第35講動物細胞工程［課標要求I的應用等技術(shù)。42動物細胞工程包括細胞培養(yǎng)、核移植、細胞融合和干細胞考點一細胞培養(yǎng)是動物細胞工程的基礎(chǔ). 7?知雙■自芭梳理1.動物細胞培養(yǎng)(1)概念：從動物體獲得相關(guān)組織，分散成單個細胞后,在適宜環(huán)境下讓細胞生長和增殖的過程。⑵培養(yǎng)條件溫度、pH和濕度「溫度：細胞生長的最適宜溫度是37±0.5X.-pH：大多數(shù)細胞適宜的pH為7.2?7.4氣體「。2：細胞代謝所必需的］95%空氣和就Leo2：維持培養(yǎng)液中的pHj鬻片混對培養(yǎng)液和所有培養(yǎng)用具進行r無菌處理無菌藍-在培養(yǎng)基中加入抗生素毒的條件-在無菌環(huán)境下進行操作定期更換培養(yǎng)液,以便清除代謝物營養(yǎng)「基本成分：水、無機鹽、氨基酸、維生素、糖類、生長因子等-培養(yǎng)基：天然培養(yǎng)基、合成培養(yǎng)基［提醒］動物細胞培養(yǎng)一般用液體培養(yǎng)基，植物組織培養(yǎng)一般用固體培養(yǎng)2.原代培養(yǎng)原代培養(yǎng)概念培養(yǎng)過程特點細胞或組織離開有機體后的首次培養(yǎng)取材一解離細胞一培養(yǎng)貼附生長、接觸抑制［提醒］解離細胞所用的酶是胰蛋白酶或膠原蛋白酶等。3.傳代培養(yǎng)A.若a細胞和b細胞是植物細胞，需先去分化再誘導融合B.a細胞和b細胞之間的融合需要促融處理后才能實現(xiàn)C.c細胞的形成與a、b細胞膜的選擇透過性有關(guān)D.c細胞將同時表達a細胞和b細胞中的所有基因解析：選B。若a細胞和b細胞是植物細胞，需要用酶解法去掉細胞壁后再誘導融合，融合完成后的細胞再經(jīng)脫分化和再分化培養(yǎng)，A錯誤；a細胞和b細胞之間的融合需要一些特殊的誘導因素，B正確；c細胞的形成要經(jīng)過細胞膜的融合，與a、b細胞膜的流動性有關(guān)，C錯誤；c細胞內(nèi)有a、b兩細胞的遺傳物質(zhì)，但不能同時表達a、b細胞中的所有基因，D錯誤。突破2單克隆抗體的制備及應用核心素養(yǎng)生命觀念、社會責任（2022?浙江選考預測）下列關(guān)于利用細胞融合技術(shù)生產(chǎn)單克隆抗體的敘述,錯誤的是（）A.注射特定的抗原后，從小鼠的脾臟中獲取B淋巴細胞B.B淋巴細胞和骨髓瘤細胞能夠融合依賴于細胞膜具有流動性C.使用聚乙二醇促進細胞融合時，聚乙二醇的濃度及處理時間會影響融合效果D.利用特定的選擇培養(yǎng)基可以篩選出能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞解析：選D。制備單克隆抗體時，首先對小鼠注射特定的抗原，獲得免疫小鼠，然后從免疫小鼠的脾臟中獲得B淋巴細胞，A正確；單克隆抗體的制備過程中，B淋巴細胞和骨髓瘤細胞的融合依賴于細胞膜的流動性，B正確；促融劑的濃度和處理時間會影響細胞的融合效果，C正確；特定的選擇培養(yǎng)基可以篩選出雜交瘤細胞，但想要篩選出能產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細胞，還需要進行專一抗體檢驗，D錯誤。（2022?麗水模擬）如圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過程，有關(guān)敘述錯誤的是（）A.A.A.B.C.甲地小鼠3淋巴骨髓瘤

細胞細胞融合7選擇培養(yǎng)~體檢測癌隆胃克體抗單抗圖中實驗小鼠注射的甲是能與抗人體胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原利用PEG、仙臺病毒誘導和電脈沖誘導等方法可誘導細胞融合獲得乙用特定的選擇培養(yǎng)基對乙進行篩選，融合細胞均能生長，未融合細胞均不能生長A.B.C.甲地小鼠3淋巴骨髓瘤

細胞細胞融合7選擇培養(yǎng)~體檢測癌隆胃克體抗單抗圖中實驗小鼠注射的甲是能與抗人體胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原利用PEG、仙臺病毒誘導和電脈沖誘導等方法可誘導細胞融合獲得乙用特定的選擇培養(yǎng)基對乙進行篩選，融合細胞均能生長，未融合細胞均不能生長D.丙需進行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選后可獲得大量能分泌所需抗體的丁解析：選C。用特定的選擇培養(yǎng)基對乙進行篩選，融合的具有同種核的細胞和未融合的細胞均不能生長，只有雜交瘤細胞能生長，C錯誤。長句特甌力［原因分析類］1.動物體細胞進行體外培養(yǎng)時,1.動物體細胞進行體外培養(yǎng)時,1.動物體細胞進行體外培養(yǎng)時,（填“需要”或“不需要”）脫分化過程，原因是答案：不需要高度分化的動物細胞分化的潛能變窄，失去發(fā)育成完整個體的能力.哺乳動物的核移植可以分為胚胎細胞核移植和體細胞核移植，胚胎細胞核移植獲得克隆動物的難度（填“大于”或“小于”）體細胞核移植，其原因是。答案：小于胚胎細胞分化程度低，恢復全能性相對容易.若經(jīng)核移植獲得的克隆動物與供體動物性狀不完全相同，從遺傳物質(zhì)的角度分析其原因是O答案：卵母細胞的細胞質(zhì)中的遺傳物質(zhì)會對克隆動物的性狀產(chǎn)生影響.B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合實驗完成后，融合體系中除含有未融合的細胞和雜交瘤細胞外，可能還有,體系中出現(xiàn)多種類型細胞的原因是答案：B淋巴細胞相互融合形成的細胞、骨髓瘤細胞相互融合形成的細胞細胞融合是隨機的，且融合率達不到100%.未融合的B淋巴細胞經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后都不能存活，原因是答案：其不能無限增殖［開放思維類］［2020.全國I,T38節(jié)選］為研制抗病毒A的單克隆抗體，某同學以小鼠甲為實驗材料設(shè)計了以下實驗流程。制備單細胞懸液BB淋巴細胞B淋巴細胞骨髓瘤細胞融合

細胞雜交瘤細胞B淋巴細胞骨髓瘤細胞融合

細胞雜交瘤細胞能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞⑴寫出以小鼠甲的脾臟為材料制備單細胞懸液的主要實驗步驟:(2)為了得到能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞，需要進行篩選。圖中篩選1所采用的培養(yǎng)基屬于，使用該培養(yǎng)基進行細胞培養(yǎng)的結(jié)果是O圖中篩選2含多次篩選，篩選所依據(jù)的基本原理是(3)若要使能產(chǎn)生抗病毒A的單克隆抗體的雜交瘤細胞大量增殖，可采用的方法有 (答出2點即可)。答案：(1)取小鼠甲的脾臟用胰蛋白酶處理使其分散成單個細胞，加入培養(yǎng)液制成單細胞懸液⑵選擇培養(yǎng)基只有雜交瘤細胞能夠生存抗原與抗體的反應具有特異性⑶將雜交瘤細胞注射到小鼠腹腔內(nèi)增殖；將雜交瘤細胞在體外培養(yǎng)4.4.細胞克隆4.細胞克隆傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)概念將原培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞分離并稀釋后轉(zhuǎn)到多個培養(yǎng)瓶中，在新的培養(yǎng)基中進行傳代培養(yǎng)選篤泛指可傳代的細胞細胞系細胞株類型鬻器能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系算霜不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系細胞系 通過一定的選擇或純化方法，從原強”代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的縣譴4.細胞克隆傳代培養(yǎng)傳代培養(yǎng)概念將原培養(yǎng)瓶內(nèi)的細胞分離并稀釋后轉(zhuǎn)到多個培養(yǎng)瓶中，在新的培養(yǎng)基中進行傳代培養(yǎng)選篤泛指可傳代的細胞細胞系細胞株類型鬻器能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系算霜不能連續(xù)培養(yǎng)下去的細胞系細胞系 通過一定的選擇或純化方法，從原強”代培養(yǎng)物或細胞系中獲得的縣譴殊性質(zhì)的細胞特點一般具有恒定的染色體組型、病毒一敏感性或抗性及其他生化特性類型繇可連續(xù)多次傳代的細胞株境蔡可傳代次數(shù)有限的細胞株細胞克隆細胞克隆概念把一個單細胞從群體中分離出來單獨培養(yǎng),一使之繁衍成一個新的細胞群體的技術(shù)目苴土必須保證分離出來的細胞是一個而不是多短s個，即必須肯定所建成的克隆來源于單個要求 細胞克隆細胞經(jīng)過克隆培養(yǎng)后的細胞群，由于來源于一幽個共同的祖細胞，基因型一致,遺傳性狀一均一，是研究遺傳規(guī)律和生理特性的重要材料基礎(chǔ)診斷⑴制備肝細胞懸液時先用剪刀剪碎肝組織，再用胃蛋白酶處理。（）（2）肝細胞培養(yǎng)過程中通常在培養(yǎng)液中通入5%的C02刺激細胞呼吸。（）⑶動物細胞培養(yǎng)要定期更換培養(yǎng)液，其目的是防止細胞代謝產(chǎn)生的有毒物質(zhì)危害細胞。（）（4）培養(yǎng)保留接觸抑制的細胞在培養(yǎng)瓶壁上可形成多層細胞。（）⑸動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的原理是動物細胞的全能性。（）答案：⑴X⑵X(3)V(4)X(5)X核心素1.（2022?哈爾濱高三模擬）下圖為動物細胞培養(yǎng)的基本過程示意圖，相關(guān)敘述錯誤的是（）A.容器A中放置的一般是幼齡動物的器官或組織，需要用胰蛋白酶將組織分散成單個細胞B.在D瓶中極少數(shù)細胞存活，是因為存活的細胞獲得不死性，其遺傳物質(zhì)未發(fā)生改變C.為保證培養(yǎng)條件無菌，除進行滅菌外，所有操作都需在無菌條件下完成D.細胞培養(yǎng)時，需通入5%CO2,其主要作用是維持培養(yǎng)液的pH答案：B2.培育肉是利用動物體內(nèi)分離的成肌細胞或全能干細胞，采用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出類似動物肌肉的肉絲，同時添加了人體所需的元素如鐵、鈣等，使其營養(yǎng)更加豐富。下列相關(guān)敘述不正確的是（）肉類食品分離一-培養(yǎng)液肌肉纖維一支架（人造牛肉）A.A.容器A中放置的一般是幼齡動物的器官或組織，需要用胰蛋白酶將組織分散成單個細胞B.在D瓶中極少數(shù)細胞存活，是因為存活的細胞獲得不死性，其遺傳物質(zhì)未發(fā)生改變C.為保證培養(yǎng)條件無菌，除進行滅菌外，所有操作都需在無菌條件下完成D.細胞培養(yǎng)時，需通入5%CO2,其主要作用是維持培養(yǎng)液的pH答案：B2.培育肉是利用動物體內(nèi)分離的成肌細胞或全能干細胞，采用動物細胞培養(yǎng)技術(shù)培養(yǎng)出類似動物肌肉的肉絲，同時添加了人體所需的元素如鐵、鈣等，使其營養(yǎng)更加豐富。下列相關(guān)敘述不正確的是（）肉類食品分離一-培養(yǎng)液肌肉纖維一支架（人造牛肉）A.肌肉母細胞用胰蛋白酶處理肌肉組織，可以獲得分裂能力強的肌肉母細胞B.生物反應器內(nèi)應控制溫度適宜，并充入一定量的C02保證細胞呼吸C.培養(yǎng)液中的支架為細胞提供了更多的附著面積，有利于細胞貼壁生長D.“人造牛肉”的培養(yǎng)有利于工業(yè)化生產(chǎn)，產(chǎn)品是真肉養(yǎng)液的pH,B錯誤。項目植物組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)原理細胞全能性、細胞增殖細胞增殖取材植物的細胞、組織或器官胚胎或出生不久的幼齡動物器官或組織培養(yǎng)基成分水、無機鹽、有機營養(yǎng)成分、瓊脂、植物激素等水、無機鹽、氨基酸、維生素、糖類、生長因子、抗生素、血清等歸納題后悟道植物組織培養(yǎng)和動物細胞培養(yǎng)的比較只能獲得大量細胞，不能得到生結(jié)果植株或大量細胞物個體相同點都需人工條件下的無菌操作；都需適宜的溫度、pH等條件考點二通過細胞核移植克隆動物. 7.如認3梳理一一.動物細胞核移植將體細胞核移入一個去核的卵母細胞中,并使其發(fā)育成動物個體的過程。.克隆動物利用動物細胞核移植技術(shù)培育出的動物。.發(fā)展歷程⑴蛙腸上皮細胞和胚胎細胞核移植實驗胚胎細胞核的移植成功率遠近王成體細胞。（2）小鼠核移植實驗低等動物細胞的全能性一般比高等動物容易體現(xiàn)。（3）克隆羊“多莉”①高度分化的細胞經(jīng)過一定技術(shù)處理,也可回復到類似受精卵時期的功能,表現(xiàn)出全能性。②在胚胎和個體發(fā)育中，細胞質(zhì)具有調(diào)控細胞核發(fā)育的作用。.體細胞核移植過程供體

體細胞供體

體細胞供體

體細胞卵巢卵

母細胞細胞培養(yǎng)一去核細胞.重組融合,細胞母細胞發(fā)育一時心供體

體細胞卵巢卵

母細胞細胞培養(yǎng)一去核細胞.重組融合,細胞母細胞［提醒］核移植時應選Mil中期的卵母細胞的原因（1）此類細胞體積大，易于操作；（2）卵黃多，營養(yǎng)物質(zhì)豐富；（3）卵母細胞的細胞質(zhì)中存在激發(fā)細胞核全能性表達的物質(zhì)。基礎(chǔ)診斷⑴與“多莉”羊等克隆哺乳動物相關(guān)的技術(shù)有胚胎移植、細胞培養(yǎng)和核移植。（）⑵克隆植物和克隆動物都只具備一個親本的遺傳特性。（）⑶動物體細胞核移植的難度明顯高于胚胎細胞核移植。()⑷選擇MII中期的卵母細胞作為核移植的受體細胞的主要原因是該細胞大，顯微操作方便。()(5)通過核移植技術(shù)克隆動物還存在著成功率低、某些克隆動物早衰等問題。()(6)重組細胞具有發(fā)育成完整個體的能力。()(7)動物細胞核移植技術(shù)中普遍使用的去核方法是梯度離心法。()答案：(1)J(2)X(3)V(4)X(5)V(6)V.科學家培育克隆羊時，使用了三種供體細胞的細胞核，分別將這些細胞核移入去核卵母細胞中，形成重組細胞，發(fā)育成重組胚胎，這些重組胚胎的發(fā)育情況如下。供體細胞類型妊娠數(shù)/受體母羊數(shù)乳腺上皮細胞1/13胚胎成纖維細胞4/10早期胚胎細胞14/27下列相關(guān)分析不正確的是()A.早期胚胎細胞作為供體細胞時，妊娠成功率最高B.克隆羊的遺傳信息與供體細胞完全相同C.體細胞核移植難度高于胚胎細胞核移植D.重組細胞的發(fā)育與去核卵母細胞的細胞質(zhì)有關(guān)答案：B.(2022?南通高三模擬)為研究治療性克隆技術(shù)能否用于帕金森病的治療,科研人員利用人帕金森病模型鼠進行下圖實驗，相關(guān)敘述錯誤的是()鼠皮膚細胞②鼠皮膚細胞②令①早期胚鼠皮膚細胞②令①早期胚\鹿%胎培養(yǎng)

/“0獲取’鼠皮膚細胞②令①早期胚\鹿%胎培養(yǎng)

/“0獲取’③④誘導分化移植去核卵母細胞胚胎干細胞A 神經(jīng)元A.過程①中選擇MH中期的卵母細胞有利于細胞核全能性恢復B.過程②重組細胞培養(yǎng)依次經(jīng)歷了卵裂、桑意胚、原腸胚和囊胚等過程C.過程③的關(guān)鍵是利用特定條件誘導胚胎干細胞相關(guān)基因表達D.過程④對受體小鼠無需注射免疫抑制劑以抑制其細胞免疫功能解析：選B。過程②重組細胞培養(yǎng)依次經(jīng)歷了卵裂、桑甚胚、囊胚和原腸胚等過程，B錯誤。.胚胎干細胞也稱為ES細胞，下圖是來自小鼠囊胚的ES細胞形成組織細胞的示意圖。相關(guān)敘述錯誤的是()內(nèi)細胞團的細胞早期胚胎(囊胚)脂肪細胞內(nèi)細胞團的細胞早期胚胎(囊胚)神經(jīng)元?巨噬細胞平滑肌細胞神經(jīng)膠質(zhì)細胞A.脂肪細胞、神經(jīng)元等的形成是ES細胞分化的結(jié)果B.培養(yǎng)ES細胞的培養(yǎng)基中加入胰島素等激素以提高形成率C.ES細胞不具有發(fā)育的全能性D.神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細胞構(gòu)成鼠的神經(jīng)系統(tǒng)解析：選C。ES細胞具有發(fā)育的全能性，C錯誤。(1)克隆動物的重組細胞的細胞質(zhì)基因來源于受體細胞，細胞核基因來源于提供細胞核的親本，其遺傳物質(zhì)來自2個親本。(2)克隆動物絕大部分性狀與供體動物相同，少數(shù)性狀與提供卵母細胞的動物相同，與代孕動物的性狀無遺傳關(guān)系。(3)動物體細胞核移植技術(shù)(克隆)從生殖方式的角度看屬于無性生殖，重組細胞相當于受精卵，需要動物細胞培養(yǎng)和胚胎工程技術(shù)的支持。考點三通過細胞融合可產(chǎn)生具有新特性的細胞.?如旭■自此梳理一1.細胞融合概念在一些融合因子的作用下,將兩個或兩個以細胞融合上的細胞合并成二伙胞的技術(shù)左迭聚乙二醇處理、電流刺激或病毒誘導等細胞融合螟成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤等的——重要手段實例培育單克隆抗體2.單克隆抗體⑴概念：由一個B淋巴細胞增殖形成的細胞群所產(chǎn)生的單一型抗體分子。⑵制備原理①B淋巴細胞的特點：每一種B淋巴細胞只產(chǎn)生一種特異的抗體。②骨髓瘤細胞的特點：具有無限繁殖能力。③壽命有限的B淋巴細胞與具有無限繁殖能力的骨髓瘤細胞融合,經(jīng)篩選后就可以獲得既能產(chǎn)生特異性抗體，又能在正常培養(yǎng)條件下進行無限增殖的雜交瘤細胞。(3)制備過程單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體單克隆抗體(4)優(yōu)點：純度高,可大量制備，在應用時具有特異性強、靈敏度高的特點。(5)應用①將其作為特異性的探針,研究相應抗原蛋白的結(jié)構(gòu)、細胞學分布及功能。②用單克隆抗體可以快捷、準確地診斷和治療一些疾病。③將抗癌藥物連接到專門識別某種腫瘤細胞的里克隆抗隹上，單克隆抗體就會像“生物導彈”一樣攜帶抗癌藥物準確地聚集到腫瘤細胞，專一地殺死腫瘤細胞，這樣就避免了抗癌藥物在消滅腫瘤細胞的同時對人體正常細胞的損傷。基礎(chǔ)診斷mutnmumihi?基礎(chǔ)診斷mutnmumihi?mu：muimmimuiijii(2)動物細胞融合過程中既有細胞膜融合也有核的融合。()⑶跟植物原生質(zhì)體融合相比，動物細胞融合特有的誘導因素有聚乙二醇、病毒。( )(4)動物細胞融合后的雜交細胞仍然是二倍體細胞。()(5)單克隆抗體的制備首先要從小鼠體內(nèi)提取B淋巴細胞。()(6)單克隆抗體制備過程中需要經(jīng)過篩選才能獲得所需的雜交瘤細胞。()(7)雜交瘤細胞進行體內(nèi)培養(yǎng)，更容易控制培養(yǎng)條件。()答案：⑴J(2)V(3)X(4)X(5)X(6)V(7)71.植物體細胞雜交和動物細胞融合的比較體的比較比較項目植物體細胞雜交動物細胞融合原理細胞膜的流動性、細胞的全能性細胞膜的流動性、細胞增殖融合前處理除去細胞壁使細胞分散開相關(guān)酶纖維素酶和果膠酶胰蛋白酶或膠原蛋白酶誘導方法電刺激、離心振蕩、