基因工程疫苗第二代疫苗：利用DNA重組技術，克隆并表達保護性抗原基因，利用表達的抗原產物或重組體本身制成的疫苗。包括：基因工程亞單位疫苗，基因工程載體疫苗，核酸疫苗，基因缺失活疫苗，蛋白質工程疫苗。RecombinantDNAexpressionpurified基因重組示意圖基因工程疫苗=F1？傳統(tǒng)疫苗（第一代疫苗） 通過改變培養(yǎng)條件或在不同寄生動物上傳代使致病微生物毒性減弱（減毒），或通過物理化學方法將其滅活來完成。牛分支桿菌F

Mycobacteriumbovis

置于含膽汁的培養(yǎng)基，逐漸增加膽汁的濃度13年卡介苗BacillusCalmette-Guerin（BCG）在膽汁中適應性生長，充分減毒成為預防肺結核的疫苗。第一節(jié)基因工程亞單位疫苗基因工程亞單位疫苗（geneticengineeringsubunitvaccine）

基因工程亞單位疫苗是用DNA重組技術，將編碼病原微生物保護性抗原的基因導入受體菌（如大腸桿菌）或細胞，使其在受體細胞中高效表達，分泌保護性抗原肽鏈。提取保護性抗原肽鏈，加入佐劑即制成基因工程亞單位疫苗。技術關鍵：選擇合適的抗原基因和表達載體一、抗原基因的選擇抗原：單一蛋白質抗原，基因：對于穩(wěn)定抗原，一般選擇病原體表面糖蛋白基因；對于易變異抗原（流感，HIV,HCV),選擇各亞型共有的核心蛋白的保護性抗原基因序列；表面抗原+核心抗原（HBV）：重組兩種以上抗原二、表達系統(tǒng)亞單位疫苗表達系統(tǒng)：大腸桿菌、枯草桿菌、酵母、昆蟲細胞、哺乳動物細胞、轉基因植物、轉基因動物。選擇原則：免疫原性、表達效率、產物純化難易純度。舉例：乙肝表面抗原在酵母、哺乳動物細胞（CHO)有效表達，大腸桿菌不能表達。大腸桿菌表達載體最常用方式：將外源基因接在大腸桿菌啟動子下游－單純表達目的基因產物；免疫原性表達融合蛋白：保留轉錄和翻譯的起始信號，細菌基因和外源基因融合表達～雜交肽。以利于鑒定和純化酵母表達載體：屬于低等真核細胞，常用來表達糖基化抗原代表：酵母表達乙肝表面抗原疫苗臨床試驗證明安全有效，已替代了血源乙肝疫苗缺點：免疫效果較差（與完整病毒顆粒比）改善措施調整基因組合：表達成顆粒結構——免疫原性增強；如將甲肝病毒整個編碼區(qū)插入痘苗病毒載體中在體外將抗原聚合，再以脂質體或微囊包裹——增加免疫原性加入佐劑：氫氧化鋁第二節(jié)基因工程載體疫苗以微生物作載體，將保護性抗原重組到微生物體內，將微生物連同保護性抗原一同制成疫苗——載體疫苗（vectoredvacine)多為活疫苗優(yōu)點：用量少，不需純化，在接種者體內繁殖產生保護性抗原－特異性免疫應答，載體防護佐劑效應；目前用于重組疫苗生產的特定疫苗株有：腺病毒（adenovirus，Ad）載體；痘苗病毒載體；脊髓灰質炎病毒（polio）載體；單細胞皰疹病毒（herpessimplexvirus，HSV）載體；麻疹病毒（measlesvirus，MV）載體；霍亂弧菌；沙門氏菌；

BCG?，旣悅?、以細菌為載體的基因工程疫苗減毒沙門氏菌載體為最主要和用途最廣載體，誘導粘膜免疫反應沙門氏菌（Salmonellasp.)為腸道致病菌美國FDA批準以Ty21a減毒活疫苗為標準株特征：galE基因缺失，Vi抗原（－），LPS合成能力下降應用：痢疾桿菌O抗原質粒轉化Ty21a，大腸桿菌不耐熱腸毒素（LT），結核抗原、乙肝、流感、血吸蟲等。問題：外源基因表達產物降解，質粒丟失等卡介苗載體(BCG）：誘導細胞為主的免疫反應。具分枝桿菌和大腸桿菌復制子(oriM,ColEori),鏈霉素抗性基因,多克隆酶切位點,轉錄終止密碼,hsp60,hsp70啟動子.動物試驗顯示出療效.人臨床試驗I,II期不理想.二、以病毒為載體的基因工程疫苗病毒減毒活疫苗和亞單位蛋白質疫苗的結合。1）避免亞單位疫苗需要佐劑和多次注射的缺點2）誘導全面持久的免疫應答代表：痘苗病毒、腺病毒、脊髓灰質炎病毒、單純皰疹病毒。病毒基本結構痘病毒載體特點:使用成果200年，安全可靠；感染細胞種類多；容納大分子外源基因插入；高水平表達外源基因產物；耐熱、高效價培養(yǎng)。痘苗病毒載體已表達抗原狂犬病毒肝炎病毒皰疹病毒CMVEB病毒流感、副流感麻疹、登革熱日本腦炎HIV腫瘤抗原－腫瘤疫苗僅能肌肉注射，不能口服腺病毒載體易培養(yǎng)DNA拷貝數(shù)高高效啟動子外源基因長達7000bp多個血清型，重復注射避免抑制作用第三節(jié)核酸疫苗基因疫苗DNA直接肌肉注射屬核酸