ICS65.020.01CCSICS65.020.01CCSB16四 川 省 地 方 標(biāo) 準(zhǔn)DB51/T3006—2023水稻對(duì)南方水稻黑條矮縮病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程20232023020720230408四川省市場(chǎng)監(jiān)督管理局發(fā)布目 次前言 II112范引文件 13語定義 14劑設(shè)備 15間圃定 26工種定 47性價(jià) 6附錄A（范）南水稻條縮毒測(cè)術(shù)-RT-PCR法 7附錄B（范）南水稻條縮品抗評(píng)價(jià)級(jí)準(zhǔn) 10附錄C（料）南水稻條縮品抗調(diào)查載表 11附錄D（料）南水稻條縮品抗田間定意圖 13前 言本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。水稻對(duì)南方水稻黑條矮縮病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程范圍資源資源（GB/T15794稻飛虱測(cè)報(bào)調(diào)查規(guī)范NY/T2631南方水稻黑條矮縮病測(cè)報(bào)技術(shù)規(guī)范3術(shù)語和定義3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1感病對(duì)照品種TN1susceptiblecontrolvarietyTN1高感南方水稻黑條矮縮病的秈型常規(guī)水稻品種臺(tái)中本地1號(hào)。3.2感病株susceptiblestrain表現(xiàn)南方水稻黑條矮縮病癥狀的水稻植株。3.3感病株率susceptibleplantrate病株占調(diào)查水稻植株總數(shù)的百分率。3.4無毒白背飛虱non-toxicwhite-backedplanthopper經(jīng)檢測(cè)不攜帶南方水稻黑條矮縮病毒的白背飛虱。3.5有效鑒定株數(shù)numberofeffectiveidentificationplants分蘗盛期或拔節(jié)初期存活的參鑒水稻株數(shù)。4試劑與設(shè)備80%～9012h；1000mL玻1mmTN1TN1TN1TN16TN1保護(hù)行或誘發(fā)行之間，各品種移栽10312107d～10dTN110d～45d～10dTN11030kg～40kg/667m230d～35d×18cm。灌溉水與常規(guī)管理一致。秧田期較常規(guī)管理增施尿素5kg/667m2素10kg/667m23按照GB/T15794667m2500頭以上，從中隨機(jī)選取100頭，用RT-PCR檢測(cè)（參照本附錄A）小批量白背飛虱或Dot-ELISA（參照NY/T2631C）田間鑒定的有效傳毒蟲量用FVS表示，按式（1）計(jì)算。FVS=N×PVS （1）式中：FVS——間定有傳毒量單為每頃（/hm2）；N ——背虱量單位頭公（/hm2）；PVS——白背飛虱帶毒率，單位為百分率（%）。計(jì)算結(jié)果精確到小數(shù)點(diǎn)后兩位。當(dāng)FVS值處于1.5×106～6.0×106頭/hm2范圍內(nèi)，方可進(jìn)行下一步的病情調(diào)查。CC.1的表C.21/3）BB.2。TN1抽穗黃熟期感病株率用Rif表示，數(shù)值以%計(jì)，按式（2）計(jì)算：Rif=(nif+nd)/(ntf+nd)×100% （2）式中:Rif——抽穗黃熟期感病株率，單位為百分率（%）；nif——抽穗黃熟期感病株數(shù)，單位為株；nd——分蘗期感病株且在抽穗黃熟期死亡株數(shù)，單位為株；ntf——抽穗黃熟期存活總株數(shù)，單位為株。計(jì)算結(jié)果精確到小數(shù)點(diǎn)后兩位。相對(duì)發(fā)病率Rr表示，數(shù)值以%計(jì)，按式（3）計(jì)算：Rr=Rif/Rsf×100% （3）式中:Rr——抽穗黃熟期相對(duì)發(fā)病率，單位為百分率（%）；Rif——抽穗黃熟期感病株率，單位為百分率（%）；Rsf——抽穗黃熟期感病對(duì)照的感病株率，單位為百分率（%）；計(jì)算結(jié)果精確到小數(shù)點(diǎn)后兩位。白背飛虱若蟲或成蟲自田間采集。選取飼喂白背飛虱的水稻種子用水浸種24h后，紗布覆蓋，恒溫箱32℃±2℃催芽24h～48h，選取25?！?080mm～110mm6d～7d待苗長至1.5葉期時(shí)，將待產(chǎn)的單頭白背飛虱移入杯中產(chǎn)卵，約3d后將成蟲移出，單獨(dú)保存，7d～10dNY/T2631附錄30頭～50在重病區(qū)采集表現(xiàn)南方水稻黑條矮縮病疑似癥狀的水稻植株種植在防蟲網(wǎng)籠中的塑料桶中。采病株葉片按照NY/T2631附錄C的規(guī)定或參考附錄A進(jìn)行檢測(cè)，確認(rèn)感染南方水稻黑條矮縮病毒則作為毒源保存，并經(jīng)白背飛虱接種擴(kuò)繁病株。將7.2100mm～200mm齡～2其中,并用60目防蟲網(wǎng)封口。飼毒2d后將蟲移入內(nèi)徑80mm～110mm，預(yù)先育有白背飛虱喜食品種如TN1，11d30NY/T2631C參試品種，含感病對(duì)照經(jīng)5.1.3方法浸種、催芽；選取30粒左右發(fā)芽良好的種子均勻播于盛有自然肥力土壤的內(nèi)徑80mm～110mm塑料杯中。每參試品種重復(fù)3次。水稻幼苗生長至1.5葉～2葉齡期。選取6.3IVS/（4）IVS=N×PVS （4）式中:IVS——人工接種鑒定的有效接種蟲量，單位為頭/株；N——接種白背飛虱數(shù)量，單位為頭。當(dāng)IVS1～2頭/5080mm～110mm26℃±1℃，且每天上午和下午各趕蟲一次，使白背飛虱分布均勻，2d后用殺蟲劑將接種用白背飛虱全部撲殺，將秧苗移出塑料杯，至15℃～30℃條件下培育，常規(guī)管理，定期觀察植株發(fā)病情況。237dDot-ELISA（按照NY/T2631附錄C的規(guī)定）或RT-PCR檢測(cè)確認(rèn)（參考附錄A）。30（3）Rit（5）Rit=nit/ntt×100% （5）式中:Rit——苗期感病株率，單位為百分率（%）；nit——苗期感病株數(shù)，單位為株；ntt——接種病毒的總株數(shù)，單位為株。計(jì)算結(jié)果精確到小數(shù)點(diǎn)后兩位。田間鑒定和人工接種鑒定均根據(jù)相對(duì)發(fā)病率進(jìn)行抗性評(píng)價(jià)，抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見附錄B.1。當(dāng)品種抗性在不同地區(qū)間、不同年度間或批次間鑒定結(jié)果表現(xiàn)不一致時(shí)，以最差的抗性表現(xiàn)為準(zhǔn)。附錄A（規(guī)范性）南方水稻黑條矮縮病毒檢測(cè)技術(shù)-RT-PCR法試劑除特別說明以外，本文件所用試劑均為分析純，所有試劑均用無RNA酶污染的容器，可用1‰DEPC（焦碳酸乙二酯）水處理后高壓滅菌并分裝。TRIzolReagents（購于Invitrogen20℃75%（DEPCDEPC1‰DEPCRNATrisEDTA0.5ol/50×TAETris堿242g57.1ml；EDTA（0.5mol/L）100ml1000ml。PrimeScriptTMOneStepRT-PCRKit（DNAMarker（Gelred0.01g（12000r/minA.2.3冰箱（2℃～8℃和-20℃（2μL、10μL、100μL1000μL）Eppenorf0.2、5m、.0m正向引物SRB-S10-F5’-CCACATCGCGTCATCTCAAACTAC-3’反向引物SRB-S10-R5’-CGGTCTTACGCAACGATGAACC-3’下列采樣工具必須經(jīng)（121±2）℃，15min高壓滅菌并烘干：剪刀，鑷子，研缽，Eppendorf管（0.2mL、1.5mL、2.0mL），吸頭。（7d新鮮樣品若需長期保存應(yīng)置于-70℃以下，避免反復(fù)凍融（凍融不超過3次）。取水稻組織0.1Eppendorf按照0.1g/1mLTRIzolreagent,加入適量TRIzolreagent每1mLTRIzolreagent加入0.2mL氯仿，蓋好管蓋，充分震蕩15s，室溫靜置5min；12000r/min，4℃15min吸取A4.4.3EppendorfEppendorf管10min。12000r/min，4℃10min600μL754000r/min3min～5minRNA10μL～15μLDEPCRNA2hRT-PCR4000r/min3min～5minRNA10μL～15μLDEPCRNA2hRT-PCR70檢測(cè)RT-PCRRT-PCRnA.1。表A.1A.4.5.2循環(huán)條件設(shè)置將A4.5.1中離心后的PCR管放入PCR儀內(nèi)，記錄樣本擺放順序。試劑使用量終濃度PrimeScript1StepEnzymeMix1μL2×1StepBuffer（DyePlus）10μL正向引物SRB-S10-F1μL0.4μM反向引物SRB-S10-R1μL0.4μMTemplateRNA1μL～3μLRNaseFreedH2O補(bǔ)充反應(yīng)體積至20μL循環(huán)條件設(shè)置：第一階段，反轉(zhuǎn)錄50℃/30min；第二階段，預(yù)變性94℃/2min；第三階段，94℃/30s，58℃/30s，72℃/1min，25～30個(gè)循環(huán)；第四階段：72℃延伸5min。A.4.5.3電泳檢測(cè)取PCR（約1（20min～30min）后，GelredDNAMarker920bp附錄B（規(guī)范性）南方水稻黑條矮縮病品種抗性評(píng)價(jià)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)南方水稻黑條矮縮病品種抗性評(píng)價(jià)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)見表B.1。表B.1南方水稻黑條矮縮病抗性評(píng)價(jià)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)抗性級(jí)別相對(duì)發(fā)病率%抗性水平0級(jí)0免疫1級(jí)0.1～5高抗3級(jí)5.1～15中抗5級(jí)15.1～30中感7級(jí)30.1～60感病9級(jí)>60.1高感南方水稻黑條矮縮病病情級(jí)別及癥狀見表B.2。表B.2南方水稻黑條矮縮病病情級(jí)別及癥狀病情級(jí)別病株癥狀0級(jí)全株所有分蘗均能正常抽穗、結(jié)實(shí)，無明顯矮化分蘗，感病單株數(shù)為0。1級(jí)全株1-2個(gè)分蘗明顯矮化，但全部能結(jié)實(shí)，穎殼不變色。3級(jí)全株1-2個(gè)分蘗明顯矮化，但頂部超過1/3小穗能結(jié)實(shí)。5級(jí)全株1-2個(gè)分蘗明顯矮化，頂部有小穗結(jié)實(shí)，但結(jié)實(shí)率低于1/37級(jí)全株1個(gè)以上明顯矮化、完全不結(jié)實(shí)分蘗或出現(xiàn)2個(gè)以上結(jié)實(shí)受影響、穎殼褐變分蘗。9級(jí)全株一半以上分蘗明顯矮化或全株矮化。南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—分蘗拔節(jié)期見表C.1。表C.2南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—分蘗拔節(jié)期見表C.1。表C.2南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—抽穗黃熟期播種日期調(diào)查日期調(diào)查人記載人附錄C（資料性）南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—分蘗拔節(jié)期見表C.1。表C.1南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—分蘗拔節(jié)期播種日期調(diào)查日期調(diào)查人記載人品種編號(hào)品種名稱有效株數(shù)感病株數(shù)感病株率相對(duì)發(fā)病率病級(jí)A1A2A3A4A5A6A7A8A9………感病對(duì)照品種編號(hào)品種名稱總株數(shù)存活株數(shù)感病株數(shù)感病株率相對(duì)發(fā)病率病級(jí)A1A2A3A4A5A6表C.2南方水稻黑條矮縮病品種抗性調(diào)查記載表—抽穗黃熟期（續(xù)）品種編號(hào)品種名稱總株數(shù)存活株數(shù)感病株數(shù)感病株率相對(duì)發(fā)病率病級(jí)A7A8A9………感病對(duì)照附錄D（資料性）南方水稻黑條矮縮病品種抗性田間鑒定示意圖南方水稻黑條矮縮病品種抗性田間鑒定示意圖見圖D.1。TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1A1A1A1A1A1A1A1A1A1A1TN1TN1TN1TN1TN1TN1A2A2A2A2A2A2A2A2A2A2TN1TN1TN1TN1TN1TN1A3A3A3A3A3A3A3A3A3A3TN1TN1TN1TN1TN1TN1A4A4A4A4A4A4A4A4A4A4TN1TN1TN1TN1TN1TN1A5A5A5A5A5A5A5A5A5A5TN1TN1TN1TN1TN1TN1A6A6A6A6A6A6A6A6A6A6TN1TN1TN1TN1TN1TN1A7A7A7A7A7A7A7A7A7A7TN1TN1TN1TN1TN1TN1A8A8A8A8A8A8A8A8A8A8TN1TN1TN1TN1TN1TN1A9A9A9A9A9A9A9A9A9A9TN1TN1TN1TN1TN1TN1A10A10A10A10A10A10A10A10A10A10TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1TN1A1A1A1A1A1A1A1A1A1A1TN1TN1TN1TN1TN1TN1A2A2A2A2A2A2A2A2A2A2TN1TN1TN1TN1TN1TN1A3A3A3A3A3A3A3A3A3A3TN1TN1TN1TN1TN1TN1A4A4A4A4A4A4A4A4A4A4TN1TN1TN1TN1TN1TN1A5A5A5A5A5A5A5A5