聚酰胺柱層析文獻標識碼：ADeterminationoftheContentofTotalFlavonoidinLeavesofPogostemoncablin(Blaneo)Benth.bySpectrophotometryPANGHe，1YANGMing1，HULi-ping1，TIANYuan2，KANGTing-guo1(1.LiaoningUniversityofTCM ，Shenyang110032，Liaoning，China；2.TheAffiliatedHospitalofLioaningUniversityofTCM，Shengyang110032，Liaoning，China)：Objective：ContentoftotalflavoniodinleavesofPogostemoncablin(Blaneo)Benth.wasdeterminationbyspectrophotometry. Methods：Thedetectionwassetat510nmandtemperatureat2 5°C.Results:Themethodwaslinearwithintherangeof10.1?50.5mg/mL,r=0.9996.Theaveragerecoveryofassaywas97.2%?98.3%(n=5)andRS/2.0%withreferenceRutin.Conclustion:Themothodappearedtobesimple，highlyaccurate.Itcanbeuseedforthedeterminationoftotalflavonid.Keywords:spectrophotometry；LeavesofPogostemoncablin（Blaneo）Benth ；TotalFlavonoid；Rutin廣藿香是唇型科刺蕊草屬植物廣藿香Pogostemoncablin（Blanco）Benth.的干燥地上部分。廣藿香葉[1]為其藥用部位之一。關于廣藿香揮發(fā)性成分的研究較多，現(xiàn)代研究表明廣藿香葉主要含萜類、黃酮類、醇、酸、酮、醛等化合物[2]。據(jù)文獻報道廣藿香中一些黃酮類成分具有抗菌活性、抗癌活性、抗病毒等作用[4-5]。所以，廣藿香葉的有效部位不僅需要考慮揮發(fā)油成分，也應考慮黃酮類化合物。目前，關于廣藿香葉中總黃酮的含量測定的研究國內未見報道，因此，筆者采用聚酰胺柱層析――紫外分光光度法對6批廣藿香葉中的總黃酮進行測定，為科學評價廣藿香葉質量提供依據(jù)[6-7]。儀器與試藥UV1100型紫外可見光分光光度計（北京瑞利）；ANDFR-200電子分析天平（日本）。層析柱：2.5cmX14cm;超聲震蕩器TCQ-250超聲儀（北京醫(yī)療設備二廠）。蘆?。ㄖ袊幤飞镏破费芯克?，批號：100080-200306），其他試劑均為分析純。聚酰胺（80?100目，浙江省臺州市路橋四甲生化塑料廠）使用前用70%乙醇預處理。廣藿香來源于廣東省高要市蓮塘鎮(zhèn)購得石牌廣藿香，海南科源廣藿香種植基地購得海南廣藿香，及福州惠好藥房、沈陽藥房、江西（華氏）藥房及成都錦通藥房購得市售廣藿香，經中藥鑒定教研室主任翟延君教授鑒定均為廣藿香Pogostemocablin（Blanco）Benth。取上述6樣品，除去雜質，抖下干燥的葉，粉碎過20目篩，備用。實驗方法與結果2.1對照品溶液的制備精密稱取蘆丁對照品10.1mg（120°C干燥至恒重）置50mL容量瓶中，加甲醇適量，水浴加溶解，放冷，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。取25mL用蒸餾水稀釋到50mL配制成0.1mg/mL的對照品溶液。2.2供試品溶液的制備精密稱取上述廣藿香葉粉末各約1g，置100mL具塞瓶中，分別加入甲醇50mL超聲提取1h,取出，濾過，濾液揮干，拌于裝有0.3g聚酰胺（80?100目）的層析柱上，以去離子水洗脫至無色后，用2.5倍體積20%甲醇溶液沖洗后，棄取洗脫液，再用2.5倍體積70%甲醇溶液洗脫，收集該段洗脫液，蒸干，加甲醇定容至 50mL容量瓶中，搖勻，作為供試品溶液備用。2.3測定波長的選擇精密吸取上述供試品溶液各0.1mL加甲醇定容至10mL容量瓶中，搖勻。取蘆丁對照品，加甲醇溶液（濃度適量）作對照，于紫外可見光分光光度計200?600nm進行波長掃描，以甲醇為隨行空白試劑。結果提示，6份提取液與蘆丁對照品均在510nm處有最大吸收，故確定其為檢測波長。線性關系的考察精密吸取上述對照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL分別置于10mL容量瓶中，各加入50%甲醇使至5mL,先加5%NaN?溶液0.3mL,搖勻，放置6min，再加入10%AI（NO3）?3溶液0.3mL，搖勻，再放6min，力口4%NaO溶液4mL各加水稀釋到10mL,在510nm處測吸光度。用最小二乘法以吸光度對濃度進行線性回歸，回歸方程為Y=9.9406X+0.0022，r=0.9996(n=5)，結果表明，蘆丁對照品在所試濃度 10.1?50.5mg/mL范圍內呈良好的線性關系。精密度實驗分別取上述6批供試品溶液，測定吸光度，RSD均小于1%(n=5)。表明本法精密度良好。重現(xiàn)性考察分別取上述6批藥材樣品，按樣品制備方法各平行制備5份，依法測定，RSD?均小于2%表明重現(xiàn)性良好。穩(wěn)定性實驗取對照品及6批供試品溶液于室溫分別放置0、2、4、6、8h后，測定吸光度，計算得對照品及6批供試品的RSD均小于1.5%。結果表明，對照品及供試品溶液在8h內穩(wěn)定?；厥章蕦嶒灢捎眉訕踊厥章史?，取上述6批供試品溶液0.10mL各6份，分別添加已知含量的蘆丁對照品溶液，按2.9項下方法測定，平均回收率分別為石牌 97.2%；海南96.9%；福州98.3%;沈陽97.5%;江西97.8%;成都98.0%,RSD均小于2.0%(n=6)。樣品的測定和結果分別精密取上述六批供試品溶液，照2.2制備供試品溶液，精密量取供試品溶液 2mL置10mL量瓶中，按2.4自“加入50%甲醇使至5mL”起依法操作，以蘆丁為對照品溶液，在510nm波長處測定吸光度A。樣品中總黃酮測定結果見表1表1中藥材樣品均按中國藥典2005版一部附錄項下烘干法測定水分，含量均以干燥品計。討論文獻未見有關廣藿香葉總黃酮測定的報道，本試驗以蘆丁為對照品，建立了以聚酰胺柱層析――紫外分光光度法測定廣藿香葉中總黃酮的方法，為考查廣藿香葉的內在質量提供了一