實驗六植物組織中總糖和還原糖含量的測定DNS法第1頁/共15頁實驗六、植物組織中總糖和還原性糖含量的測定第2頁/共15頁1、實驗目的掌握總糖和還原糖含量的測定方法學習總糖和還原糖提取的方法第3頁/共15頁2、實驗重點和難點利用3,5-二硝基水楊酸法測定還原糖含量的實驗原理多糖在酸性加熱條件下會降解為還原糖第4頁/共15頁3、實驗原理3.1、還原糖的概念指含有游離的半縮醛（酮）基糖。單糖都是還原糖；某些二糖是還原糖（如麥芽糖、乳糖等）；多糖多為非還原糖。葡萄糖分子中含有游離醛基，果糖分子中含有游離酮基，乳糖和麥芽糖分子中含有游離的醛基，故它們都是還原糖。第5頁/共15頁3.2、3,5-二硝基水楊酸比色法

總糖的提取及雙、多糖的酸水解。利用糖的溶解度不同，可將植物樣品中的單糖、雙糖和多糖分別提取出來，對沒有還原性的雙糖和多糖，可用酸水解法使其降解成有還原性的單糖進行測定，再分別求出樣品中還原糖和總糖的含量。第6頁/共15頁還原糖在堿性條件下加熱被氧化成糖酸及其它產(chǎn)物，3,5-二硝基水楊酸(黃色）則被還原為棕紅色的3-氨基-5-硝基水楊酸。在一定范圍內，還原糖的量與棕紅色物質顏色的深淺成正比關系，利用分光光度計，在540nm波長下測定光密度值，查對標準曲線并計算，便可求出樣品中還原糖和總糖的含量。由于多糖水解為單糖時，每斷裂一個糖苷鍵需加入一分子水，所以在計算多糖含量時應乘以0.9。第7頁/共15頁相對密度法折光法旋光法物理法3.3、糖含量測定方法第8頁/共15頁化學法還原糖法碘量法比色法直接滴定法

(改良的蘭—愛農法）高錳酸鉀法薩氏法

3，5—二硝基水楊酸酚—硫酸法蒽酮法半胱氨酸—咔唑法第9頁/共15頁

紙色譜薄層色譜

GCHPLCβ—半乳糖脫氫酶測半乳糖、乳糖葡萄糖氧化酶測葡萄糖發(fā)酵法——測不可發(fā)酵糖重量法——測果膠、纖維素、膳食纖維素

色譜法

酶法第10頁/共15頁4、操作步驟4.1、制定標準曲線管號012345標準葡萄糖溶液/mL00.20.40.60.81.0蒸餾水/mL1.00.80.60.40.20DNS試劑/mL2.02.02.02.02.02.0沸水浴中準確煮沸5min，取出，用自來水冷卻至室溫蒸餾水/mL9.09.09.09.09.09.0葡萄糖濃度/mg/mL00.20.40.60.81.0A540第11頁/共15頁4.2、植物組織中總糖與還原糖溶液的獲取(1)還原糖：30mL水沖研缽2-3次1g土豆研成勻漿3mL水三角瓶中50℃水浴0.5h冷卻定到100mL混勻,過濾取濾液作為還原糖提取液(2)總糖：1g土豆研成勻漿3mL水三角瓶中沸水浴0.5h冷卻,用NaOH中和,加水定容到100mL混勻,過濾取濾液作為總糖提取液12mL水沖研缽2-3次10mL6MHClI2-KI檢測第12頁/共15頁4.3、用3,5-二硝基水楊酸法測還原糖、總糖含量管號空白對照還原糖樣液管總糖樣液管樣液/mL01.01.0水1.000DNS試劑/mL2.02.02.0沸水浴中準確煮沸5min，取出，用自來水冷卻至室溫蒸餾水/mL9.09.09.0A540第13頁/共15頁5、數(shù)