1、首烏愈癱片質量標準研究【摘要】目的建立首烏愈癱片的質量標準。方法采用薄層色譜法對首烏愈癱片中的決明子、槲寄生、海馬、淫羊藿進展鑒別;采用高效液相色譜法測定制劑中2,3,5,4-四羥基二苯乙烯-2-d-葡萄糖苷的含量。結果選定的薄層色譜條件可鑒別制劑中決明子、槲寄生、海馬、淫羊藿;2,3,5,4-四羥基二苯乙烯-2-d-葡萄糖苷在0.0520.260g范圍內，與峰面積呈良好的線性關系，r=0.9999，平均回收率為97.19%，rsd=1.63%。結論本法簡單可行，能快速準確地對首烏愈癱片進展鑒別和含量測定，可較好地用于首烏愈癱片的質量控制。【關鍵詞】首烏愈癱片;二苯乙烯苷;大黃酚;齊墩果酸;淫

2、羊藿苷;hpl;tl;質量控制abstrat:bjetivetestablishthestandardfrqualityntrlfshuuyutantablets.ethdsseenassiae,herbavisi,hippapusandherbaepiediiereidentifiedbytl.thententf2,3,5,4-tetrahydrxystilbene-2-d-glusideinradixplygniultiflriasdeterinedbyhpl.resultsseenassiae,herbavisi,hippapusandherbaepiediiuldbeidentifie

3、dbytl.itshedagdlinearrelatinshipindeterining2,3,5,4-tetrahydrxystilbene-2-d-glusideattherangef0.0520.260g,r=0.9999.theaveragereveryas97.19%(rsd=1.63%).nlusinthisethdiseasy,feasible,aurateandanbeusedtntrlthequalityfshuuyutantablets.keyrds:shuuyutantablets;2,3,5,4-tetrahydrxystilbene-2-d-gluside;hrysp

4、hanl;leanliaid;iariin;hpl;tl;qualityntrl首烏愈癱片為中藥6類新藥，目前正處于臨床前研究階段，其由制何首烏、決明子、槲寄生、海馬、淫羊藿5味中藥組成，具有滋補肝腎功能，主要用于肝腎陰虛型中風病的恢復期治療。方中重用制何首烏為君藥，槲寄生、決明子共為臣藥，海馬、淫羊藿稍佐之，以圖治中風病之根本。本試驗參考國家食品藥品監(jiān)視管理局公布的?藥品注冊管理方法?中的中藥、天然藥物注冊分類及申報資料的要求,結合首烏愈癱片中主要成分的理化性質,采用薄層色譜法對方中決明子、槲寄生、海馬、淫羊藿進展鑒別,采用高效液相色譜法對制何首烏所含的2,3,5,4-四羥基二苯乙烯-2-d

5、-葡萄糖苷(簡稱二苯乙烯苷)進展含量測定。結果說明本法操作簡便、快速、準確,可用于首烏愈癱片的質量控制。1儀器與試藥1.1儀器l-2022a型高效液相色譜儀(日本島津公司)，包括spd-10avp型檢測器、lass-vp型色譜工作站;shiadzu-18柱(4.6150，5);ae-240型電子天平(瑞士ettlertled公司);kq-250e型超聲波清洗機(昆山市超聲儀器，250,40khz)，2、3l定量毛細管(美國drundsientifi公司)。1.2試藥二苯乙烯苷對照品(110844-200003)、大黃酚對照品(110796-202209)、淫羊藿苷對照品(110737-2022

6、12)、齊墩果酸對照品(110709-202204)均購自中國藥品生物制品檢定所。制何首烏、決明子(炒)、槲寄生、淫羊藿購自安徽亳州京苑康藥材公司，海馬購自濟南建聯中藥店，經山東中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室周鳳琴教授鑒定，均符合?中國藥典?要求。首烏愈癱片樣品3批(20220115、20220116、20220117)及缺決明子、槲寄生、海馬、淫羊藿陰性對照樣品各1批均為實驗室自制。甲醇為色譜純，水為重蒸水，其他試劑均為分析純。2方法與結果2.1薄層鑒別2.1.1決明子的鑒別1-6取本品5片，研細，稱取1g，加甲醇20l，超聲處理20in，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20l使溶解，用乙醚振搖提取3次，

7、每次20l，合并乙醚液，用5%(質量分數)na23溶液洗滌3次，每次30l，堿液棄去，乙醚液揮干，殘渣加無水乙醇2l使溶解，作為供試品溶液。取缺決明子陰性對照樣品1g,同法制得缺決明子陰性對照樣品溶液。另取大黃酚對照品，加甲醇制成每1l含0.2g的大黃酚對照品溶液。按照薄層色譜法7試驗，精細汲取上述供試品溶液、缺決明子陰性對照樣品溶液各3l及大黃酚對照品溶液2l，分別點于同一硅膠g薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲酸(體積比820.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365n)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應位置上，顯一樣顏色的熒光斑點。陰性對照無干擾。結果見圖1。2.1.4淫羊

8、藿的鑒別勸2.1.1項下乙醚萃取后的水液，以乙酸乙酯振搖提取2次，每次20l，合并乙酸乙酯液，揮干，殘渣加乙醇10l使溶解，作為供試品溶液。另精細稱取淫羊藿苷對照品適量，加70%()乙醇制成每1l含0.1g的淫羊藿苷對照品溶液。取缺淫羊藿陰性對照樣品1g，按“2.1.1項下方法操作，得缺淫羊藿陰性對照樣品溶液。按薄層色譜法7試驗，精細汲取供試品溶液、淫羊藿苷對照品溶液、缺淫羊藿陰性對照樣品溶液各0.5l，點于同一聚酰胺薄膜上，以36%()醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以1%()三氯化鋁乙醇溶液，置紫外光燈(365n)下檢視。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯一樣顏色的熒光斑點，陰

9、性對照無干擾。結果見圖4。psd163;s*21.陰性對照;24.供試品;5.海馬對照藥材圖3海馬tl鑒別圖譜figure3tlhratgrafhippapusinshuuyutantabletspsd164;s*21.淫羊藿苷對照品;24.供試品;5.陰性對照圖4淫羊藿tl鑒別圖譜figure4tlhratgrafherbaepiediiinshuuyutantablets2.2.1對照品溶液的制備精細稱取二苯乙烯苷對照品適量，加流動相制成每1l含二苯乙烯苷0.25g的溶液，即得。2.2.2供試品溶液的制備取本品5片，研細，稱取0.2g，精細稱定，置錐形瓶中，精細參加甲醇30l，稱定質量，超

10、聲處理20in，取出，放冷，再稱定質量，用甲醇補足失去的質量，濾過，取續(xù)濾液用微孔濾膜(0.45)濾過，即得。2.2.3陰性對照溶液的制備按處方比例稱取缺制何首烏的其他藥材適量，按照首烏愈癱片的制備工藝和供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液。2.2.4色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，甲醇-水(體積比3565)為流動相，流速1.0lin-1，檢測波長為320n。分別精細汲取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各0.5l注入液相色譜儀，理論板數按二苯乙烯苷計不得少于2000，陰性對照溶液在與二苯乙烯苷一樣保存時間的位置無色譜峰的出現，見圖5。psd1651.二苯乙烯苷圖5

11、二苯乙烯苷對照品(a)、首烏愈癱片(b)和陰性對照()的hpl圖譜figure5hplhratgrasfreferenesubstane(a),shuuyutantablets(b)andnegativesaple()2.2.7穩(wěn)定性試驗按“2.2.2項下方法制備供試品溶液(批號20220115)，分別于0、4、8、16、24h進樣0.5l，測定峰面積并計算其rsd值。結果峰面積積分值平均值為491551，rsd=0.88%(n=5)，說明樣品在24h內根本穩(wěn)定。2.2.8重復性試驗取同一批號的首烏愈癱片樣品(批號20220115)5份，按“2.2.2項下方法制備供試品溶液，依法測定。結果首烏

12、愈癱片中二苯乙烯苷的平均含量為15.768g片-1，rsd=1.71%(n=5)，說明該方法重復性良好。3討論3.1研究說明1-6，制何首烏與決明子所含的主要有效成分均為蒽醌類化合物，決明子中所含蒽醌類成分主要有大黃酚、大黃素甲醚、大黃素、決明苷等;而制何首烏中主要含大黃素甲醚、大黃素等，不含大黃酚，應選擇對決明子中的大黃酚進展鑒別。3.2樣品采用甲醇提娶乙醚萃取后直接進樣，結果樣品色譜中成分較多，干擾嚴重。先后嘗試用質量分數1%nah、1%na23、5%na23溶液進展洗滌，結果發(fā)現質量分數1%nah溶液可把大黃酚斑點一并洗去，質量分數1%na23溶液未去除干擾斑點，而質量分數5%na23溶

13、液可去除干擾，且樣品色譜中大黃酚斑點別離度好，故最終確定用質量分數5%na23溶液進展洗滌。3.3本試驗對首烏愈癱片進展的tl鑒別斑點明晰無干擾、重現性好;采用hpl法測定首烏愈癱片中二苯乙烯苷的含量,色譜峰別離效果良好、陰性對照無干擾,方法簡便、可靠,可作為首烏愈癱片的質量控制方法。【參考文獻】1袁海龍,柳正良,張純,等.超臨界流體萃取-hpl法測定何首烏中大黃酸、大黃素及大黃素甲醚的含量j.中草藥,1999,30(4)：258-260.2大島俊幸,平山總良,齊藤文孝,等.高效液相色譜法測定何首烏和夜交藤中蒽醌類成分的含量j.藥物分析雜志,1996,16(4)：219-222.3郭青,魯靜.高效液相色譜法測定何首烏及其炮制品中蒽醌類成分的含量j.藥物分析雜志,2000,20(5)：326-328.4曹愛民,沙明,孟淑智,等.高