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實驗六PCR反應(yīng)的學(xué)習(xí)課件第1頁/共9頁RNA電泳理想結(jié)果第2頁/共9頁RNA電泳理想結(jié)果第3頁/共9頁實驗六PCR反應(yīng)

PCR的過程：高溫變性：將反應(yīng)體系置于高溫下變性，使雙鏈DNA解鏈為兩單鏈一、實驗?zāi)康?/p>

了解PCR的基本原理，掌握PCR的基本操作技術(shù)。二、實驗原理PCR技術(shù)是通過模擬體內(nèi)DNA復(fù)制的方式，在體外選擇性地將DNA的某個特殊區(qū)域擴增出來的技術(shù)。低溫退火：引物與模板鏈結(jié)合，形成部分雙鏈DNA第4頁/共9頁中溫延伸：TaqDNA聚合酶使引物從5′端向3′端延伸，4種dNTP摻入合成新的DNA互補鏈反復(fù)進行這種變性、退火和聚合反應(yīng)循環(huán)，可使兩端引物限定范圍內(nèi)的DNA序列以指數(shù)形式擴增。第5頁/共9頁三、實驗材料

實驗二所提質(zhì)粒pET-cam5。

（請先按如下步驟操作：取0.5μl實驗二抽提的質(zhì)粒置于一PCR管，加入19.5μl滅菌蒸餾水，混勻后作為這次PCR實驗用DNA模板)四、試劑rTaq酶、10xPCRbufferdNTPmixtrures(10mM)前向引物(P1)(10uM)反向引物(P2)(10uM)1.0%瓊脂糖凝膠第6頁/共9頁五、實驗步驟1、PCR反應(yīng)混合液的配制(50μl)10xPCRbuffer5μldNTPmixture4μl

前向引物P12μl

反向引物P22μl

模板DNA0.1μlrTaq酶0.5μl

所有試劑按量仔細添加后，輕輕混勻，稍離心后即可，為了防止反應(yīng)混合液蒸發(fā)，最后添加20μl礦物油。

去離子水36.4μl第7頁/共9頁2、PCR儀的參數(shù)設(shè)置

94℃4min94℃30sec62℃30sec72℃20sec72℃5min3、瓊脂糖凝膠電泳檢測

40cycles

反應(yīng)結(jié)束后，取5μlPCR產(chǎn)品，加入1μl6xloadingbuffer，混勻后點樣，電泳15min。

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