某種生物（所有或部分DNA)限制酶多個(gè)DNA片段多個(gè)重組DNA受體菌的不同個(gè)體分別導(dǎo)入DNA連接酶載體群體（基因組或部分基因文庫(kù)）（不同個(gè)體含不同DNA片段）（同種限制酶切割）1.從基因組文庫(kù)中提取目的基因目的基因的制備：PCR技術(shù)DNA復(fù)制過(guò)程DNA變性（90～95℃）→退火（復(fù)性55~60℃）→子鏈延伸（70~75℃）→重復(fù)循環(huán)DNA復(fù)制起始，RNA引物形成→DNA片段生成→RNA引物水解→完整的DNA分子形成相同點(diǎn)原則堿基互補(bǔ)配對(duì)條件模板、原料（dCTP、dATP、dGTP、dTTP）、能量、酶、引物等不同點(diǎn)解旋方式氫鍵在高溫下斷裂，雙鏈全部解開(kāi)解旋酶催化氫鍵逐步斷裂場(chǎng)所體外主要在細(xì)胞核中引物DNARNA酶熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）解旋酶、DNA聚合酶、DNA連接酶等結(jié)果在短時(shí)間內(nèi)形成大量的DNA片段形成完整的DNA分子2.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因(1)反轉(zhuǎn)錄法：

以目的基因轉(zhuǎn)錄成的信使RNA為模板，反轉(zhuǎn)錄成互補(bǔ)的單鏈DNA，然后在酶的作用下合成雙鏈DNA，從而獲得所需的基因。目的基因的mRNA雜交雙鏈(單鏈RNA/單鏈DNA)單鏈DNA反轉(zhuǎn)錄酶DNA聚合酶雙鏈DNA(目的基因)3、人工合成目的基因（DNA合成儀）已知核苷酸序列，且基因較小，也可通過(guò)DNA合成儀用化學(xué)方法直接人工合成。如何構(gòu)建？導(dǎo)入的方法？如何檢測(cè)？進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)1.基因工程流程圖：（重組DNA分子導(dǎo)入農(nóng)桿菌，再讓農(nóng)桿菌感染植物細(xì)胞）1.目的基因?qū)胫参锛?xì)胞農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法：基因槍法：花粉管通道法雙子葉+裸子植物單子葉生出轉(zhuǎn)基因動(dòng)物基因表達(dá)載體顯微注射儀注入受精卵早期胚胎移植輸卵管或子宮中發(fā)育發(fā)育大腸桿菌Ca2+處理感受態(tài)細(xì)胞（易吸收DNA的生理狀態(tài)）基因表達(dá)載體緩沖液轉(zhuǎn)基因生物適宜溫度混合培養(yǎng)3.目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞2、目的基因?qū)雱?dòng)物細(xì)胞（常用受精卵）2.蛋白質(zhì)工程流程圖：蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)氨基酸序列多肽鏈基因DNA預(yù)期功能DNA合成分子設(shè)計(jì)mRNA生物功能轉(zhuǎn)錄翻譯折疊雜種植株融合的原生質(zhì)體AB再生出細(xì)胞壁脫分化愈傷組織再分化2.植物體細(xì)胞雜交技術(shù)1.植物細(xì)胞的融合2.植物組織培養(yǎng)植物細(xì)胞A原生質(zhì)體B原生質(zhì)體A雜種細(xì)胞AB去壁人工誘導(dǎo)融合完成的標(biāo)志植物細(xì)胞B去壁--酶解法融合內(nèi)容：膜、質(zhì)、核的融合。物理法化學(xué)法（篩選出雜種細(xì)胞）融合原理：膜的流動(dòng)性；動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)條件1、無(wú)菌、無(wú)毒的環(huán)境:（添加一定量的抗生素，定期更換培養(yǎng)液.）2、營(yíng)養(yǎng):（葡萄糖、氨基酸、促生長(zhǎng)因子、無(wú)機(jī)鹽、維生素、動(dòng)物血清等。）3、溫度和PH:36.5+（-）0.5度,7.2-7.44、氣體環(huán)境（注意作用）O2和CO2（95%空氣和5%CO2）O2是細(xì)胞代謝的需要，CO2是維持培養(yǎng)液的PH值不同DNA的兩個(gè)細(xì)胞A和B滅火的病毒等融合的細(xì)胞（兩個(gè)核）雜交細(xì)胞（單個(gè)核）有絲分裂3.動(dòng)物細(xì)胞融合雜交細(xì)胞的特點(diǎn)是什么？雜交細(xì)胞滅活的病毒等手段小鼠骨髓瘤細(xì)胞B淋巴細(xì)胞經(jīng)免疫的小鼠提取雜交瘤細(xì)胞第一次篩選用特定的選擇性培養(yǎng)基第二次篩選能產(chǎn)生特定抗體、培養(yǎng)條件下能無(wú)限增殖的雜交瘤細(xì)胞體外培養(yǎng)注射到小鼠腹腔提取單克隆抗體克隆化培養(yǎng)和抗體檢測(cè)4.單克隆抗體的制備比較項(xiàng)目植物組織培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)原理細(xì)胞的全能性細(xì)胞增殖培養(yǎng)基性質(zhì)固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基培養(yǎng)基特有成分蔗糖植物激素葡萄糖動(dòng)物血清培養(yǎng)結(jié)果植物體細(xì)胞株、細(xì)胞系培養(yǎng)目的快速繁殖、培育無(wú)病毒植株獲得細(xì)胞或細(xì)胞分泌蛋白1、植物組織培養(yǎng)與動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的比較2、植物體細(xì)胞雜交與動(dòng)物細(xì)胞融合的區(qū)別主要用于制備單克隆抗體獲得雜種植株用途物理、化學(xué)方法（同左）滅活的病毒物理（離心、振蕩、電刺激）化學(xué)（聚乙二醇）誘導(dǎo)方法使細(xì)胞分散后誘導(dǎo)細(xì)胞融合去除細(xì)胞壁后誘導(dǎo)原生質(zhì)體融合細(xì)胞融合的過(guò)程細(xì)胞膜的流動(dòng)性細(xì)胞膜的流動(dòng)性、植物細(xì)胞全能性細(xì)胞融合的原理動(dòng)物細(xì)胞融合植物體細(xì)胞雜交比較項(xiàng)目

精子、卵子發(fā)生的比較項(xiàng)目精子發(fā)生卵子發(fā)生區(qū)別場(chǎng)所睪丸的曲細(xì)精管（唯一場(chǎng)所）卵巢（MI）、輸卵管（MII）（場(chǎng)所不唯一）時(shí)

間初情期開(kāi)始到生殖機(jī)能衰退性別分化后開(kāi)始，卵泡的形成和在卵巢內(nèi)的儲(chǔ)備，是在出生前（胎兒期）完成的，減數(shù)第二次分裂是在精子和卵子的結(jié)合過(guò)程中（受精過(guò)程）完成的過(guò)程特點(diǎn)1.MI和MII是連續(xù)的，需變形2.細(xì)胞質(zhì)均等分配1、MI和MII是不連續(xù)的，不需變形2、細(xì)胞質(zhì)不均等分配結(jié)果形成4個(gè)精細(xì)胞形成1個(gè)卵細(xì)胞和3個(gè)極體（極體將來(lái)退化）相同點(diǎn)原始生殖細(xì)胞的增殖為有絲分裂生殖細(xì)胞的成熟為減數(shù)分裂成熟過(guò)程均經(jīng)一次復(fù)制和兩次分裂，子細(xì)胞中染色體數(shù)目減半選擇供體母牛受體母牛……同期發(fā)情處理……超數(shù)排卵供體公牛配種沖卵質(zhì)量檢查、培養(yǎng)胚胎移植妊娠檢查分娩（胚胎移植的犢牛）胚胎移植的基本程序：同期發(fā)情技術(shù)：主要是借助外源激素剌激卵巢，使其按照預(yù)定的要求發(fā)生變化，使處理母畜的卵巢生理機(jī)能都處于相同階段，從而達(dá)到同期發(fā)情。有性生殖