2.2探究實(shí)踐：DNA片段的擴(kuò)增及電泳鑒定學(xué)習(xí)目標(biāo)1、嘗試進(jìn)行PCR的基本操作。2、配制PCR反應(yīng)體系。3、用電泳鑒定PCR的產(chǎn)物?；A(chǔ)梳理實(shí)驗(yàn)原理PCR利用了DNA的_________原理，通過調(diào)節(jié)溫度來控制DNA雙鏈的_______與結(jié)合。PCR儀實(shí)質(zhì)上就是一臺能夠自動(dòng)調(diào)控溫度的儀器。一次PCR一般要經(jīng)歷_____次循環(huán)。PCR的產(chǎn)物一般通過________凝膠電泳來鑒定。2．實(shí)驗(yàn)步驟（1）用微量移液器按照右欄中的配方或PCR試劑盒的說明書，在____________中依次加入各組分。（2）待所有的組分都加入后，蓋嚴(yán)離心管的蓋子。將微量離心管放入離心機(jī)里，離心約10s，使反應(yīng)液集中在管的_________。（3）參照下表的參數(shù)，設(shè)置好PCR儀的_________。將裝有反應(yīng)液的微量離心管放入PCR儀中進(jìn)行反應(yīng)。（4）根據(jù)待分離DNA片段的大小，用電泳緩沖液配制瓊脂糖溶液，一般配制質(zhì)量體積比為0.8%～1.2%的___________溶液。在沸水浴或微波爐內(nèi)加熱至瓊脂糖熔化。稍冷卻后，加入適量的核酸染料混勻。（5）將溫?zé)岬沫傊侨芤貉杆俚谷肽＞?，并插入合適大小的梳子，以形成___________。（6）待凝膠溶液完全凝固，小心拔出梳子，取出凝膠放入___________內(nèi)。（7）將電泳緩沖液加入電泳槽中，電泳緩沖液沒過凝膠___________為宜。（8）將擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物與_________________緩沖液（內(nèi)含指示劑）混合，再用微量移液器將混合液緩慢注入凝膠的__________內(nèi)。留一個(gè)________加入指示分子大小的標(biāo)準(zhǔn)參照物。（9）接通電源，根據(jù)電泳槽陽極至陰極之間的距離來設(shè)定電壓，一般為1～5V/cm。待指示劑前沿遷移接近____________時(shí)，停止電泳。10.取出凝膠置于紫外燈下觀察和照相。隨堂訓(xùn)練1.PCR技術(shù)常被用于檢測新冠病毒的感染情況，下列有關(guān)PCR的敘述正確的是()A.PCR技術(shù)可以直接擴(kuò)增新冠病毒的遺傳物質(zhì)用于檢測B.DNA聚合酶能催化子鏈由3′端向5′端延伸C.PCR既可以獲取目的基因也可以擴(kuò)增目的基因D.若在PCR儀中加入兩種引物則電泳結(jié)果一定會(huì)出現(xiàn)兩條條帶2.PCR反應(yīng)的最大特點(diǎn)是具有較強(qiáng)的擴(kuò)增能力與極高的靈敏性，但令人頭痛的問題是易污染，下列關(guān)于防止污染的辦法不正確的是()A.將樣品的處理、PCR反應(yīng)液的配制、PCR反應(yīng)及PCR產(chǎn)物的鑒定等步驟分區(qū)或分室進(jìn)行B.用移液器吸樣時(shí)要慢，每吸取一種試劑后，移液器上的槍頭都必須更換C.所有的PCR試劑都應(yīng)用大瓶分裝，以避免污染D.PCR反應(yīng)液應(yīng)與樣品及PCR產(chǎn)物分開保存3.下列關(guān)于核酸片段的擴(kuò)增及電泳鑒定的相關(guān)敘述,正確的是()A.PCR反應(yīng)緩沖液中一般要添加ATP,以激活耐高溫的DNA聚合酶B.mRNA也是核酸,因此可直接用PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增C.PCR產(chǎn)物常通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定D.瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液中含指示劑,其可以在紫外燈下被檢測出來

答案1.答案：C解析：A.PCR技術(shù)的原理是DNA雙鏈復(fù)制，是進(jìn)行DNA復(fù)制的技術(shù)手段，新冠病毒的遺傳物質(zhì)是RNA，不能直接擴(kuò)增新冠病毒的遺傳物質(zhì)用于檢測，故A錯(cuò)誤；B.DNA聚合酶能催化引物由3′端向5′端延伸，故B錯(cuò)誤；C.利用PCR技術(shù)擴(kuò)增目的基因是目的基因獲取的常用方法之一，根據(jù)合成引物的種類來提取DNA中的某個(gè)基因，所以PCR既可以獲取目的基因也可以擴(kuò)增目的基因，故C正確；D.引物是根據(jù)基因的首端和尾端的DNA序列合成的，若在PCR儀中加人兩種引物則電泳結(jié)果不一定會(huì)出現(xiàn)兩條條帶，因?yàn)橐锟赡苁窍嗤?，故D錯(cuò)誤。2.答案：C解析：PCR所用的緩沖液和酶等應(yīng)分裝成小份，并在-20℃儲(chǔ)存。使用前，將所需試劑從冰箱拿出，放在冰塊上緩慢融化，故C錯(cuò)誤。3.答案：C解析：A、耐高溫的DNA聚合酶不需要添加ATP激活，A錯(cuò)誤；B、mRNA是核酸，但不能直接用PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增，需要先反轉(zhuǎn)錄為cDNA再用PCR擴(kuò)增儀擴(kuò)增，B錯(cuò)誤；C、PCR的產(chǎn)物一股通過瓊脂糖凝膠電泳來鑒定，在凝膠中DNA分子的遷移速率與凝膠的濃度、DNA分子的大小