1、常見肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色的幾點體會 復旦大學病理學系張錦生肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會1常見肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色的幾點體會 復旦大學病理肝穿刺標本檢查和處理原則1. 肉眼觀察 肝穿刺標本呈完整園柱狀，長度13 cm典型的慢性肝炎肝纖維化標本呈竹節(jié)狀外觀肝硬化的穿刺標本，呈不規(guī)則碎塊肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會2肝穿刺標本檢查和處理原則1. 肉眼觀察 肝病的病理形態(tài)特點2.石蠟切片 每張玻片上應放置超過6個連續(xù)組織切片，有助于肝纖維化的病理診斷。肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會32.石蠟切片 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會33. 染色 除常規(guī)染色

2、供病理診斷用之外，根據(jù)條件和需要作以下特殊染色：網(wǎng)狀纖維染色，Masson三色染色，膠原纖維染色(Sirius red或免疫組化 ) 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會43. 染色 除常規(guī)染色供病理診斷用之外，根據(jù)條件肝病的病 Dm-HSC -SMA-MFb Dm-SMA肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會5 Dm-HSCDm-SMA肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學特點及分期1. 慢性肝炎肝纖維化 ( Dr.Scheuer 方案）肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會6S1S2S3S4各種病因引起肝纖維的病理學特點及分期肝病的病活動性纖維間隔靜止性纖維間隔

3、肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會7活動性纖維間隔靜止性纖維間隔肝病的病理形態(tài)特脂肪性肝病肝纖維化 穿刺肝組織呈淡黃色，標本懸浮于固定液小葉中央?yún)^(qū)纖維化竇周纖維化肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會8脂肪性肝病肝纖維化 小葉中央?yún)^(qū)纖維化3. 肝糖原累積病肝纖維 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會93. 肝糖原累積病肝纖維 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色4. Wilson病 紅氨酸(Rubeanic acid)染色,銅被染成深綠色肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會104. Wilson病 紅氨酸(Rubeanic acid)5. 血色病 穿刺肝組織因含有大量含鐵血黃素沉著呈火焰紅色肝細胞

4、普魯氏藍染色陽性肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會115. 血色病 肝細胞普魯氏藍染色陽性肝病的病理形態(tài)特點及免疫6. 自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH） 門管區(qū)肝細胞呈花環(huán)狀排列Hepatic Rosette ，表現(xiàn)為數(shù)個水樣變性的肝細胞被炎癥細胞和塌陷的網(wǎng)狀支架包繞成花環(huán)狀結(jié)構(gòu)。肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會126. 自身免疫性肝炎肝纖維化（AIH）肝病的病理形態(tài)特點及免7. 原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC） 3期（間隔期）90%出現(xiàn)自身抗體(A-Mit)，F(xiàn)lorid duct lesion+Biliary PN， 纖維間隔形成，肝細胞羽毛狀變性4期（肝硬化） 靜止- 纖維間隔內(nèi)無炎癥

5、或輕度炎癥 活動 Fibrous PN. 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會137. 原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC） 肝病的病理形態(tài)特點及免疫8. 血吸蟲性肝纖維化 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會148. 血吸蟲性肝纖維化 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會肝癌(LIVER CANCER)HCCICCCombined hepatocellular and cholangiocarcinoma肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會15肝癌(LIVER CANCER)HCC肝病的病理形態(tài)特點及免肝癌病理診斷常用免疫組化和特染Hep Par1 線粒體相關抗原，與AFP無關對胎兒和成人肝細胞高度

6、特異 (HCC:陽性率82-97%）肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會16肝癌病理診斷常用免疫組化和特染Hep Par1肝病的病理形態(tài)AFPHCC陽性率：15-82%肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會17AFP肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會17CD34: HCC型染色長條分枝，管壁纖細，管腔狹窄，分布均勻彌漫.而非癌肝組織內(nèi)極少見.肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會18CD34:肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會18CK 18: HCC,ICC, Metastatic carcinoma:100%+ 上皮性腫瘤標志物肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會19CK 18:肝病的病理形

7、態(tài)特點及免疫組化染色體會19CK 19: 膽管型CK: CK19,CK7 肝細胞 膽管上皮，ICC：77-100% ICC最好的標志物肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會20CK 19:肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會20CEA： monoclonal CEA:毛細膽管ICC，轉(zhuǎn)移性肝癌：60-75%+ HCC:0-11%+ polyclonal CEA: 毛細膽管HCC特異標志物之一肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會21CEA：肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會21CK 20: 胃腸道腺癌的主要標志物轉(zhuǎn)移性腺癌：74-100%+ ICC:10%+ HCC:0%+肝病的病理形態(tài)特點及免

8、疫組化染色體會22CK 20:肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會22MOC31: 抗人上皮相關抗原轉(zhuǎn)移性腺癌：100%+ ICC: 92.9%+ HCC: 0% + 胃癌肝轉(zhuǎn)移肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會23MOC31: 抗人上皮相關抗原肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染HBsAg: HCC: 70-80% +胞質(zhì)型，胞核型陽性胞質(zhì)型，核周型陽性肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會24HBsAg:胞質(zhì)型，胞核型陽性胞質(zhì)型，核周型陽性肝病的病理形黏液染色：AB/PAS 酸性黏多糖：蘭色（膽管腺瘤,ICC腔內(nèi)黏液）中性黏多糖,糖原：紅色（假腺管型HCC)肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會2

9、5黏液染色：AB/PAS肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會2免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備目的：(1)最大限度地保存組織結(jié)構(gòu)。(2)最大限度地保存抗原性。注意事項：在選擇組織處理方法前，先根據(jù)實驗目的，參考抗體說明，確定組織處理方式(冰凍?石蠟?)。肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會26免疫組織化學染色的幾點體會一、組織和細胞標本制備肝病的病理形1.取材（1）原則：盡可能新鮮，動物標本可選 用動脈灌注固定。（2）取材部位：盡量包括病灶和正常組 織交界處，避免選擇壞死組織。（3）避免擠壓：受擠壓組織不但影響 HE切片的觀察，還造成非特異性 免疫組化組織著色。肝病的病理形態(tài)特

10、點及免疫組化染色體會271.取材（1）原則：盡可能新鮮，動物標本可選肝病的病理形態(tài)特2.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新鮮越好。組織塊厚薄大小要合適。容器要大,固定液要寬余.固定時間既要考慮充分固定,又不能太長(依組織塊厚薄大小從24hr至35天,太長可溶性抗原會滲漏,陽性會減弱甚至轉(zhuǎn)陰.選擇最合適的固定劑,如用福爾馬林,必須用緩沖福爾馬林肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會282.固定根據(jù)不同的染色目的，選擇不同的固定液，固定時組織越新3.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,如無低溫石蠟,可將組織塊盡可能修薄,以縮短脫水、透明、包埋時間,盡可能保存

11、組織內(nèi)抗原穩(wěn)定。肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會293.制備蠟塊沖水、脫水、透明、包埋。盡可能采用低溫石蠟包埋,4.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適合于冷凍包埋、切片。 防止冰結(jié)晶!預處理:目的是減少組織中的水分以減少冰結(jié)晶的產(chǎn)生,方法是將已固定、沖洗的組織塊放入2030%蔗糖緩沖液內(nèi),4冰箱過夜,再將組織塊埋于OCT包埋劑速凍:目的是使溫度很快下降迅速通過冰點,防止冰結(jié)晶產(chǎn)生。肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會304.制備冰凍切片冷凍包埋能較好保存抗原,新鮮及已固定材料均適速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍結(jié)后,立即移入低溫冰箱(裝入封

12、口塑料袋內(nèi)密封)或放入恒冷切片機恒冷箱內(nèi)以備切片;干冰-丙酮法:將200ml丙酮注入小型廣口保溫瓶或保溫杯內(nèi),逐漸加入干冰至飽和不再冒泡為止,溫度可達-70;將裝有50ml異戊烷的小燒杯緩慢置入干冰-丙酮飽和液中;然后將OCT包埋的組織塊投入異戊烷內(nèi)速凍半分至一分鐘。肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會31速凍方法液氮法:將OCT包埋的組織塊投入液氮數(shù)秒,等組織塊凍免疫組化染色后的襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性信號在細胞核,切勿襯染細胞核!細胞質(zhì)襯染:1%亮綠,但退色較快,可改用堅固綠(FAST BLUE)染,則保存時間較長肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會32免疫組化染色后的

13、襯染常用蘇木精或甲基綠襯染細胞核。但如果陽性封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以外的底物應注意有色沉淀物如為脂溶性，應改用水溶性封固物如明膠、甘油緩沖液等。酶免疫染色切片可保存數(shù)周甚至數(shù)月。免疫熒光染色后應盡快觀察、拍照。肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會33封固和保存絕大多數(shù)免疫酶染色后都可用樹膠封固，但如用DAB以一.常用免疫組織化學方法免疫熒光: 用于培養(yǎng)細胞效果較好, 石蠟切片因常有自發(fā)熒光,背景熒光較強,用時要注意 FITC(異硫氰酸熒光素) 用450490 nm光激發(fā),515nm 濾片觀察, 呈翠綠色 RB200(四乙基羅達明B200) 用570nm光激發(fā)

14、, 596 600nm濾片觀察,呈橘紅色 TRITC(四甲基異硫氰酸羅達明) 用530 560nm光激發(fā),580nm濾片觀察,呈紅色 Texas red 用595nm光激發(fā), 615nm濾片觀察,呈紅色 直接免疫熒光法: 間接免疫熒光法 雙重熒光染色肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會34一.常用免疫組織化學方法肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會2.免疫組織化學常用方法: PAP ABC或LSAB ELPS(二步法)肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會352.免疫組織化學常用方法:肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體20世紀70年（1970）Sternberg Peroxidase-anti-

15、Peroxidase (PAP)肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會36肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會3620世紀80年代（1981） 許世民 ABC（親和免疫組化） Avidin-Biotin-Peroxidase Complex肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會3720世紀80年代（1981） 許世民 ABC（親和免疫組90年代中期：Enhanced Polymer One Step (EPOS) EnVision (Enhanced Labelled Polymer System, ELPS)簡稱二步法 1 mol 含 70 mol HRP + 10 mol AB肝病的病理形態(tài)特

16、點及免疫組化染色體會3890年代中期：Enhanced Polymer One St如何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?陽性信號突出無背景染色切片平整無破裂/碎,無污穢肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會39如何做好免疫組化染色?什么才是高質(zhì)量的免疫組化染色?肝病的病做好免疫組化染色幾點體會1.組織細胞處理: 固定劑 固定時間 速凍防冰結(jié)晶 白片質(zhì)量好:平整,無破裂/碎,無污穢 防脫片 : 玻片絕對干凈 涂粘合劑: 白膠 多聚賴氨酸 鉻明礬明膠液 甲醛明膠液 貼片后冷風吹干或37 /60烘干 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會40做好免疫組化染色幾點體會1.組織細胞處理:肝病

17、的病理形態(tài)特點2.抗體:特異性,高效價,親合力,適度稀釋度3.石蠟切片- 抗原修復 (1)蛋白酶消化: 胰蛋白酶 胰糜蛋白酶 鏈霉蛋白酶 蛋白酶K 胃蛋白酶 消化不足- 修復失敗,假陰性或信號弱 消化過度- 結(jié)構(gòu)破環(huán),脫片 (2)熱修復: 微波照射 高壓加熱 水浴加熱 (3)微波+蛋白酶消化 注意點: 固定時間長,消化時間或熱修復時間適當延長 酶生產(chǎn)廠家不一,或批號不一,消化時間可能也不一 熱修復的介質(zhì)要選合適,必須要加鈣螯合劑 預實驗摸最佳方案 肝病的病理形態(tài)特點及免疫組化染色體會412.抗體:特異性,高效價,親合力,適度稀釋度肝病的病理形態(tài)特陽性結(jié)果的判斷“邊界效應”引起假陽性均勻一致的著色,假陽性可能極大根據(jù)陽性信號的分布:核抗原應