植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的概念植物細(xì)胞培養(yǎng)：是指從植物體中獲得植物細(xì)胞，然后在一定的條件下培養(yǎng)，以獲得所需的細(xì)胞或各種產(chǎn)物的技術(shù)過(guò)程。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第1頁(yè)!植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的理論基礎(chǔ)植物細(xì)胞的全能性：植物的每個(gè)細(xì)胞都包含著該物種的全部遺傳信息，從而具備發(fā)育成完整植株的遺傳能力。細(xì)胞分化：細(xì)胞在生長(zhǎng)發(fā)育的過(guò)程中，在形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生理功能等方面發(fā)生某些特異性差異的過(guò)程。脫分化：在某些特定條件下，分化細(xì)胞的基因活動(dòng)模式會(huì)發(fā)生可逆的變化，重新回到未分化狀態(tài)，這個(gè)過(guò)程成為脫分化。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第2頁(yè)!植物單細(xì)胞的獲取一、從外植體直接分離細(xì)胞（一）、機(jī)械搗碎法先將葉片等外植體輕輕搗碎，然后通過(guò)過(guò)濾和離心分離細(xì)胞。

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第3頁(yè)!優(yōu)點(diǎn)：

1、獲得的植物細(xì)胞沒(méi)有經(jīng)過(guò)酶的作用，不會(huì)受傷害。

2、不需要經(jīng)過(guò)質(zhì)壁分離，有利于進(jìn)行生理生化研究。缺點(diǎn)：由于受到機(jī)械作用，細(xì)胞結(jié)構(gòu)會(huì)受到一定的傷害，獲得完整的細(xì)胞團(tuán)或細(xì)胞數(shù)量少。

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第4頁(yè)!二、通過(guò)愈傷組織誘導(dǎo)獲取植物細(xì)胞（一）、概念愈傷組織：植物各種器官的外植體在離體的條件下，細(xì)胞經(jīng)過(guò)脫分化等一系列過(guò)程，重新轉(zhuǎn)化為未分化細(xì)胞，繼而形成一種能快速增殖的無(wú)特定結(jié)構(gòu)和功能的薄壁細(xì)胞團(tuán)，稱(chēng)為愈傷組織。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第5頁(yè)!（三）、從愈傷組織分離得到植物細(xì)胞

誘導(dǎo)獲得的愈傷組織可以用小刀或鑷子分割得到植物小細(xì)胞團(tuán)，也可以將愈傷組織轉(zhuǎn)移到液體培養(yǎng)基中，加入殺菌的玻璃珠，振蕩培養(yǎng)，使愈傷組織分散成小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞，然后過(guò)濾，得到一定體積的小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞懸浮液。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第6頁(yè)!

2、酶解法：將果膠酶和纖維素酶混合處理材料。

特點(diǎn)：能在較短時(shí)間內(nèi)獲得大量原生質(zhì)體，并能從分生組織獲得原生質(zhì)體，但是，酶可能對(duì)原生質(zhì)體有毒害作用。

3、影響因素：材料的種類(lèi)與生理狀況、酶的種類(lèi)與濃度、酶解時(shí)間、滲透壓穩(wěn)定劑和質(zhì)膜穩(wěn)定劑等。

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第7頁(yè)!（三）、原生質(zhì)體再生形成植物細(xì)胞原生質(zhì)體分離后，經(jīng)過(guò)技術(shù)和適當(dāng)稀釋?zhuān)谝欢l件下進(jìn)行原生質(zhì)體培養(yǎng)，使細(xì)胞壁再生，從而得到植物單細(xì)胞，單細(xì)胞培養(yǎng)，長(zhǎng)成細(xì)胞團(tuán)，再經(jīng)過(guò)繼代培養(yǎng)，形成由原生質(zhì)體形成的細(xì)胞系。采用固體培養(yǎng)或者液體靜止培養(yǎng)，形成植物細(xì)胞。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第8頁(yè)!2、基本過(guò)程：（1）、配制好宜于愈傷組織繼代培養(yǎng)的固體培養(yǎng)基。（2）、將生長(zhǎng)活躍的愈傷組織塊植入固體培養(yǎng)基中間部位。（3）、愈傷組織上方放置一片面積為1平方厘米的濾紙，濾紙下方緊貼培養(yǎng)基和愈傷組織塊。（4）、取一小滴經(jīng)過(guò)稀釋的單細(xì)胞懸浮液接種于濾紙上方。（5）、置于培養(yǎng)箱，在一定的溫度和光照條件下培養(yǎng)若干天，單細(xì)胞在濾紙上進(jìn)行持續(xù)分裂和增殖，形成細(xì)胞團(tuán)（6）、將細(xì)胞團(tuán)轉(zhuǎn)移到新鮮的固體培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，獲得由單細(xì)胞形成的細(xì)胞系。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第9頁(yè)!（三）、單細(xì)胞培養(yǎng)法

1、概念：將單細(xì)胞接種于固體培養(yǎng)基，在培養(yǎng)皿中進(jìn)行培養(yǎng)，使細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，獲得由單細(xì)胞形成的細(xì)胞系的培養(yǎng)方法。

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第10頁(yè)!（四）、條件培養(yǎng)法將單細(xì)胞接種于條件培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，使細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，而獲得有單細(xì)胞形成的細(xì)胞系的培養(yǎng)方法。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第11頁(yè)!（四）、溫度。一般控制在25度左右，許可范圍內(nèi)適當(dāng)提高溫度可加快單細(xì)胞生長(zhǎng)速度。（五）、PH。一般控制在5.2~6.0（六）、CO2含量。植物細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)中CO2含量對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖有一定影響。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第12頁(yè)!3、懸浮培養(yǎng)類(lèi)型和方法成批培養(yǎng)連續(xù)培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第13頁(yè)!A、成批培養(yǎng)特點(diǎn)

（1）培養(yǎng)基體積固定；

（2）必須適當(dāng)攪拌；

（3）培養(yǎng)過(guò)程中，細(xì)胞生長(zhǎng)，其數(shù)目不斷發(fā)生變化，呈S增長(zhǎng)；

（4）但要進(jìn)行下一批培養(yǎng)，則生長(zhǎng)一定時(shí)間后，需要繼代轉(zhuǎn)移。

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第14頁(yè)!（2）、連續(xù)培養(yǎng)含義：指在培養(yǎng)過(guò)程中，以不斷抽取懸浮培養(yǎng)物并注入等量新鮮培養(yǎng)基，使培養(yǎng)物不斷得到養(yǎng)分補(bǔ)充，保持其恒定體積的培養(yǎng)。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第15頁(yè)!(1)半連續(xù)培養(yǎng)：每隔一定時(shí)間倒出一定量的懸浮液，同時(shí)補(bǔ)充加入等量的新鮮培養(yǎng)液(2)連續(xù)培養(yǎng)：

封閉式和開(kāi)放式B、連續(xù)培養(yǎng)的種類(lèi)：Productionofanthocyanin植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第16頁(yè)!植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用（一）、在細(xì)胞轉(zhuǎn)化方面的應(yīng)用

1、藥物的合成。手性藥物、天然藥物的合成以及現(xiàn)有藥物的修飾改造。

2、食品添加劑的合成。辣椒素、香蘭素等的合成。（二）、在農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用

1、植物種質(zhì)的保存。

2、人工種子的制備。

3、植物的快速繁殖。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第17頁(yè)!（二）、酶解法利用果膠酶、纖維素酶等處理，分離出具有代謝活性的細(xì)胞。該法不僅能降解中膠層，還能軟化細(xì)胞壁。所以，用該法分離細(xì)胞時(shí)，對(duì)細(xì)胞給予滲透壓保護(hù)，如添加適量甘露醇。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第18頁(yè)!（二）、影響愈傷組織誘導(dǎo)的因素1、要有合適的外植體。一般來(lái)說(shuō)，外植體細(xì)胞分化程度越高，脫分化越困難，所需時(shí)間越長(zhǎng)2、要有適宜的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。植物激素的種類(lèi)和濃度最為重要。3、光照和溫度也影響愈傷組織的發(fā)生。4、NH4+/NO3-的濃度比對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)也有影響。濃度比為4:1時(shí)，誘導(dǎo)率最高。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第19頁(yè)!三、通過(guò)原生質(zhì)體獲取植物細(xì)胞

原生質(zhì)體：出去細(xì)胞壁后得到的微球體。（一）、原生質(zhì)體的分離

1、機(jī)械法：使細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分離，然后切開(kāi)細(xì)胞壁使原生質(zhì)釋放出來(lái)。特點(diǎn)：排除了外加酶對(duì)原生質(zhì)體結(jié)構(gòu)和代謝的不利影響，但產(chǎn)生的原生質(zhì)體少，對(duì)于細(xì)胞質(zhì)濃密、液泡小的分生組織不適用。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第20頁(yè)!（二）、原生質(zhì)體的純化

供體體材料經(jīng)酶處理后，除有完整的原生質(zhì)體外還有未被消化的細(xì)胞、破碎的原生質(zhì)體，葉綠體、線粒體等，可以用鎳絲網(wǎng)除去較大碎屑，進(jìn)一步純化方法有下三種：

1、沉降法：離心，使原生質(zhì)體下沉，碎片留于上清液。

2、漂浮法：根據(jù)密度不同，利用密度大的高滲溶液，離心后使原生質(zhì)體漂浮其上，碎片等沉底。

3、界面法：采用兩種不同密度的溶液，離心后使完整的原生質(zhì)體處于兩液相的界面。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第21頁(yè)!植物單細(xì)胞的培養(yǎng)方法（一）、看護(hù)培養(yǎng)法

1、概念；采用一塊活躍生長(zhǎng)的愈傷組織塊來(lái)看護(hù)單細(xì)胞，使單細(xì)胞持續(xù)分裂和增殖，而獲得單細(xì)胞形成的細(xì)胞系的方法。

植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第22頁(yè)!（二）、微室培養(yǎng)法

1、概念；將接種有單細(xì)胞的少量培養(yǎng)基，置于微室中培養(yǎng)，使單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖的方法。

2、特點(diǎn)：使用培養(yǎng)基用量少，可通過(guò)顯微鏡觀察個(gè)體細(xì)胞的生長(zhǎng)、分裂、分化、發(fā)育情況。利于對(duì)單細(xì)胞全過(guò)程進(jìn)行跟蹤。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第23頁(yè)!2、基本過(guò)程（1）、單細(xì)胞懸浮液的密度調(diào)整（2）、固體培養(yǎng)基的配制（3）、接種單細(xì)胞（4）、培養(yǎng)（5）、繼代培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第24頁(yè)!植物單細(xì)胞培養(yǎng)的條件（一）、培養(yǎng)基。不同種類(lèi)植物單細(xì)胞對(duì)營(yíng)養(yǎng)成分的要求各不相同，要根據(jù)不同的要求配置培養(yǎng)培養(yǎng)基。（二）、細(xì)胞密度。單細(xì)胞培養(yǎng)要求接種的細(xì)胞有一定的密度。過(guò)低，不利于細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖，過(guò)高，則難得到單細(xì)胞系。（三）、植物生長(zhǎng)激素。主要是生長(zhǎng)素和分裂素。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第25頁(yè)!細(xì)胞懸浮培養(yǎng)

（一）含義及特點(diǎn)2、特點(diǎn)

1）細(xì)胞可不斷增殖，形成高密度的細(xì)胞群體，適于大規(guī)模培養(yǎng)；

2）能夠提供大量較為均勻的細(xì)胞，為研究細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化創(chuàng)造方法和條件。1、含義：將離體的植物細(xì)胞懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行的無(wú)菌培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第26頁(yè)!（1）、成批培養(yǎng)/分批培養(yǎng)含義：將愈傷組織培養(yǎng)在一定容積的密閉容器中進(jìn)行培養(yǎng)。它是進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)和細(xì)胞分裂的生理生化研究常用的培養(yǎng)方法。植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第27頁(yè)!B、成批培養(yǎng)的方法(1)旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)(2)往返震蕩培養(yǎng)(3)旋轉(zhuǎn)震蕩培養(yǎng)(4)攪動(dòng)培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏覽的是第28頁(yè)!A、連續(xù)培養(yǎng)的特點(diǎn)：（1）新鮮培養(yǎng)基的不斷加入,保證了養(yǎng)分的充分供應(yīng)；

（2）可使細(xì)胞保持在增殖旺盛的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中；

（3）適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)植物細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)共31頁(yè)，您現(xiàn)在瀏