熒光光譜檢測(cè)技術(shù)

（一）熒光光譜法（fluorescencesqectroscopy）某物質(zhì)的分子吸收了外界能量后,能發(fā)射出熒光,根據(jù)發(fā)射出的熒光光譜的特征和強(qiáng)度對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定性和定量的分析方法稱為熒光光譜分析法

（二）熒光的產(chǎn)生及熒光光譜1．熒光的產(chǎn)生①吸收光能被激發(fā)②無(wú)輻射躍遷放出部分能量③從第一電子激發(fā)態(tài)最低振動(dòng)能級(jí)躍遷回基態(tài)的各振動(dòng)能級(jí)，以光的形式放出能量——熒光。④無(wú)輻射躍遷放出能量回到基態(tài)最低振動(dòng)能級(jí)。熒光發(fā)射波長(zhǎng)比吸收的入射光波長(zhǎng)要長(zhǎng)些，被物質(zhì)吸收的光稱為激發(fā)光，發(fā)出的光輻射稱為熒光。2．激發(fā)光譜與熒光光譜3.熒光分析儀器（四）影響熒光測(cè)定的因素1．激發(fā)光源2．溫度3．溶液pH值4．散射光的影響5．溶劑6．熒光熄滅

（五）熒光分析方法和應(yīng)用

1．定性分析2．定量分析依據(jù)3．應(yīng)用1）在生物化學(xué)中的應(yīng)用生物化學(xué)是熒光光譜儀應(yīng)用較為廣泛的領(lǐng)域，大量具有生物意義的物質(zhì)，如氨基酸、蛋白質(zhì)、酶和輔酶、嘌呤、嘧啶、卟啉、核酸、維生素A、B、C、D、E、K等等，均可用熒光光譜儀有效進(jìn)行分析測(cè)定。如用熒光法測(cè)定血液和動(dòng)物組織中的生育酚，激發(fā)光波長(zhǎng)為295nm，發(fā)射波長(zhǎng)為325nm。卟啉類化合物是一類廣泛存在于自然界的化合物，與生命現(xiàn)象關(guān)系最為密切的有葉綠素、血紅素、細(xì)胞色素、維生素B12等。用熒光光譜儀對(duì)這些化合物進(jìn)行鑒定和定量分析相當(dāng)有效。用直接或間接的方法對(duì)核酸（DNA、RNA和雙鏈多聚核苷酸等）進(jìn)行熒光測(cè)定，其檢測(cè)限可低于10-9g/ml水平，選擇性也相當(dāng)高，并可區(qū)分不同結(jié)構(gòu)的核酸。

2）在醫(yī)藥學(xué)中的應(yīng)用

熒光光譜儀在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用是多方面的，包括膜結(jié)構(gòu)和功能的研究，抗體形態(tài)的確定，生物分子的異質(zhì)研究，藥物相互作用的評(píng)價(jià)，酶活性和反應(yīng)的測(cè)定，熒光免疫分析，體內(nèi)化學(xué)過(guò)程的監(jiān)測(cè)等等。熒光光譜儀用于藥物檢測(cè)是極有效的工具，應(yīng)用相當(dāng)廣泛。多種抗瘧藥、抗生素、抗結(jié)核藥、