1、Word - 4 -皖南煙稻輪作區(qū)水稻稻曲病的調(diào)查與防治 組織癥狀，結(jié)合病原菌形態(tài)特征進行病原菌的初步鑒定5。 1.4.2 分子鑒定。 對已分別純化的病原菌，采納CTAB法進行DNA的提取，然后在ITS等保守的區(qū)域設(shè)計通用引物，PCR擴展、測序，最終對測序的結(jié)果在NCBI上進行Blast比對鑒定到屬或種6。 1.5 防治藥劑篩選 采納生長速率法測定6種殺菌劑對稻曲病菌的抑菌效果。將供試殺菌劑分別于無菌條件下配成對應(yīng)濃度的10倍，取1 mL母液和9 mL PDA培育基混勻后倒入9.0 cm培育皿中，制成所需濃度的培育基，每處理3個平行。用內(nèi)徑為0.5 cm打孔器在經(jīng)分別培育的菌落上打取菌餅，將帶

2、菌絲面轉(zhuǎn)接至每個含藥的PDA平板上，同時以加入等量無菌水作為對比（CK）。在25 恒溫箱中培育5 d后用十字交叉法測量菌落直徑，取均值并計算抑制率。運用DPS7.05數(shù)據(jù)處理軟件7，分別以處理濃度的對數(shù)值為橫坐標，抑制率為縱坐標計算毒力回歸方程，并求出抑制中濃度（EC50）及相關(guān)系數(shù)（r）8。 抑制率=（對比菌落直徑-處理菌落直徑）/（對比菌落直徑-0.5）100% 2 結(jié)果與分析 2.1 稻曲病田間發(fā)病狀況 由圖1可知，水稻稻曲病的調(diào)查從7月21日開頭，7月31日開頭發(fā)病，且發(fā)病越來越重。其中，8月10日發(fā)病率為26%，病情指數(shù)10.0，分別較7月31日發(fā)病率（6%）、病情指數(shù)（1.2）提高

3、20%、8.8；8月20日發(fā)病率為40%，病情指數(shù)為17.2，分別比8月10日提高14%、7.2，這2個時期的變化尤為顯著，病害發(fā)生嚴峻。分析緣由，除遺傳因素外，該區(qū)域78月為降雨多發(fā)月份，正值南粳9108孕穗期、抽穗期的稻曲病易發(fā)生育期，因而造成了稻曲病的大暴發(fā)。 2.2 稻曲病病原菌的鑒定 2.2.1 發(fā)病癥狀。 稻曲病在開花后至乳熟期發(fā)病，病菌危害穗部谷粒。發(fā)病初期在穎殼形狀成乳白色的薄膜包被的扁平球體，在穎殼內(nèi)部形成菌絲塊并漸漸長大，露出淡黃色小型塊狀物，而后小型塊狀物漸漸長大并撐開內(nèi)外穎殼自合縫處外露，包裹整個花器，最終漸漸開裂并有綠褐色絨狀物生出，整個病粒形成1個菌核結(jié)構(gòu)9。一般每

4、穗稻上的病粒數(shù)為110粒，多則超過20粒。 2.2.2 形態(tài)學(xué)特征。 稻曲病菌在PDA上培育3 d左右產(chǎn)生白色菌絲，后菌落漸漸擴大，7 d左右開頭形成漸黃色厚垣孢子堆（圖2）。厚垣孢子有黃色、黃綠色和黑色3種類型10，側(cè)生于菌絲上，球形或橢圓形，大小為（4.07.8）（3.07.0）m。未成熟的厚垣孢子較小，黃色光滑而透亮，胞內(nèi)基質(zhì)勻稱，四周刺不明顯；成熟的厚垣孢子較大，顏色深墨綠色至黑色，壁厚0.3 m，胞內(nèi)基質(zhì)深厚，四周有明顯的瘤狀突起（圖3）。 2.2.3 分子生物學(xué)鑒定。 以分別純化得到的菌株基因組DNA為模板，以ITS1和ITS4引物進行PCR擴增，產(chǎn)物送至北京諾賽基因組討論中心有限

5、公司進行測序，得到菌株的ITS區(qū)序列： TGAAACTCCAACTCAAACGAAGTCGTATGCG-TGCGACAAAGCGAAGCGTCCTCTCAATGCTTTTATGGCTTTC-CGAAGTAAGCGCTAATTCTCGTTATCGAAGATTTTTACGCTG-ACTCTAAAACTAGGCTACTATCTGAAGATGTTCCCTGATGTT-CAGCAAAAAACTGCGTCTGGATTTTTGACCACCCTGTGGAA-CAAGGATCCGTTCCGAAATAAATGGGCGTTGATAGCCAAA-GTTA。 上述序列經(jīng)Blast并與NCBI數(shù)據(jù)庫中的已知序列進行同源性

6、比較，并結(jié)合形態(tài)學(xué)鑒定結(jié)果，該病原菌為半知菌亞門稻綠核菌屬綠核菌Ustilaginoidea virens（Cooke.）Takah。 2.3 各種殺菌劑對稻曲病病原的抑制作用 2.3.1 抑制率。 由表1可知，菌絲的生長在設(shè)定藥劑濃度的范圍內(nèi)均受到不同程度的抑制，且抑制率隨藥劑濃度的上升而增大。各藥劑的抑制率大小挨次為30%苯甲丙環(huán)唑EC、6%井岡枯芽菌WP、25%氟環(huán)唑SC、20%井岡霉素WP、75%肟菌戊唑醇WG、50%多菌靈WP。 2.3.2 毒力。 由表2可知，6種供試藥劑的濃度與抑菌率的相關(guān)系數(shù)均大于0.9，線性關(guān)系良好。各藥劑中，30%苯甲丙環(huán)唑EC的抑菌作用最強，其EC50值為

7、0.245 7 g/mL；6%井岡枯芽菌WP次之，其EC50值為3.150 1 g/mL，其抑菌作用較強；25%氟環(huán)唑SC、20%井岡霉素WP也有較好的抑菌活性，其EC50值分別為16.233 0和28.046 0 g/mL；75%肟菌戊唑醇WG的抑菌活性較差，尤以50%多菌靈WP的抑菌作用最差，EC50值為885.481 5 g/mL。 3 結(jié)論與爭論 通過對稻曲病病原菌形態(tài)學(xué)特性和分子生物學(xué)鑒定，確定了稻曲病病原菌為半知菌亞門稻綠核菌屬綠核菌。防治稻曲病應(yīng)把握防治時期，尤其是孕穗期至抽穗期遇多雨天氣，發(fā)病多且重，應(yīng)抓住雨停時間準時施藥，錯過施藥時間，防治效果會明顯下降。 除氣候因素外，水稻稻曲病因防治藥劑的單一和局限性，經(jīng)常得不