)重疾病，或造成要重經(jīng)濟(jì)損失，但