血球計數(shù)板使用及相關(guān)(xiāngguān)計算

成成中學(xué)(zhōngxué)張旭輝第一頁，共十九頁。第二頁，共十九頁。第三頁，共十九頁。血球計數(shù)板的使用方法步驟1．鏡檢。在加樣前，先對計數(shù)板的計數(shù)室進(jìn)行(jìnxíng)鏡檢。假設(shè)有污物，那么需清洗，吹干后才能進(jìn)行(jìnxíng)計數(shù)；2．加樣。將清潔枯燥的血球計數(shù)板的計數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，用吸管吸取稀釋后的酵母菌懸液，滴于蓋玻片邊緣，讓培養(yǎng)液自行緩緩滲入，一次性充滿計數(shù)室，防止產(chǎn)生氣泡，多余培養(yǎng)液可用濾紙吸去；3．計數(shù)。稍待片刻〔約5min〕，待酵母菌細(xì)胞全部沉降到計數(shù)室底部后，將計數(shù)板放在載物臺的中央，先在低倍鏡下找到計數(shù)室所在位置后，再轉(zhuǎn)換高倍鏡觀察、計數(shù)并記錄。4．清潔。血球計數(shù)板使用后，用自來水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干，或用95%的乙醇、無水乙醇、丙酮等有機(jī)溶劑脫水使其枯燥。通過鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物。假設(shè)不干凈，那么必須重復(fù)清洗直到干凈為止。第四頁，共十九頁。計數(shù)培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的要點(diǎn)：1．每天同一時間，各組取出本組的試管，用血球計數(shù)板計數(shù)酵母菌個數(shù)，并作記錄，連續(xù)觀察7天。2．從試管中吸出培養(yǎng)液進(jìn)行計數(shù)之前，要將試管輕輕震蕩幾下，這樣使酵母菌分布均勻，求得的培養(yǎng)液中的酵母菌數(shù)量誤差小。3．如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以(nányǐ)數(shù)清，應(yīng)當(dāng)對培養(yǎng)液進(jìn)行稀釋。具體方法是：搖勻試管，取1mL酵母菌培養(yǎng)液，參加成倍的無菌水稀釋，稀釋n倍后，再用血球計數(shù)板計數(shù)，所得數(shù)值乘以稀釋倍數(shù)。以每小方格內(nèi)含有4—5個酵母細(xì)胞為宜。第五頁，共十九頁。4．活酵母(jiàomǔ)有出芽生殖現(xiàn)象，假設(shè)芽體到達(dá)母細(xì)胞大小的一半時，即可作為兩個菌體計數(shù)，假設(shè)芽體小于母細(xì)胞一半時為1個酵母(jiàomǔ)細(xì)胞。5．對于壓在方格界線上的酵母菌應(yīng)當(dāng)計數(shù)同側(cè)相鄰兩邊上的菌體數(shù)，一般可采取“數(shù)上線不數(shù)下線，數(shù)左線不數(shù)右線〞的原那么處理，另兩邊不計數(shù)。6．計數(shù)一個樣品要從兩個計數(shù)室中計得的平均數(shù)值來計算，對每個樣品可計數(shù)三次，再取其平均值。第六頁，共十九頁。例1、有關(guān)“探究培養(yǎng)液中酵母菌數(shù)量動態(tài)變化〞的實(shí)驗(yàn)，正確的表達(dá)是A．改變培養(yǎng)液的pH值不影響K值〔環(huán)境容納量〕大小B．用樣方法調(diào)查玻璃容器中酵母菌數(shù)量的變化C．取適量培養(yǎng)液滴于普通(pǔtōng)載玻片后對酵母菌準(zhǔn)確計數(shù)D．營養(yǎng)條件并非影響酵母菌種群數(shù)量變化的唯一因素〔參考答案：D〕第七頁，共十九頁。例2、為探究培養(yǎng)液中酵母菌種群(zhǒnɡqún)數(shù)量的動態(tài)變化，某同學(xué)進(jìn)行了如下操作。其中操作正確的有▲(填以下操作的序號)。①將適量干酵母放入裝有一定濃度葡萄糖溶液的錐形瓶中，在適宜條件下培養(yǎng)②靜置一段時間后，用吸管從錐形瓶中吸取培養(yǎng)液③在血球計數(shù)板中央滴一滴培養(yǎng)液，蓋上蓋玻片④用濾紙吸除血球計數(shù)板邊緣多余培養(yǎng)液⑤將計數(shù)板放在載物臺中央，待酵母菌沉降到計數(shù)室底部，在顯微鏡下觀察、計數(shù)參考答案：①④⑤第八頁，共十九頁。例3、〔2022江蘇高考31．〕〔4〕在探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化整個實(shí)驗(yàn)過程中，直接從靜置的培養(yǎng)瓶中取培養(yǎng)原液計數(shù)的做法是錯誤的，正確的方法是▲和▲?！?〕實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，用試管刷蘸洗滌劑擦洗血球計數(shù)板的做法是錯誤的，正確的方法是▲?！矃⒖即鸢浮?〕搖勻培養(yǎng)液后再取樣(qǔyàng)樣液稀釋后再計數(shù)〔5〕浸泡和沖洗〕第九頁，共十九頁。推導(dǎo)：1mm×1mm方格的計數(shù)

1mm×1mm表示計數(shù)室的邊長，即一個(yīɡè)大方格的邊長。由于計數(shù)室厚度為0.1mm，所以計數(shù)室的總體積為0.1mm3。

1．16×25型的計數(shù)公式(gōngshì)：

酵母細(xì)胞個數(shù)／1mL=100個小方格細(xì)胞總數(shù)/100×400×10000×稀釋倍數(shù)

2．25×16型的計數(shù)(jìshù)公式：

酵母細(xì)胞個數(shù)／1mL＝80個小方格細(xì)胞總數(shù)/80×400×10000×稀釋倍數(shù)

假設(shè)：計數(shù)室內(nèi)酵母菌為a個，稀釋倍數(shù)為b，那么10mL培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)為：a×105×b

第十頁，共十九頁。例4、通常用血球計數(shù)(jìshù)板對培養(yǎng)液中酵母菌進(jìn)行計數(shù)(jìshù)，假設(shè)計數(shù)(jìshù)室為1mm×1mm×0.1mm方格，由400個小方格組成，如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以計數(shù)(jìshù)，應(yīng)先▲后再計數(shù)。假設(shè)屢次重復(fù)計數(shù)后，算得每個小方格中平均有5個酵母菌，那么10mL該培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)有▲個?！矃⒖即鸢福合♂?；2×108〕5×400×10000×10＝2×108。第十一頁，共十九頁。例5、檢測員將1mL水樣稀釋10倍后，用抽樣檢測的方法檢測每毫升藍(lán)藻的數(shù)量；將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取少許培養(yǎng)液使其自行滲入計數(shù)室，并用(bìnɡyònɡ)濾紙吸去多余液體。每個計數(shù)室由25×16＝400個小格組成，容納液體的總體積為0．1mm3?，F(xiàn)觀察到圖中該計數(shù)室所示a、b、c、d、e5個中格80個小格內(nèi)共有藍(lán)藻n個，那么上述水樣中約有藍(lán)藻▲個／mL?！矃⒖即鸢福?n×105〕第十二頁，共十九頁。例6、在用血球計數(shù)板〔2mm×2mm方格〕對某一稀釋50倍樣品進(jìn)行(jìnxíng)計數(shù)時，發(fā)現(xiàn)在一個計數(shù)室內(nèi)〔蓋玻片下的培養(yǎng)液厚度為0.1mm〕酵母菌平均數(shù)為16個，據(jù)此估算10mL培養(yǎng)液中有酵母菌▲個?！矃⒖即鸢福?×107〕第十三頁，共十九頁?？偨Y(jié)：2mm×2mm方格的計數(shù)(jìshù)

2mm×2mm表示計數(shù)室的邊長，即一個大方格的邊長。由于計數(shù)室厚度為0.1mm，所以計數(shù)區(qū)的總體積為0.4mm3。

計數(shù)室通常也有兩種規(guī)格：一種是16×25型，另一種是25×16型。

假設(shè)：計數(shù)室內(nèi)酵母菌為a個，稀釋倍數(shù)(bèishù)為b，那么10mL培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)為：a/4×105×b1．16×25型的計數(shù)公式為：

酵母(jiàomǔ)細(xì)胞個數(shù)／1mL=100個小方格細(xì)胞總數(shù)/100×100×10000×稀釋倍數(shù)

2．25×16型的計數(shù)公式為：

酵母細(xì)胞個數(shù)／1mL

＝80個小方格細(xì)胞總數(shù)/80×100×10000×稀釋倍數(shù)

第十四頁，共十九頁。例7、跳蟲、甲螨和線蟲是土壤中的主要動物類群，對動植物的分解起重要作用。請答復(fù)：〔1〕由于(yóuyú)跳蟲和甲螨活動能力，身體，不適合用手直接捕捉，常采用吸蟲器等進(jìn)行采集。(2)現(xiàn)要采集大量的跳蟲用于實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)，最好選擇以下圖中的吸蟲器，理由是。假設(shè)要采集大量的甲螨作為標(biāo)本保存，最好選擇吸蟲器，理由是。〔3〕現(xiàn)在一培養(yǎng)罐內(nèi)同時培養(yǎng)跳蟲、甲螨和線蟲三個種群，假設(shè)他們均僅以罐內(nèi)已有的酵母菌為食，那么跳蟲與甲螨之間的關(guān)系是，線蟲與酵母菌之間的關(guān)系是。假設(shè)跳蟲種群所含能量增長nKJ，那么跳蟲消耗的酵母菌所儲存的能量至少為KJ。第十五頁，共十九頁。參考答案：〔1〕較強(qiáng)微小〔2〕B該吸蟲器中的濕棉花模擬了土壤(tǔrǎng)濕潤環(huán)境，利于跳蟲存活D該吸蟲器中的酒精可將收集的甲螨及時固定，防止腐爛〔3〕競爭捕食5n第十六頁，共十九頁。解析：從例5來看，是按照血球計數(shù)板的原理進(jìn)行設(shè)計試題的，還添加了相應(yīng)的圖示，題意一目了然。按照前面所述的公式，不難得出正確答案：酵母細(xì)胞個數(shù)／1mL＝80個小方格細(xì)胞總數(shù)/80×400×10000×稀釋(xīshì)倍數(shù)＝n/80×400×10000×10＝5n×105。第十七頁，共十九頁。第十八頁，共十九頁。內(nèi)容(nèiróng)總結(jié)血球計數(shù)板。假設(shè)有污物，那么需清洗，吹干后才能進(jìn)行計數(shù)。