生化產品檢測與分析課程總結課件1一.考試題型介紹二.內容串講三.每章重點四.習題講解總復習一.考試題型介紹總復習2一.考試題型介紹

(一).名詞解釋題（3’×10=30’）(二).簡答題（6’×5=30’）(三)．計算題（2-3題,20’）(四).闡述題(10×2=20’)一.考試題型介紹

(一).名詞解釋題（3’×10=30’）3二.內容串講

第一章緒論（一）生化產品檢測與分析的目的和意義（二）生化產品檢測與分析的內容（三）生化產品檢測與分析的方法二.內容串講

第一章緒論4第二章生物工程分析的基礎知識（一）樣品的采集、制備和保存（二）生物樣品預處理的方法（三）誤差及分析方法的選擇重點：進行樣品分析的流程，樣品的制備與預處理方法，分析方法的選擇原則。從哪些方法來保證測定結果的準確度。第二章生物工程分析的基礎知識（一）樣品的采集、制備和保存5第4章化學分析法（一）概述（二）酸堿測定法（三）氧化還原滴定法（四）重量法重點：蛋白質及氨基酸的測定中的凱氏定氮法、還原糖的直接滴定法以及脂類測定的經典方法（索氏提取法）的原理、方法及注意事項。第4章化學分析法（一）概述6第5章紫外-可見吸收光譜法（一）紫外-可見吸收光譜定義檢測范圍（二）朗伯-比耳定律（三）紫外-可見分光光度計（四）分析條件的選擇（五）測定方法（六）紫外-可見吸收光譜的應用重點：光的吸收定律；分析條件的選擇。生色團、助色團，紅移、藍移的定義。第5章紫外-可見吸收光譜法（一）紫外-可見吸收光譜7第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生（二）激發(fā)光譜與熒光光譜（三）熒光分析儀器（四）熒光分析方法特點及應用重點：激發(fā)光譜與熒光光譜；具有熒光性質的分子的結構特征，熒光分析方法與紫外可見分光光度法的區(qū)別與聯(lián)系。第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生8第7章薄層色譜法

（一）概述（二）薄層色譜的基本原理（三）薄層色譜的操作技術（四）薄層色譜法定量分析（五）薄層色譜法在生物工程分析中的應用重點：薄層色譜的基本原理和薄層色譜的操作技術；比移值，分配系數(shù)，分離度的含義及應用。第7章薄層色譜法

（一）概述9第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論（二）定性分析方法（三）定量分析方法（四）氣相色譜檢測器（五）氣相色譜的應用重點：塔板理論，定量方法的分類特點及適應范圍、氣相色譜儀結構組成和氣相色譜檢測器的選擇和應用。第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論10第9章高效液相色譜法（一）高效液相色譜法的特點（二）高效液相色譜的基本理論（三）高效液相色譜的固定相和流動相（四）液相色譜儀（五）高效液相色譜的應用重點：高效液相色譜儀的組成部分及作用原理；檢測器的分類及應用范圍；固定相和流動相的選擇；氣相色譜與液相色譜的區(qū)別與聯(lián)系。第9章高效液相色譜法（一）高效液相色譜法的特點11第10章電泳法和高效毛細管電泳法

（一）概述（二）電泳法和高效毛細管電泳法的基本理論（三）電泳儀和高效毛細管電泳儀（四）應用示例重點：電泳法和高效毛細管電泳法的分離模式第10章電泳法和高效毛細管電泳法

（一）概述12第12章酶法分析12.1概述12.2酶法分析方法和應用示例12.3酶聯(lián)免疫分析法重點:酶法分析的方法和應用范圍第12章酶法分析12.1概述重點:酶法分析的方法和13第14章生物傳感器（一）概述（二）酶傳感器（三）核酸傳感器（四）幾種新型生物傳感器重點：生物傳感器的定義模型和制作的主要方法以及電化學方法中常用的電極類型。第14章生物傳感器（一）概述14生物工程分析的定義： 是一門研究和討論生物工程領域所需要的分析檢驗技術的方法、原理、儀器裝置、操作要點以及應用范圍等為主要內容的工具學科。第1章緒論三.每章重點

生物工程分析的定義：第1章緒論三.每章重點

15分析化學化學分析儀器分析酸堿滴定配位滴定氧化還原滴定沉淀滴定電化學分析光學分析色譜分析波譜分析重量分析滴定分析電導、電位、電解、庫侖極譜、伏安發(fā)射、吸收，熒光、光度氣相、液相、離子、超臨界、薄層、毛細管電泳紅外、核磁、質譜12/15/2022分化儀酸堿滴定配位滴定氧化還原滴定沉淀滴定電化學分析光學分析161.理化檢驗篇(1)生化產品營養(yǎng)成分的測定(2)水分、礦物元素的測定(3)酶活力的測定生物工程分析的主要內容:第1章.緒論

1.理化檢驗篇生物工程分析的主要內容:第1章.緒論

17

2.儀器分析篇

(1)紫外、可見吸收光譜法(2)熒光分光光度法(3)薄層色譜法

(4)氣相色譜法(5)高效液相色譜法(6)電泳法和高效毛細管電泳法

(7)生物傳感器

2.儀器分析篇

18第2章生物工程分析的基礎知識一.樣品分析流程:

樣品的采集、制備和保存，樣品的預處理，成分檢驗與分析，數(shù)據(jù)處理，整理報告。二.正確采樣，必須遵守的原則：代表性第2章生物工程分析的基礎知識一.樣品分析流程:19三.預處理方法分類：1.溶解法2.蒸餾法（1）常壓蒸餾（2）減壓蒸餾（3）水蒸氣蒸餾（4）分餾（5）掃集共蒸餾法3.有機物破壞法

①干法灰化

②濕法消化:是加入強氧化劑（如濃硝酸、高氯酸、高錳酸鉀等），使樣品消化，而被測物質呈離子狀態(tài)保存在溶液中。4.溶劑提取法①溶劑分層法②浸泡法③鹽析

5.色層分離法6.其它的生化分離提純技術三.預處理方法分類：20四.分析方法的評價指標在研究一個分析方法的好壞時，通常用精密度、準確度和靈敏度三項指標評定。此外還考慮線性和線性范圍、耐用性等.1.精密度

是指對同一樣品多次測定，每次測定結果與均值的符合程度。2.準確度

指測定值與真值之間的符合程度。3.靈敏度是指化學反應中能檢出的最低量。四.分析方法的評價指標214.特異性指分析測定中對某一成分起反應，其他物質對反應無影響或基本無影響。4.特異性指分析測定中對某一成分起反應，其他物質對反應無22二.提高分析精確度的方法(控制和消除誤差的方法)1正確選取樣品的量2增加平行測定次數(shù)3對照實驗4空白實驗5回收實驗6校正儀器和標定試劑7嚴格遵守操作規(guī)程二.提高分析精確度的方法(控制和消除誤差的方法)1正確選23（二）回收試驗

目的是檢測誤差，以衡量分析方法的準確度。是在樣品中加入一定量被測物質，然后用同樣方法測定，測得值與理論值之比乘以100%即為回收率，合格的回收率應為100%±5%。（二）回收試驗目的是檢測誤差，以衡量分析方法的準確度。24第4章化學分析法4.2酸堿滴定法蛋白質系數(shù):表示1份含氮量相當于蛋白質含量的份數(shù).不同的產品蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同，故不同產品的蛋白質系數(shù)有差異。第4章化學分析法4.2酸堿滴定法蛋白質系數(shù):表示1份含25蛋白質的測定方法*凱氏定氮法雙縮脲比色法紫外吸收法Folin-酚比色法染料染色法蛋白質的測定方法*凱氏定氮法雙縮脲比色法紫外吸收法Folin26生化產品檢測與分析課程總結課件27生化產品檢測與分析課程總結課件28中性醋酸鉛乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液硫酸銅和氫氧化鈉溶液還有堿性醋酸鉛、氫氧化鋁溶液、活性炭等。糖的測定常用澄清劑的種類中性醋酸鉛乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液硫酸銅和氫氧化鈉溶液還有堿性29鐵氰化鉀法鐵氰化鉀法304.3.1還原糖的測定----直接滴定法(斐林氏容量法)原理將一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍色的氫氧化銅沉淀；沉淀很快與酒石酸鉀反應，生成深藍色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡合物。在加熱條件下，以次甲基藍作為指示劑，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉淀；這種沉淀與亞鐵氰化鉀絡合成可溶的無色絡合物；二價銅全部被還原后，稍過量的還原糖把次甲基藍還原，溶液由蘭色變?yōu)闊o色，即為滴定終點；根據(jù)樣液消耗量可計算出還原糖含量。4.3.1還原糖的測定----直接滴定法(斐林氏容量法)原31①此法測得的是總還原糖量。②在樣品處理時，不能用銅鹽作為澄清劑，以免樣液中引入Cu2+，得到錯誤的結果。③堿性酒石酸銅甲液和乙液應分別貯存，用時才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。說明與討論①此法測得的是總還原糖量。說明與討論32④滴定必須在沸騰條件下進行，其原因一是可以加快還原糖與Cu2+的反應速度；二是次甲基藍變色反應是可逆的，還原型次甲基藍遇空氣中氧時又會被氧化為氧化型。此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中氧所氧化。保持反應液沸騰可防止空氣進入，避免次甲基藍和氧化亞銅被氧化而增加耗糖量。④滴定必須在沸騰條件下進行，其原因一是可以加快還原糖與Cu33

⑤滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進入反應溶液中。

⑥樣品溶液預測的目的；一是本法對樣品溶液中還原糖濃度有一定要求(0.1%左右)，測定時樣品溶液的消耗體積應與標定葡萄糖標準溶液時消耗的體積相近，通過預測可了解樣品溶液濃度是否合適，濃度過大或過小應加以調整，使預測時消耗樣液量在10mL左右；

⑤滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來345.加速灰化的方法:(1)改變操作方法

樣品初步灼燒后取出坩堝→冷卻→在灰中加少量熱水→攪拌使水溶性鹽溶解，使包住的碳粒游離出來

→蒸去水分→干燥→灼燒(2)加HNO3(1:1)或30%H2O2

使未氧化的碳粒充分氧化并且使它們生成NO2和水，這類物質灼燒時完全消失，又不至于增加殘留物灰分重量。(3)加乙酸鎂、硝酸鎂等，使碳粒不被包裹,同時得作空白實驗。4.5.1總灰分的測定5.加速灰化的方法:(1)改變操作方法

樣品初步灼燒后取35灰分測定步驟在坩堝中稱取定量樣品→在電爐中炭化至無煙→在馬福爐中灼燒到灰白色(灰化)→降至200℃→

放入干燥室內冷卻→稱重

→灼燒1小時→冷卻到恒重灰分%=（灰分重量/樣品重量）×100灰分測定步驟在坩堝中稱取定量樣品→在電爐中炭化至無煙→在馬36三.脂類物質提取劑的選擇三.脂類物質提取劑的選擇37生化產品檢測與分析課程總結課件38經典方法經典方法39索氏提取器虹吸管聯(lián)接管溶劑蒸汽上升管索氏提取器虹吸管聯(lián)接管溶劑蒸汽上升管40生化產品檢測與分析課程總結課件41生化產品檢測與分析課程總結課件424.常用的脂類提取劑有哪些?5.索氏提取法的原理、儀器構造、優(yōu)點和操作過程分別是什么？索氏提取法的原理：脂肪不溶于水，易溶于乙醚、石油醚、氯仿等溶液中。用乙醚等有機溶液提取樣品中脂肪等再經蒸發(fā)除去有機溶劑，經稱重就可知粗脂肪的含量。優(yōu)點：即用易揮發(fā)溶劑在索氏提取器里不斷地蒸發(fā)、冷凝、溶解被提取物、純溶劑再蒸發(fā)、冷凝、溶解被提取物，一直到把被提取物提取干凈。這一方法簡單、提取完全。儀器：索氏提取器操作過程：球瓶內放有機溶劑，經水浴加熱使溶劑不斷蒸發(fā)。提取筒內裝樣品，溶劑蒸氣經冷凝器冷凝后不斷滴入提取筒內。溶劑在此與樣品充分接觸，溶解其中的脂肪。經過一定時間后，溶劑不斷蒸發(fā)，冷凝，樣品受到一次次新鮮溶劑的浸泡，直到樣品中所有的脂肪完全溶出止。4.常用的脂類提取劑有哪些?5.索氏提取法的原理、儀器構造、43第5章紫外-可見分光光度法5.1紫外-可見吸收光譜5.2朗伯-比耳定律5.3紫外-可見分光光度計5.4分析條件的選擇5.5紫外-可見吸收光譜的主要用途第5章紫外-可見分光光度法5.1紫外-可見吸收光譜44電子躍遷有哪幾種類型,這些類型各處于什么波長范圍?n→π＊,π→π＊,n→σ＊,σ→σ＊σ→σ＊躍遷，λ<200nmn→σ＊躍遷，吸收波長為150～250nmπ→π＊躍遷，吸收波長處于遠紫外區(qū)的近紫外端或近紫外區(qū)150－250nm之間n→π＊躍遷，吸收波長250nm－800nm之間電子躍遷有哪幾種類型,這些類型各處于什么波長范圍?45n→π＊躍遷＞200nm200400nm（近紫外區(qū)），可用于結構鑒定和定量分析?？梢娢展庾V：電子躍遷光譜，吸收光波長范圍400750nm，主要用于有色物質的定量分析n→π＊躍遷＞200nm462.生色團與助色團生色團：

最有用的紫外-可見光譜是由π→π＊和n→π＊躍遷產生的。這兩種躍遷均要求有機物分子中含有不飽和基團。這類含有π鍵的不飽和基團稱為生色團。簡單的生色團由雙鍵或叁鍵體系組成，如乙烯基、羰基、亞硝基、偶氮基-N＝N-、乙炔基、腈基-C≡N等。助色團：

有一些含有n電子的基團(如-OH、-OR、-NH２、-NHR、-X等)，它們本身沒有生色功能(不能吸收λ>200nm的光)，但當它們與生色團相連時，就會發(fā)生n-π共軛作用，增強生色團的生色能力(吸收波長向長波方向移動，且吸收強度增加)，這樣的基團稱為助色團。2.生色團與助色團生色團：47

A＝lg（I0/It)=-lgT=εbcA：吸光度，描述溶液對光的吸收程度；

b：液層厚度(光程長度)，通常以cm為單位；

c：溶液的摩爾濃度，單位mol·L-１；

ε：摩爾吸光系數(shù)，單位L·mol-１·cm-１；

或:A＝lg（I0/It)=abc

c：溶液的濃度，單位g·L-１

a：吸光系數(shù)，單位L·g-１·cm-１

a與ε的關系為：a=ε/M（M為摩爾質量）1.朗伯-比耳定律A＝lg（I0/It)=-lgT=48

朗伯-比耳定律是吸光光度法的理論基礎和定量測定的依據(jù)。應用于各種光度法的吸收測量；摩爾吸光系數(shù)ε在數(shù)值上等于濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時該溶液在某一波長下的吸光度；吸光系數(shù)a相當于濃度為1g/L、液層厚度為1cm時該溶液在某一波長下的吸光度。朗伯-比耳定律是吸光光度法的理論基礎和定量測定的依據(jù)。49紫外可見分光光度計基本組成光源單色器樣品室檢測器顯示紫外可見分光光度計基本組成光源單色器樣品室檢測器顯示50二、分光光度計的類型1.單光束

簡單，價廉，適于在給定波長處測量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性。2.雙光束自動記錄，快速全波段掃描。可消除光源不穩(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結構分析。儀器復雜，價格較高。二、分光光度計的類型1.單光束2.雙光束51第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生（二）激發(fā)光譜與熒光光譜（三）熒光分析儀器（四）熒光分析方法特點及應用重點：激發(fā)光譜與熒光光譜；具有熒光性質的分子的結構特征。第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生52熒光與分子結構的關系（2）共軛效應→*躍遷芳香族化合物。共軛雙鍵結構有利于發(fā)光。共軛體系越大,越易產生熒光,熒光效率也增大.─(CH=CH)3─

φ=0.68─(CH=CH)2─φ=0.28電子躍遷類型大部分熒光化合物電子躍遷的能級是由→*躍遷或n→*電子躍遷而被激發(fā)的。熒光與分子結構的關系（2）共軛效應→*躍遷─(53（3）剛性平面結構酚酞(無熒光)8－羥基喹啉(弱熒光)紅色熒光CO-OOCOO-COCOO--ONO-NOMgNO熒光素（3）剛性平面結構酚酞(無熒光)8－羥基喹啉(弱熒光)紅色54聯(lián)二苯φ=0.2芴φ=1.03,4-苯并芘(強熒光物質)CH2聯(lián)二苯φ=0.2芴φ=1.03,4-苯并芘(強55剛性平面結構：可降低分子振動，減少與溶劑的相互作用，故具有很強的熒光。如熒光素和酚酞有相似結構，熒光素有很強的熒光，酚酞卻沒有。剛性平面結構：可降低分子振動，減少與溶劑的相互作用，故56（4）取代基的影響

給電子基增強熒光：－OH,－OR,－NH2,－NHR,－NR2,－C≡N吸電子基減弱熒光：－COOH,－C=O,－NO2,－N＝N,－Cl,－Br,－I與體系作用小的取代基影響不明顯：－SO3R,－NH3＋,－SH,－F,－R。COOHNO2I無熒光NH2OH比熒光強50倍（4）取代基的影響給電子基增強熒光：COOHNO2I無熒光57

取代基之間若發(fā)生氫鍵，增強分子平面性和剛性會加強熒光:有熒光COOHOH無熒光OHCOOH水楊酸有熒光OHOHCO取代基之間若發(fā)生氫鍵，增強分子平面性和剛性會加強熒光58測量熒光的儀器主要由四個部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器。

特殊點：有兩個單色器；光源與檢測器通常成直角；單色器位置不同；比色皿不同(熒光要用四面透光的)6.3.1熒光分光光度計測量熒光的儀器主要由四個部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器59第7章薄層色譜法

（一）概述（二）薄層色譜的基本原理（三）薄層色譜的操作技術（四）薄層色譜法定量分析（五）薄層色譜法在生物工程分析中的應用重點：薄層色譜的基本原理和薄層色譜的操作技術。第7章薄層色譜法

（一）概述607.2薄層色譜法的基本原理1.保留參數(shù)（Rf值）用來表征斑點位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱作比移值，用Rf表示。原點SRWLsL。Lr原點參比樣品前沿7.2薄層色譜法的基本原理1.保留參數(shù)（Rf值）原點SRW61

3.分配系數(shù)K=cS/cm，表示，即分離達到平衡時，組分在固定相和流動相的濃度之比。4.分離度

627.3.4流動相與展開體系1.液-固吸附——在該色譜中，溶質的保留和分離選擇性決定于三個因素：溶解能力流動相溶質吸附劑相互作用競爭一.展開體系:7.3.4流動相與展開體系1.液-固吸附——在該色譜中，63定量計算外標法：此法是薄層定量最常用的方法。定量時，點樣量必須準確，樣品與對照品應點在同一塊薄層板上。用已知含量的對照品得出樣品含量的一種方法。內標法:選一個純度高、化學性質穩(wěn)定、在薄層上能與對照品分開的物質作內標物，并準確稱取加到被測物中，根據(jù)內標物的質量算出被測物的含量。定量計算64薄層色譜法分離樣品的步驟.

制板活化點樣展開薄層色譜法分離樣品的步驟.

制板活化點樣展開65第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論（二）定性分析方法（三）定量分析方法（四）氣相色譜檢測器（五）氣相色譜的應用重點：塔板理論，定量方法的分類特點及適應范圍、氣相色譜儀結構組成和氣相色譜檢測器的選擇和應用。第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論66二.氣相色譜法的定義：GC是一種以氣體為流動相的柱色譜法.根據(jù)所用的固定相狀態(tài)不同,可分為氣固色譜和氣液色譜.固定相（stationaryphase):色譜法中，填入玻璃管內靜止不動的一相（固體或液體）稱為固定相。如離子交換樹脂法中的樹脂相。流動相(mobilephase):自上而下運動的一相（一般是氣體或液體）稱為流動相。色譜柱(chromatographycolumn):裝有固定相的管子稱為色譜柱。二.氣相色譜法的定義：GC是一種以氣體為流動相的柱67四、氣相色譜儀結構及一般流程1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；3-凈化干燥管；4-針形閥；5-流量計;6-壓力表；4-針形閥；5-流量計;6-壓力表；9-熱導檢測器；10-放大器；11-溫度控制器；12-記錄儀；載氣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)色譜柱檢測系統(tǒng)溫控系統(tǒng)四、氣相色譜儀結構及一般流程1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；載氣系681.基線與基線漂移基線：在色譜操作條件下，僅有流動相通過監(jiān)測器時，由記錄儀得到的信號－時間曲線。基線漂移：基線隨時間定向緩慢地變化?；€基線漂移圖8-1某物質的色譜圖8.2基本理論8.2.1基本概念1.基線與基線漂移基線：在色譜操作條件下，僅有流動相通過監(jiān)692.死時間與死體積死時間（deadtime）：不被固定相吸附或溶解的惰性組分，從進樣到出峰的峰頂點之間測得的時間，以tM表示。死體積（deadvolume）：死時間內流動相流經色譜柱的體積，又指色譜柱填充固定相后的空隙體積。圖8-2某組分的色譜圖2.死時間與死體積死時間（deadtime）：不被固定相吸703.保留時間、調整保留時間、保留體積、調整保留體積保留時間（retentiontime）:從進樣到組分峰頂點之間測得的時間，用tR表示。調整保留時間（adjustedretentiontime）：組分的保留時間扣除死時間后的時間。保留體積（retentionvolume）：從進樣開始到監(jiān)測器中樣品濃度最大時，流動相流經色譜柱的體積。調整保留體積（adjustedretentionvolume）:保留體積扣除死體積后的體積。圖8-3某組分的色譜圖3.保留時間、調整保留時間、保留體積、調整保留體積保留時間（714.相對保留因子與分配因子相對保留因子γ21（relativeretentionvalue）：組分2與基準組分1的調整保留時間之比.12.分配因子k4.相對保留因子與分配因子相對保留因子γ21（relati726.分離度分離度也稱分辯率。它是指相鄰兩色譜峰保留值之差與兩峰底寬平均值之比。一般情況下，當R<1時，兩峰總有部分重疊；當R＝1時，兩峰能明顯分離；R＝1.5時，兩峰已完全分離。更大的R值，分離效果會更好，但會延長分析時間。

6.分離度分離度也稱分辯率。它是指相鄰兩色譜峰保留值之差與兩736.分離度分離度也稱分辯率。它是指相鄰兩色譜峰保留值之差與兩峰底寬平均值之比。一般情況下，當R<1時，兩峰總有部分重疊；當R＝1時，兩峰能明顯分離；R＝1.5時，兩峰已完全分離。更大的R值，分離效果會更好，但會延長分析時間。

6.分離度分離度也稱分辯率。它是指相鄰兩色譜峰保留值之差與兩74分離方程由上式可得分離方程由上式可得75（二）理論板數(shù)和理論塔板高度的計算理論塔板高度H——為使組分在柱內兩相間達到一次分配平衡所需要的柱長理論塔板數(shù)n——組分流過色譜柱時，在兩相間進行平衡分配的總次數(shù)

（二）理論板數(shù)和理論塔板高度的計算理論塔板高度H——為使組76一.范第姆特（VanDeemter）方程式吸收了塔板理論的有效成果——H，并從動力學角度較好地解釋了影響柱效的因素給出H與載氣線速度u的關系渦流擴散項縱向擴散項傳質阻力項一.范第姆特（VanDeemter）方程式吸收了塔板理論77流速與柱效的關系最佳流速流速與柱效的關系最佳流速788.4檢測器氣相色譜檢測器1.熱導池檢測器2.氫火焰離子化檢測器3.電子捕獲檢測器4.火焰光度檢測器氣相色譜中常用的檢測器8.4檢測器氣相色譜檢測器1.熱導池檢測器2.氫火焰離子化79

1.熱導檢測器TCD對可揮發(fā)性的有機和無機物都有響應根據(jù)各種物質和具有不同的熱導率，采用熱敏元件進行測定13－21熱導檢測器示意圖返回靈敏度較低，適應于常量和10-6數(shù)量級以上的樣品分析。

1.熱導檢測器TCD對可揮發(fā)性根據(jù)各種物質和具有不同的熱導80

2.氫火焰離子化檢測器FID檢測含碳有機化合物被測組分出色譜柱后，與氫氣混合，進入離子室火焰區(qū)，生成正負離子，并向兩極移動，形成離子流，經放大后送至記錄儀記錄13－21氫火焰離子化監(jiān)測器示意圖返回

2.氫火焰離子化檢測器FID檢測含碳有機化合物被測組分出色81

3.電子捕獲檢測器ECD對具有電負性的物質，如含鹵素、硫、磷、氮的物質有響應，而對非電負性的物質無響應。β放射源將載氣（如N2）電離為游離基和低能電子：N2N2+

+e電負性的物質進入檢測器后，捕獲低能電子：AB+e-AB-+E從而使基流下降，產生負訊號-倒峰13－22電子捕獲檢測器示意圖返回

3.電子捕獲檢測器ECD對具有電負性的物質，如含鹵素、硫、82

4.火焰光度檢測器FPD對含硫、磷的化合物具有響應含硫有機化合物在富氫焰（H2:O2﹥3:1）中燃燒：RS+O2SO2+CO2SO2+8H2S+4H2OS+SS2＊（激發(fā)態(tài)：回到基態(tài)時發(fā)射394nm的特征光）含磷有機物燃燒形成HPO碎片，發(fā)射526nm的特征光。13－23火焰光度檢測器示意圖返回

4.火焰光度檢測器FPD對含硫、磷的化合物具有響應含硫有機83定量分析方法1.外標法2.內標法3.歸一化法三種方法各有其優(yōu)缺點和適用范圍，應根據(jù)實際情況，具體選用。continue定量分析方法1.外標法2.內標法3.歸一化法三種方法各有其優(yōu)84

（4）定量分析方法：外標法

(類標準曲線法)將待測組分的純物質配成不同濃度的標準溶液，使?jié)舛扰c待測組分接近，然后取固定量的上述溶液進行色譜分析，得到各標準樣品的對應色譜圖。某組分的標準物質的色譜圖

（4）定量分析方法：外標法

(類標準曲線法)將待測組分的純85再在同樣的條件下（同樣的色譜操作條件和進同樣的體積），分析待測試樣，得到色譜圖。圖13－13某樣品的色譜圖再在同樣的條件下（同樣的色譜操作條件和進同樣的體積），分析待86以標準樣品的色譜峰面積作圖，得到一條標準曲線，再在標準曲線上根據(jù)待測樣品的峰面積查出待測組分的濃度。圖13－14標準工作曲線圖外標法的特點：操作簡單，因而適用于工廠的控制分析和自動分析，但結果的準確度取決于進樣量的重現(xiàn)性和操作條件的穩(wěn)定性。返回以標準樣品的色譜峰面積作圖，得到一條標準曲線，再在標準曲線上87內標法方法：準確稱取樣品，加入一定量的某種純物質作為內標物，然后進行色譜分析，根據(jù)被測組分和內標物在色譜圖上相應的峰面積（或峰高）與相對校正因子，求出待測組分的含量。注意：此處所用內標物與外標法中的標準物質不同。內標物一定是樣品中不存在的，內標峰應和各組分的峰分開，并盡量接近待測組分。內標物可以是測量相對校正因子時所用的基準物。內標法方法：準確稱取樣品，加入一定量的某種純物質作為內標物，88圖13－15某化合物的色譜圖圖13－15某化合物的色譜圖89內標法的計算公式內標法的計算公式90內標法的優(yōu)點：由于內標法是通過測量內標物及待測組分的峰面積的相對值來進行計算的，因而可在一定程度上消除操作條件的變化所引起的誤差。內標法的缺點：在試樣中增加了一個內標物，這常常給分離帶來一定的困難。返回內標法的優(yōu)點：由于內標法是通過測量內標物及待測組分的峰面積的91

（4）定量分析方法：歸一化法要求：樣品中的所有組分都能出峰。圖13－16某樣品的色譜圖

（4）定量分析方法：歸一化法要求：樣品中的所有組分都能92歸一化法：把試樣中所有組分的含量之和按100%計算，以它們相應的色譜峰面積或峰高作為定量參數(shù)，通過下式計算各組分的含量歸一化法：把試樣中所有組分的含量之和按100%計算，以它們相93歸一化法特點優(yōu)點：簡便、準確、操作條件（如：進樣量、流速等）變化時，對分析結果影響較小，這種方法常用于常量分析，尤其適用于進樣量很少而其體積不易準確測量的液體樣品。缺點：經過色譜分離后，樣品中所有的組分都要能產生可測量的峰返回歸一化法特點優(yōu)點：簡便、準確、操作條件（如：進樣量、流速等）94固定相類型極性固定相：正相色譜以極性有機基團如胺基（-NH2）、腈基（-CN）、醚基（-O-）等鍵合在硅膠表面制成的非極性固定相：反相色譜是C18(ODS)、C8和苯基鍵合相的填料，反相色譜是當今液相色譜的最主要分離模式。流動相的極性小于固定液的極性（正相）;流動相的極性大于固定液的極性（反相）。固定相類型反相色譜是當今液相色譜的最主要分離模式。流動相的極95溶劑

色譜泵自動進樣器HPLC色譜柱檢測器廢液數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)1.流程圖第四節(jié)高效液相色譜儀溶劑色譜泵自動進樣器HPLC色譜柱檢測器廢液數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)96為什么要進行梯度洗脫？

在進行多成分的復雜樣品的分離時，經常會碰到前面的一些成分分離不完全，而后面的一些成分分離度太大，且出峰很晚和峰型較差。為了使保留值相差很大的多種成分在合理的時間內全部洗脫并達到相互分離，往往要用到梯度洗脫技術。(3)梯度洗脫為什么要進行梯度洗脫？

在進行多成分的復雜樣品的分離時97梯度洗脫操作

在液相色譜中流速（壓力）梯度和溫度梯度效果不大，而且還會帶來一些不利影響，因此，液相色譜中通常所說的梯度洗脫是指流動相梯度，即在分離過程中改變流動相的組成或濃度。梯度洗脫操作

在液相色譜中流速（壓力）梯度和溫度梯度效98定義：流動相中含有兩種（或更多）不同極性的溶劑，在分離過程中按一定的程序連續(xù)改變流動相的配比和極性，以提高分離效果。優(yōu)點：分離時間縮短，分辨能力增加，峰形改善定義：流動相中含有兩種（或更多）不同極性的溶劑，在分離過程中99a.紫外檢測器基于Lambert-Beer定律，即被測組分對紫外光或可見光具有吸收，且吸收強度與組分濃度成正比。

應用最廣，對大部分有機化合物有響應。

(6)檢測器a.紫外檢測器(6)檢測器100b.熒光檢測器（Fluorescencedetector）

高靈敏度、高選擇性；對多環(huán)芳烴，維生素B、黃曲霉素、卟啉類化合物、農藥、藥物、氨基酸、甾類化合物等有響應。b.熒光檢測器（Fluorescencedetecto101 用于檢測陽離子和陰離子，在離子色譜中應用最多。其檢測原理是根據(jù)組分在某些介質中電離后所產生的電導的變化而測定該組分的含量。C.電導檢測器（ECD） 用于檢測陽離子和陰離子，在離子色譜中應用最多。其檢測原理是102D.示差折光檢測器(RID)又稱折射率檢測器。原理：基于樣品組分的折射率與流動相溶劑折射率有差異，當組分洗脫出來時，會引起流動相折射率的變化，這種變化與樣品組分的濃度成正比。是通用型檢測器

D.示差折光檢測器(RID)又稱折射率檢測器。原理：基于樣103E.蒸發(fā)散射光檢測器（ELSD）

ELSD是基于溶質的光散射性質的檢測器因為散射光強只與溶質顆粒大小和數(shù)量有關，而與溶質本身的物理和化學性質無關，所以ELSD屬通用型和質量型檢測器。適合于無紫外吸收、無電活性和不發(fā)熒光的樣品的檢測。與示差折光檢測器相比，它的基線漂移不受溫度影響，信噪比高，也可用于梯度洗脫。E.蒸發(fā)散射光檢測器（ELSD）

ELSD是基于溶質的104液相色譜與氣相色譜的比較液相色譜所用基本概念和基本理論基本一致。液相色譜所用的儀器設備和操作條件與氣相色譜不同，所以，液相色譜與氣相色譜有一定差別，主要有以下幾方面：液相色譜與氣相色譜的比較105（1）應用范圍不同GC僅能分析在操作溫度下能氣化而不分解的物質。對高沸點化合物、非揮發(fā)性物質、熱不穩(wěn)定化合物、離子型化合物及高聚物的分離、分析較為困難。致使其應用受到一定程度的限制，只有大約20%的有機物能用氣相色譜分析；HPLC則不受樣品揮發(fā)度和熱穩(wěn)定性的限制，它非常適合分子量較大、難氣化、不易揮發(fā)或對熱敏感的物質、離子型化合物及高聚物的分離分析，大約占有機物的70-80%。

（1）應用范圍不同106（2）流動相的作用不同氣相色譜的流動相載氣是色譜惰性的，不參與分配平衡過程，與樣品分子無親和作用，樣品分子只與固定相相互作用。液相色譜流動相液體也與固定相爭奪樣品分子，為提高選擇性增加了一個因素。也可選用不同比例的兩種或兩種以上的液體作流動相，增大分離的選擇性。

（2）流動相的作用不同107（4）色譜柱：GC填充柱1~6m，毛細管柱20~100m，螺旋型；HPLC15cm或25cm，直型。（3）操作條件：GC需高溫；HPLC通常在室溫下進行，高壓（液體粘度大，峰展寬小）。（4）色譜柱：（3）操作條件：108(5)分離效率不同HPLC：大于3萬塔板/米（GC：103塔板/米）(6)儀器構造不同HPLC:脫氣裝置，高壓泵GC：汽化室，溫控系統(tǒng)(5)分離效率不同(6)儀器構造不同109第10章電泳法和高效毛細管電泳法

(ElectrophoresisandHighPerformanceCapillaryElectrophoresis,HPCE)第10章電泳法和高效毛細管電泳法

(Electropho110毛細管電泳定義毛細管電泳是帶電粒子在電場力的驅動下，在毛細管中按其淌度或分配系數(shù)不同進行高效、快速分離的電泳新技術，也稱為高效毛細管電泳。毛細管電泳定義毛細管電泳是帶電粒子在電場力的驅動下，在毛111第10章毛細管電泳10.1.3分離模式

1毛細管區(qū)帶電泳（CZE）

也稱為毛細管自由溶液區(qū)帶電泳毛細管電泳中最基本的操作模式，應用最廣泛，是其它各種操作模式的母體

第10章毛細管電泳112第10章毛細管電泳10.1.3分離模式

2膠束電動毛細管色譜膠束電動毛細管色譜:是以電滲流驅動的一種色譜技術膠束電動毛細管色譜MECC:是以膠束為假固定相的一種電動色譜，是電泳技術和色譜技術的結合加入高于膠束臨界濃度的表面活性劑第10章毛細管電泳113第10章毛細管電泳10.1.3分離模式

3毛細管凝膠電泳CGE是毛細管自由溶液區(qū)帶電泳派生出的一種電泳方式

用多孔性的凝膠或其它篩分劑作介質，網(wǎng)狀結構，按分子的大小分離

第10章毛細管電泳114第10章毛細管電泳10.1.3分離模式

6毛細管等電聚焦CIEF:建立在不同蛋白質或多肽之間等電點（pI值）差異基礎上的分離方法，通過建立pH值梯度。蛋白質的等電點(pI):指蛋白質分子的表觀電荷數(shù)為零時的pH值。

第10章毛細管電泳115第12章酶法分析12.1概述12.2酶法分析方法和應用示例12.3酶聯(lián)免疫分析法重點:酶法分析的方法和應用范圍第12章酶法分析12.1概述重點:酶法分析的方法和1161.酶法分析常用的分析方法:初速率法固定時間分析法固定變化分析法平衡分析法酶偶聯(lián)分析法1.酶法分析常用的分析方法:1172.酶法分析的應用類型酶活性的測定底物及底物類似物的測定活化劑和抑制劑的分析測定2.酶法分析的應用類型酶活性的測定118常規(guī)測定酶活力的操作步驟（1）

對樣品酶液進行適當稀釋（2）

進行酶促反應（3）

測定反應量：一般是測定反應產物生成量。具體的方法根據(jù)被測物質的理化性質而定（4）計算酶活力（u/ml，u/g）常規(guī)測定酶活力的操作步驟（1）

對樣品酶液進行適當稀釋119測定反應量①

如果反應物或產物光學性質變化明顯，可采用紫外光、可見光、旋光或熒光等光學儀器進行測定②如果pH或電化學性質變化大，可采用酸堿滴定或電位滴定等方法測定③

如果底物或產物能與另外的試劑進行顯色或產生其它表觀性狀易檢測的反應，則可取出一定的反應樣液，通過化學反應顯色等方法進行底物或產物變化量的測定。測定反應量①

如果反應物或產物光學性質變化明顯，可采用紫外光120第14章生物傳感器（一）概述（二）酶傳感器（三）核酸傳感器（四）幾種新型生物傳感器重點：生物傳感器的定義模型和制作的主要方法以及電化學方法中常用的電極類型。第14章生物傳感器（一）概述121轉換器敏感元件待測物1.生物傳感器的模型14.1概述敏感元件待測物1.生物傳感器的模型14.1概述122是生物傳感器的心臟，核心技術感受器感知固定化配基與待測物結合產生的微小變化，把這種變化轉化為可識別信號。換能器檢測器是生物傳感器的心臟，核心技術感受器感知固定化配基與待測物結合1232.定義由感受器對待測物質進行分子識別，發(fā)生生物化學變化，產生的信息通過換能器轉變成電信號或光信號，由檢測器檢測出待測物質的含量的一種分析方法。感受器換能器信號轉換器檢測器2.定義1245.生物傳感器的特點高選擇性。體積小、可以實現(xiàn)連續(xù)在線監(jiān)測。響應快、樣品用量少，且由于敏感材料是固定化的，可以反復多次使用。傳感器連同測定儀的成本遠低于大型的分析儀器，因而便于推廣普及。5.生物傳感器的特點高選擇性。體積小、125底物產物

酶傳感器工作原理H+、NH3、CO2、CN-電位或光度測定酶膜O2、H2O2電流或化學發(fā)光測定底物12614.6免疫傳感器免疫傳感分析特點：

利用抗原、抗體所具有的高靈敏度、高選擇性的結合做為分子識別手段進行分析。免疫傳感器分類：

非標記免疫傳感器和標記免疫傳感器兩類14.6免疫傳感器1271非標記免疫傳感器原理：抗體與抗原（蛋白質）的結合有高度選擇性，當兩者結合時，蛋白質分子發(fā)生各種性質變化，如攜帶的大量電荷會產生電位變化，繼而引起事先固定了抗原或抗體的各種轉換元件電化學及物理參數(shù)的改變。1非標記免疫傳感器原理：1282標記免疫傳感器標記：以酶、熒光物質、電活性化合物、放射性同位素等為標記物。（1）競爭法：用一定量的標記過的抗原加入到被測的非標記抗原中，此時非標記抗原與標記抗原與傳感器表面抗體發(fā)生競爭反應，再通過抗原-抗體結合體中“標記”性信號的檢測，實現(xiàn)非標記抗原的測量。（2）夾心法：抗原與傳感器表面抗體結合后，再加標記抗體與抗原結合，……2標記免疫傳感器標記：以酶、熒光物質、電活性化合物、放射性129標記免疫傳感器標記免疫傳感器130生化產品檢測與分析課程總結課件131生化產品檢測與分析課程總結課件132生化產品檢測與分析課程總結課件133一.考試題型介紹二.內容串講三.每章重點四.習題講解總復習一.考試題型介紹總復習134一.考試題型介紹

(一).名詞解釋題（3’×10=30’）(二).簡答題（6’×5=30’）(三)．計算題（2-3題,20’）(四).闡述題(10×2=20’)一.考試題型介紹

(一).名詞解釋題（3’×10=30’）135二.內容串講

第一章緒論（一）生化產品檢測與分析的目的和意義（二）生化產品檢測與分析的內容（三）生化產品檢測與分析的方法二.內容串講

第一章緒論136第二章生物工程分析的基礎知識（一）樣品的采集、制備和保存（二）生物樣品預處理的方法（三）誤差及分析方法的選擇重點：進行樣品分析的流程，樣品的制備與預處理方法，分析方法的選擇原則。從哪些方法來保證測定結果的準確度。第二章生物工程分析的基礎知識（一）樣品的采集、制備和保存137第4章化學分析法（一）概述（二）酸堿測定法（三）氧化還原滴定法（四）重量法重點：蛋白質及氨基酸的測定中的凱氏定氮法、還原糖的直接滴定法以及脂類測定的經典方法（索氏提取法）的原理、方法及注意事項。第4章化學分析法（一）概述138第5章紫外-可見吸收光譜法（一）紫外-可見吸收光譜定義檢測范圍（二）朗伯-比耳定律（三）紫外-可見分光光度計（四）分析條件的選擇（五）測定方法（六）紫外-可見吸收光譜的應用重點：光的吸收定律；分析條件的選擇。生色團、助色團，紅移、藍移的定義。第5章紫外-可見吸收光譜法（一）紫外-可見吸收光譜139第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生（二）激發(fā)光譜與熒光光譜（三）熒光分析儀器（四）熒光分析方法特點及應用重點：激發(fā)光譜與熒光光譜；具有熒光性質的分子的結構特征，熒光分析方法與紫外可見分光光度法的區(qū)別與聯(lián)系。第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生140第7章薄層色譜法

（一）概述（二）薄層色譜的基本原理（三）薄層色譜的操作技術（四）薄層色譜法定量分析（五）薄層色譜法在生物工程分析中的應用重點：薄層色譜的基本原理和薄層色譜的操作技術；比移值，分配系數(shù)，分離度的含義及應用。第7章薄層色譜法

（一）概述141第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論（二）定性分析方法（三）定量分析方法（四）氣相色譜檢測器（五）氣相色譜的應用重點：塔板理論，定量方法的分類特點及適應范圍、氣相色譜儀結構組成和氣相色譜檢測器的選擇和應用。第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論142第9章高效液相色譜法（一）高效液相色譜法的特點（二）高效液相色譜的基本理論（三）高效液相色譜的固定相和流動相（四）液相色譜儀（五）高效液相色譜的應用重點：高效液相色譜儀的組成部分及作用原理；檢測器的分類及應用范圍；固定相和流動相的選擇；氣相色譜與液相色譜的區(qū)別與聯(lián)系。第9章高效液相色譜法（一）高效液相色譜法的特點143第10章電泳法和高效毛細管電泳法

（一）概述（二）電泳法和高效毛細管電泳法的基本理論（三）電泳儀和高效毛細管電泳儀（四）應用示例重點：電泳法和高效毛細管電泳法的分離模式第10章電泳法和高效毛細管電泳法

（一）概述144第12章酶法分析12.1概述12.2酶法分析方法和應用示例12.3酶聯(lián)免疫分析法重點:酶法分析的方法和應用范圍第12章酶法分析12.1概述重點:酶法分析的方法和145第14章生物傳感器（一）概述（二）酶傳感器（三）核酸傳感器（四）幾種新型生物傳感器重點：生物傳感器的定義模型和制作的主要方法以及電化學方法中常用的電極類型。第14章生物傳感器（一）概述146生物工程分析的定義： 是一門研究和討論生物工程領域所需要的分析檢驗技術的方法、原理、儀器裝置、操作要點以及應用范圍等為主要內容的工具學科。第1章緒論三.每章重點

生物工程分析的定義：第1章緒論三.每章重點

147分析化學化學分析儀器分析酸堿滴定配位滴定氧化還原滴定沉淀滴定電化學分析光學分析色譜分析波譜分析重量分析滴定分析電導、電位、電解、庫侖極譜、伏安發(fā)射、吸收，熒光、光度氣相、液相、離子、超臨界、薄層、毛細管電泳紅外、核磁、質譜12/15/2022分化儀酸堿滴定配位滴定氧化還原滴定沉淀滴定電化學分析光學分析1481.理化檢驗篇(1)生化產品營養(yǎng)成分的測定(2)水分、礦物元素的測定(3)酶活力的測定生物工程分析的主要內容:第1章.緒論

1.理化檢驗篇生物工程分析的主要內容:第1章.緒論

149

2.儀器分析篇

(1)紫外、可見吸收光譜法(2)熒光分光光度法(3)薄層色譜法

(4)氣相色譜法(5)高效液相色譜法(6)電泳法和高效毛細管電泳法

(7)生物傳感器

2.儀器分析篇

150第2章生物工程分析的基礎知識一.樣品分析流程:

樣品的采集、制備和保存，樣品的預處理，成分檢驗與分析，數(shù)據(jù)處理，整理報告。二.正確采樣，必須遵守的原則：代表性第2章生物工程分析的基礎知識一.樣品分析流程:151三.預處理方法分類：1.溶解法2.蒸餾法（1）常壓蒸餾（2）減壓蒸餾（3）水蒸氣蒸餾（4）分餾（5）掃集共蒸餾法3.有機物破壞法

①干法灰化

②濕法消化:是加入強氧化劑（如濃硝酸、高氯酸、高錳酸鉀等），使樣品消化，而被測物質呈離子狀態(tài)保存在溶液中。4.溶劑提取法①溶劑分層法②浸泡法③鹽析

5.色層分離法6.其它的生化分離提純技術三.預處理方法分類：152四.分析方法的評價指標在研究一個分析方法的好壞時，通常用精密度、準確度和靈敏度三項指標評定。此外還考慮線性和線性范圍、耐用性等.1.精密度

是指對同一樣品多次測定，每次測定結果與均值的符合程度。2.準確度

指測定值與真值之間的符合程度。3.靈敏度是指化學反應中能檢出的最低量。四.分析方法的評價指標1534.特異性指分析測定中對某一成分起反應，其他物質對反應無影響或基本無影響。4.特異性指分析測定中對某一成分起反應，其他物質對反應無154二.提高分析精確度的方法(控制和消除誤差的方法)1正確選取樣品的量2增加平行測定次數(shù)3對照實驗4空白實驗5回收實驗6校正儀器和標定試劑7嚴格遵守操作規(guī)程二.提高分析精確度的方法(控制和消除誤差的方法)1正確選155（二）回收試驗

目的是檢測誤差，以衡量分析方法的準確度。是在樣品中加入一定量被測物質，然后用同樣方法測定，測得值與理論值之比乘以100%即為回收率，合格的回收率應為100%±5%。（二）回收試驗目的是檢測誤差，以衡量分析方法的準確度。156第4章化學分析法4.2酸堿滴定法蛋白質系數(shù):表示1份含氮量相當于蛋白質含量的份數(shù).不同的產品蛋白質其氨基酸構成比例及方式不同，故不同產品的蛋白質系數(shù)有差異。第4章化學分析法4.2酸堿滴定法蛋白質系數(shù):表示1份含157蛋白質的測定方法*凱氏定氮法雙縮脲比色法紫外吸收法Folin-酚比色法染料染色法蛋白質的測定方法*凱氏定氮法雙縮脲比色法紫外吸收法Folin158生化產品檢測與分析課程總結課件159生化產品檢測與分析課程總結課件160中性醋酸鉛乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液硫酸銅和氫氧化鈉溶液還有堿性醋酸鉛、氫氧化鋁溶液、活性炭等。糖的測定常用澄清劑的種類中性醋酸鉛乙酸鋅和亞鐵氰化鉀溶液硫酸銅和氫氧化鈉溶液還有堿性161鐵氰化鉀法鐵氰化鉀法1624.3.1還原糖的測定----直接滴定法(斐林氏容量法)原理將一定量的堿性酒石酸銅甲、乙液等量混合，立即生成天藍色的氫氧化銅沉淀；沉淀很快與酒石酸鉀反應，生成深藍色的可溶性酒石酸鉀鈉銅絡合物。在加熱條件下，以次甲基藍作為指示劑，用樣液滴定，樣液中的還原糖與酒石酸鉀鈉銅反應，生成紅色的氧化亞銅沉淀；這種沉淀與亞鐵氰化鉀絡合成可溶的無色絡合物；二價銅全部被還原后，稍過量的還原糖把次甲基藍還原，溶液由蘭色變?yōu)闊o色，即為滴定終點；根據(jù)樣液消耗量可計算出還原糖含量。4.3.1還原糖的測定----直接滴定法(斐林氏容量法)原163①此法測得的是總還原糖量。②在樣品處理時，不能用銅鹽作為澄清劑，以免樣液中引入Cu2+，得到錯誤的結果。③堿性酒石酸銅甲液和乙液應分別貯存，用時才混合，否則酒石酸鉀鈉銅絡合物長期在堿性條件下會慢慢分解析出氧化亞銅沉淀，使試劑有效濃度降低。說明與討論①此法測得的是總還原糖量。說明與討論164④滴定必須在沸騰條件下進行，其原因一是可以加快還原糖與Cu2+的反應速度；二是次甲基藍變色反應是可逆的，還原型次甲基藍遇空氣中氧時又會被氧化為氧化型。此外，氧化亞銅也極不穩(wěn)定，易被空氣中氧所氧化。保持反應液沸騰可防止空氣進入，避免次甲基藍和氧化亞銅被氧化而增加耗糖量。④滴定必須在沸騰條件下進行，其原因一是可以加快還原糖與Cu165

⑤滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來滴定，以防止空氣進入反應溶液中。

⑥樣品溶液預測的目的；一是本法對樣品溶液中還原糖濃度有一定要求(0.1%左右)，測定時樣品溶液的消耗體積應與標定葡萄糖標準溶液時消耗的體積相近，通過預測可了解樣品溶液濃度是否合適，濃度過大或過小應加以調整，使預測時消耗樣液量在10mL左右；

⑤滴定時不能隨意搖動錐形瓶，更不能把錐形瓶從熱源上取下來1665.加速灰化的方法:(1)改變操作方法

樣品初步灼燒后取出坩堝→冷卻→在灰中加少量熱水→攪拌使水溶性鹽溶解，使包住的碳粒游離出來

→蒸去水分→干燥→灼燒(2)加HNO3(1:1)或30%H2O2

使未氧化的碳粒充分氧化并且使它們生成NO2和水，這類物質灼燒時完全消失，又不至于增加殘留物灰分重量。(3)加乙酸鎂、硝酸鎂等，使碳粒不被包裹,同時得作空白實驗。4.5.1總灰分的測定5.加速灰化的方法:(1)改變操作方法

樣品初步灼燒后取167灰分測定步驟在坩堝中稱取定量樣品→在電爐中炭化至無煙→在馬福爐中灼燒到灰白色(灰化)→降至200℃→

放入干燥室內冷卻→稱重

→灼燒1小時→冷卻到恒重灰分%=（灰分重量/樣品重量）×100灰分測定步驟在坩堝中稱取定量樣品→在電爐中炭化至無煙→在馬168三.脂類物質提取劑的選擇三.脂類物質提取劑的選擇169生化產品檢測與分析課程總結課件170經典方法經典方法171索氏提取器虹吸管聯(lián)接管溶劑蒸汽上升管索氏提取器虹吸管聯(lián)接管溶劑蒸汽上升管172生化產品檢測與分析課程總結課件173生化產品檢測與分析課程總結課件1744.常用的脂類提取劑有哪些?5.索氏提取法的原理、儀器構造、優(yōu)點和操作過程分別是什么？索氏提取法的原理：脂肪不溶于水，易溶于乙醚、石油醚、氯仿等溶液中。用乙醚等有機溶液提取樣品中脂肪等再經蒸發(fā)除去有機溶劑，經稱重就可知粗脂肪的含量。優(yōu)點：即用易揮發(fā)溶劑在索氏提取器里不斷地蒸發(fā)、冷凝、溶解被提取物、純溶劑再蒸發(fā)、冷凝、溶解被提取物，一直到把被提取物提取干凈。這一方法簡單、提取完全。儀器：索氏提取器操作過程：球瓶內放有機溶劑，經水浴加熱使溶劑不斷蒸發(fā)。提取筒內裝樣品，溶劑蒸氣經冷凝器冷凝后不斷滴入提取筒內。溶劑在此與樣品充分接觸，溶解其中的脂肪。經過一定時間后，溶劑不斷蒸發(fā)，冷凝，樣品受到一次次新鮮溶劑的浸泡，直到樣品中所有的脂肪完全溶出止。4.常用的脂類提取劑有哪些?5.索氏提取法的原理、儀器構造、175第5章紫外-可見分光光度法5.1紫外-可見吸收光譜5.2朗伯-比耳定律5.3紫外-可見分光光度計5.4分析條件的選擇5.5紫外-可見吸收光譜的主要用途第5章紫外-可見分光光度法5.1紫外-可見吸收光譜176電子躍遷有哪幾種類型,這些類型各處于什么波長范圍?n→π＊,π→π＊,n→σ＊,σ→σ＊σ→σ＊躍遷，λ<200nmn→σ＊躍遷，吸收波長為150～250nmπ→π＊躍遷，吸收波長處于遠紫外區(qū)的近紫外端或近紫外區(qū)150－250nm之間n→π＊躍遷，吸收波長250nm－800nm之間電子躍遷有哪幾種類型,這些類型各處于什么波長范圍?177n→π＊躍遷＞200nm200400nm（近紫外區(qū)），可用于結構鑒定和定量分析?？梢娢展庾V：電子躍遷光譜，吸收光波長范圍400750nm，主要用于有色物質的定量分析n→π＊躍遷＞200nm1782.生色團與助色團生色團：

最有用的紫外-可見光譜是由π→π＊和n→π＊躍遷產生的。這兩種躍遷均要求有機物分子中含有不飽和基團。這類含有π鍵的不飽和基團稱為生色團。簡單的生色團由雙鍵或叁鍵體系組成，如乙烯基、羰基、亞硝基、偶氮基-N＝N-、乙炔基、腈基-C≡N等。助色團：

有一些含有n電子的基團(如-OH、-OR、-NH２、-NHR、-X等)，它們本身沒有生色功能(不能吸收λ>200nm的光)，但當它們與生色團相連時，就會發(fā)生n-π共軛作用，增強生色團的生色能力(吸收波長向長波方向移動，且吸收強度增加)，這樣的基團稱為助色團。2.生色團與助色團生色團：179

A＝lg（I0/It)=-lgT=εbcA：吸光度，描述溶液對光的吸收程度；

b：液層厚度(光程長度)，通常以cm為單位；

c：溶液的摩爾濃度，單位mol·L-１；

ε：摩爾吸光系數(shù)，單位L·mol-１·cm-１；

或:A＝lg（I0/It)=abc

c：溶液的濃度，單位g·L-１

a：吸光系數(shù)，單位L·g-１·cm-１

a與ε的關系為：a=ε/M（M為摩爾質量）1.朗伯-比耳定律A＝lg（I0/It)=-lgT=180

朗伯-比耳定律是吸光光度法的理論基礎和定量測定的依據(jù)。應用于各種光度法的吸收測量；摩爾吸光系數(shù)ε在數(shù)值上等于濃度為1mol/L、液層厚度為1cm時該溶液在某一波長下的吸光度；吸光系數(shù)a相當于濃度為1g/L、液層厚度為1cm時該溶液在某一波長下的吸光度。朗伯-比耳定律是吸光光度法的理論基礎和定量測定的依據(jù)。181紫外可見分光光度計基本組成光源單色器樣品室檢測器顯示紫外可見分光光度計基本組成光源單色器樣品室檢測器顯示182二、分光光度計的類型1.單光束

簡單，價廉，適于在給定波長處測量吸光度或透光度，一般不能作全波段光譜掃描，要求光源和檢測器具有很高的穩(wěn)定性。2.雙光束自動記錄，快速全波段掃描?？上庠床环€(wěn)定、檢測器靈敏度變化等因素的影響，特別適合于結構分析。儀器復雜，價格較高。二、分光光度計的類型1.單光束2.雙光束183第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生（二）激發(fā)光譜與熒光光譜（三）熒光分析儀器（四）熒光分析方法特點及應用重點：激發(fā)光譜與熒光光譜；具有熒光性質的分子的結構特征。第6章熒光分光光度法

（一）熒光的產生184熒光與分子結構的關系（2）共軛效應→*躍遷芳香族化合物。共軛雙鍵結構有利于發(fā)光。共軛體系越大,越易產生熒光,熒光效率也增大.─(CH=CH)3─

φ=0.68─(CH=CH)2─φ=0.28電子躍遷類型大部分熒光化合物電子躍遷的能級是由→*躍遷或n→*電子躍遷而被激發(fā)的。熒光與分子結構的關系（2）共軛效應→*躍遷─(185（3）剛性平面結構酚酞(無熒光)8－羥基喹啉(弱熒光)紅色熒光CO-OOCOO-COCOO--ONO-NOMgNO熒光素（3）剛性平面結構酚酞(無熒光)8－羥基喹啉(弱熒光)紅色186聯(lián)二苯φ=0.2芴φ=1.03,4-苯并芘(強熒光物質)CH2聯(lián)二苯φ=0.2芴φ=1.03,4-苯并芘(強187剛性平面結構：可降低分子振動，減少與溶劑的相互作用，故具有很強的熒光。如熒光素和酚酞有相似結構，熒光素有很強的熒光，酚酞卻沒有。剛性平面結構：可降低分子振動，減少與溶劑的相互作用，故188（4）取代基的影響

給電子基增強熒光：－OH,－OR,－NH2,－NHR,－NR2,－C≡N吸電子基減弱熒光：－COOH,－C=O,－NO2,－N＝N,－Cl,－Br,－I與體系作用小的取代基影響不明顯：－SO3R,－NH3＋,－SH,－F,－R。COOHNO2I無熒光NH2OH比熒光強50倍（4）取代基的影響給電子基增強熒光：COOHNO2I無熒光189

取代基之間若發(fā)生氫鍵，增強分子平面性和剛性會加強熒光:有熒光COOHOH無熒光OHCOOH水楊酸有熒光OHOHCO取代基之間若發(fā)生氫鍵，增強分子平面性和剛性會加強熒光190測量熒光的儀器主要由四個部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器系統(tǒng)、檢測器。

特殊點：有兩個單色器；光源與檢測器通常成直角；單色器位置不同；比色皿不同(熒光要用四面透光的)6.3.1熒光分光光度計測量熒光的儀器主要由四個部分組成：激發(fā)光源、樣品池、雙單色器191第7章薄層色譜法

（一）概述（二）薄層色譜的基本原理（三）薄層色譜的操作技術（四）薄層色譜法定量分析（五）薄層色譜法在生物工程分析中的應用重點：薄層色譜的基本原理和薄層色譜的操作技術。第7章薄層色譜法

（一）概述1927.2薄層色譜法的基本原理1.保留參數(shù)（Rf值）用來表征斑點位置的基本參數(shù)是保留因子，通常稱作比移值，用Rf表示。原點SRWLsL。Lr原點參比樣品前沿7.2薄層色譜法的基本原理1.保留參數(shù)（Rf值）原點SRW193

3.分配系數(shù)K=cS/cm，表示，即分離達到平衡時，組分在固定相和流動相的濃度之比。4.分離度

1947.3.4流動相與展開體系1.液-固吸附——在該色譜中，溶質的保留和分離選擇性決定于三個因素：溶解能力流動相溶質吸附劑相互作用競爭一.展開體系:7.3.4流動相與展開體系1.液-固吸附——在該色譜中，195定量計算外標法：此法是薄層定量最常用的方法。定量時，點樣量必須準確，樣品與對照品應點在同一塊薄層板上。用已知含量的對照品得出樣品含量的一種方法。內標法:選一個純度高、化學性質穩(wěn)定、在薄層上能與對照品分開的物質作內標物，并準確稱取加到被測物中，根據(jù)內標物的質量算出被測物的含量。定量計算196薄層色譜法分離樣品的步驟.

制板活化點樣展開薄層色譜法分離樣品的步驟.

制板活化點樣展開197第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論（二）定性分析方法（三）定量分析方法（四）氣相色譜檢測器（五）氣相色譜的應用重點：塔板理論，定量方法的分類特點及適應范圍、氣相色譜儀結構組成和氣相色譜檢測器的選擇和應用。第8章氣相色譜分析法（一）概述和基本理論198二.氣相色譜法的定義：GC是一種以氣體為流動相的柱色譜法.根據(jù)所用的固定相狀態(tài)不同,可分為氣固色譜和氣液色譜.固定相（stationaryphase):色譜法中，填入玻璃管內靜止不動的一相（固體或液體）稱為固定相。如離子交換樹脂法中的樹脂相。流動相(mobilephase):自上而下運動的一相（一般是氣體或液體）稱為流動相。色譜柱(chromatographycolumn):裝有固定相的管子稱為色譜柱。二.氣相色譜法的定義：GC是一種以氣體為流動相的柱199四、氣相色譜儀結構及一般流程1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；3-凈化干燥管；4-針形閥；5-流量計;6-壓力表；4-針形閥；5-流量計;6-壓力表；9-熱導檢測器；10-放大器；11-溫度控制器；12-記錄儀；載氣系統(tǒng)進樣系統(tǒng)色譜柱檢測系統(tǒng)溫控系統(tǒng)四、氣相色譜儀結構及一般流程1-載氣鋼瓶；2-減壓閥；載氣系2001.基線與基線漂移基線：在色譜操作條件下，僅有流動相通過監(jiān)測器時，由記錄儀得到的信號－時間曲線。基線漂移：基線隨時間定向緩慢地變化?；€基線漂移圖8-1某物質的色譜圖8.2基本理論8.2.1基本概念1.基線與基線漂移基線：在色譜操作條件下，僅有流動相通過監(jiān)2012.死時間與死體積死時間（deadtime）：不被固定相吸附或溶解的惰性組分，從進樣到出峰的峰頂點之間測得的時間，以tM表示。死體積（deadvolume）：死時間內流動相流經色譜柱的體積，又指色譜柱填充固定相后的空隙體積。圖8-2某組分的色譜圖2.死時間與死體積死時間（deadtime）：不被固定相吸