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管理體系文件作業(yè)指導(dǎo)書（第A版第0次修改）文件編號(hào)：編寫：審核：批準(zhǔn)：批準(zhǔn)日期：受控狀態(tài)：口受控口非受控正副版本：口正本口副本持有者：發(fā)布日期： 實(shí)施日期:作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日1.目的使孔雀石綠的測(cè)定處于受控狀態(tài)，保證孔雀石綠檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性與一致性；規(guī)范參加本項(xiàng)目檢測(cè)工作人員的操作規(guī)程。適用范圍本作業(yè)指導(dǎo)書規(guī)定了水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物隱色孔雀石綠殘留量的酶聯(lián)免疫測(cè)定方法。本作業(yè)指導(dǎo)書適用于魚、蝦以及魚池或者魚缸水樣中的總的孔雀石綠殘留量的檢測(cè)。引用依據(jù)孔雀石綠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒使用說明書。水產(chǎn)品中孔雀石綠及其代謝物殘留量的快速篩選測(cè)定酶聯(lián)免疫法DB34/T1421-2011水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)品紫及其代謝產(chǎn)物的快速測(cè)定方法SN/T1768-2006水產(chǎn)品中孔雀石綠和結(jié)晶紫殘留量的測(cè)定高效液相色譜熒光檢測(cè)法GB/T20361-2006概述孔雀石綠是一種帶有金屬光澤的綠色結(jié)晶體，既是殺真菌劑，又是染料。長(zhǎng)期以來，漁民都用它來預(yù)防魚的水霉病、鰓霉病、小瓜蟲病等，而且為了使鱗受損的魚延長(zhǎng)生命，在運(yùn)輸過程中和存放池內(nèi)，也常使用孔雀石綠。研究顯示，孔雀石綠在魚體內(nèi)殘留時(shí)間長(zhǎng)，且具有高毒性、高殘留和致癌、致畸、致突變等副作用。酶聯(lián)免疫吸附法原理本孔雀石綠類酶聯(lián)免疫檢驗(yàn)試劑，主要是利用還原劑將樣品中的孔雀石綠還原成隱性孔雀石綠后，利用抗原與抗體之特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的基本原理來進(jìn)行的，換句話說，就是利用酶標(biāo)記物與樣品中之隱性孔雀石綠對(duì)微孔中之抗體來進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)反應(yīng)。在整個(gè)反應(yīng)當(dāng)中，如果樣品中之隱性孔雀石綠殘留的越多，相對(duì)地就會(huì)競(jìng)爭(zhēng)掉越多的抗體，使得結(jié)合了與微孔盤上包被的抗原結(jié)合抗體的二次抗體相對(duì)地就會(huì)減少。因此，反應(yīng)中之酶標(biāo)記物結(jié)合體-底物溶液之呈色就會(huì)很淡，甚至幾乎沒有顏色，此即為陽(yáng)性反應(yīng)。反之，若樣品中沒有含隱性孔雀石綠，則呈色會(huì)比較深，與陰性標(biāo)準(zhǔn)品呈色幾乎是一樣的，此即為陰性反應(yīng)。試劑和材料實(shí)驗(yàn)室用試劑：所用試劑除另有規(guī)定外，均為分析純。水為符合GB/T6682規(guī)定的二級(jí)水。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日乙酸乙酯。正己烷。12N鹽酸溶液孔雀石綠酶聯(lián)免疫試劑盒儀器和設(shè)備酶標(biāo)儀：配備450nm濾光片。分析天平：感量0.001g，感量0.0001g。5.3.3.恒溫培養(yǎng)箱。均質(zhì)器。旋渦振蕩器。離心機(jī)：離心力N4000g。氮吹儀5.3.8.微量單道/多道移液器：10uL~100uL；100uL~1000uL；50uL~300uLo水浴鍋。聚四氟乙烯離心管：5mL,50mL,具塞。樣品處理將2克已均質(zhì)之樣品放入15mL離心管中，加入0.4%還原劑3mL后立刻震蕩1分鐘使成肉漿狀。靜置30分鐘。再加A6mL0.002N鹽酸-乙酸乙酯，震蕩1分鐘。以離心機(jī)離心1700Xg（約3500rpm）10分鐘。離心后若于上層有機(jī)層內(nèi)觀察到白色膠狀物時(shí)，用竹棒或移液槍頭攪拌上層有機(jī)層后再次以1700Xg（約3500rpm）離心10分鐘。取3mL上層液（鹽酸-乙酸乙酯）至10mL玻璃管中，于60°C下，利用氮?dú)鈱⒂袡C(jī)溶劑吹干。于此玻璃管中加入正己烷1mL,劇烈震蕩將殘余物完全溶解（若氮吹后的管內(nèi)有很多油脂時(shí)，可將正己烷加入量改為2mL。）。緩緩加入1mL樣品稀釋液，輕柔混合震蕩（vortex）1分鐘。以離心機(jī)離心1700Xg（約3500rpm）10分鐘。若離心后不能確實(shí)分層而在兩層問出現(xiàn)乳化層時(shí)，請(qǐng)置于沸水中隔水加熱至上下確實(shí)分作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日層，待玻璃管冷卻至室溫后再次以離心機(jī)離心1700Xg（約3500rpm）10分鐘。用吸管吸去上層液（正己烷），再吸取下層液（水層）備用稀釋倍數(shù)：1酶聯(lián)免疫測(cè)定使用前將試劑盒置于室溫（20-25°C）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。取出需要數(shù)量的酶標(biāo)板微孔條插入框架中，將不用的微孔條放入自封袋，保存于2-8C不要冷凍；于適當(dāng)微孔分別加入100uL隱性孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)液。在另外的微孔加入100UL已完成前處理之樣品溶液。再于每一微孔另再加入100uL的1倍隱性孔雀石綠抗體。輕敲盤子四周，使其充分混合后室溫下反應(yīng)30分鐘。將微孔中之反應(yīng)液甩掉，再將300uL的1倍清洗液加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)此步驟洗3次。最后一次甩掉后，在吸水紙上拍干。于每一微孔加入100uL的1倍二次抗體。輕敲盤子四周，使其充分混合后室溫下反應(yīng)30分鐘。將微孔中之反應(yīng)液甩掉，再將300UL的1倍清洗液加滿每一微孔后甩掉，重復(fù)此步驟洗3次。最后一次甩掉后，在吸水紙上拍干。于每一微孔加入底物溶液100uL。輕敲盤子四周，使其充分混合后室溫卜反應(yīng)20分鐘。加入反應(yīng)終止液，每一微孔加入100uL。酶標(biāo)儀以單波長(zhǎng)450nm或雙波長(zhǎng)450nm/650nm判讀。結(jié)果判定定性判定用樣品的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出樣本所含孔雀石綠濃度范圍（ng/ml）。假設(shè)樣品1的吸光度值為0.313，樣品2的吸光度值為1.032，標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為1.892；0.025ppb為1.501；0.05ppb為1.175；0.1ppb為0.751；0.3ppb為0.421；0.6ppb為0.198。則樣品1的濃度范圍0.3ppb-0.6ppb;樣品2的濃度范圍0.05ppb-0.lppb。（再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)）作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日5.6.2.定量判定所獲得的每個(gè)濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值（B。）再乘以100%，即百分吸光度值。o B百分吸光度值（%）= X100%B0B一標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值。BO—0ng/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值。以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo)，以孔雀石綠標(biāo)準(zhǔn)品濃度（ng/ml）的半對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對(duì)應(yīng)的濃度，乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中孔雀石綠的實(shí)際濃度。若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計(jì)算，更便于大量樣品的準(zhǔn)確、快速分析。方法的檢出限、回收率、重復(fù)性檢出限本方法孔雀石綠及其代謝殘留物的檢出限為0.2ug/kg?；厥章试跇悠分刑砑?.1ug/kg?4ug/kg濃度水平時(shí)，回收率為70%?120%。重復(fù)性本方法的批內(nèi)變異系數(shù)＜10%，批間變異系數(shù)W10%。結(jié)果表述當(dāng)所對(duì)應(yīng)的樣品的測(cè)定值小于其檢出限時(shí)，報(bào)告為孔雀石綠未檢出。當(dāng)測(cè)定值大于檢出限時(shí)，報(bào)告為孔雀石綠檢出。出現(xiàn)陽(yáng)性值時(shí)（超過相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)定的限量值），需用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC/MS-MS）加以確證。液相色譜法原理試樣中的殘留的孔雀石綠、結(jié)晶紫及其代謝物用孔雀石綠、結(jié)晶紫快速檢測(cè)前處理試劑盒提供的試劑提取、濃縮后用液相色譜進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。試劑和材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，水為重蒸餾水。乙月青:色譜純。無(wú)水乙酸鈉。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日冰乙酸:色譜純。異丙醇。對(duì)-甲苯磺酸。乙酸鹽緩沖液:稱取4.950g無(wú)水乙酸鈉及0.950g對(duì)-甲苯磺酸，溶解于950mL水中，用冰乙酸調(diào)節(jié)溶液pH到4.5，最后用水定容到1000mL。標(biāo)準(zhǔn)品:孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫純度大于98%。標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液:準(zhǔn)確稱量孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫各10mg，用乙睛分別定容于100mL容量瓶中，配制成100Ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液。6.2.9.混合標(biāo)準(zhǔn)溶液:用流動(dòng)相稀釋標(biāo)準(zhǔn)貯備溶液，配制成孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫均為10Ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液°0°C?4°C避光保存?？兹甘G、結(jié)晶紫快速檢測(cè)前處理試劑盒。儀器和設(shè)備高效液相色譜儀:配紫外-可見光可變波長(zhǎng)檢測(cè)器；檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)間程序可控。勻漿機(jī)。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。離心機(jī):4000r/min,8000r/min。振蕩器。超聲波水浴。聚四氟乙烯離心管:2.5mL,50mL，具塞。微孔濾膜:0.45um。測(cè)定步驟提取、凈化準(zhǔn)確稱取已搗碎的樣品5.00g于50mL離心管中，先加入孔雀石綠、結(jié)晶紫快速檢測(cè)前處理試劑盒中的提取劑（液體20.0mL）、用勻漿機(jī)以8OOOr/min的速度均質(zhì)30s，再加入提取劑2（固體粉末），振蕩1min,4000r/min離心5min，取上清液10.0mL于雞心瓶中再加入異丙醇10mL50C?55C水浴旋轉(zhuǎn)蒸干。殘留物用1.0mL流動(dòng)相溶解，溶解液放人2.5mL離心管中，8000r/min離心5min后，用微孔濾膜過濾，濾液供儀器測(cè)定。繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線移取孔雀石綠、隱色孔雀綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)品紫混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，用流動(dòng)相稀釋成2ng/mL、

50ng/mL、250ng/mL、500ng/mL標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，用高效液相色譜儀測(cè)定，得出標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。測(cè)定a)b)c)流速：1.0mL/min；d)柱溫：室溫;液相色譜條件色譜往：C18柱，250mmX4.6mm（內(nèi)徑），粒度5um；流動(dòng)相：乙腈+乙酸鹽緩沖液（80+20，體積分?jǐn)?shù)）；a)b)c)流速：1.0mL/min；d)柱溫：室溫;e)檢測(cè)波長(zhǎng)時(shí)間程序：0min?5.0min,618nm;0min?12min,588nm;12min?18min,267nm;孔e)雀石綠的檢測(cè)波長(zhǎng)為618nm，結(jié)晶紫的檢測(cè)波長(zhǎng)為588nm,隱色孔雀石綠和隱色結(jié)晶紫的檢測(cè)波長(zhǎng)為267nm。f)進(jìn)樣量：f)進(jìn)樣量：50uLo色譜測(cè)定根據(jù)樣液中孔雀石綠、隱色孔雀綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫的含量情況，選定峰面積相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣液中孔雀石綠、隱色孔雀綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫的響應(yīng)值均應(yīng)在儀器的檢測(cè)線性范圍內(nèi)。在上述色譜條件下，孔雀石綠、隱色孔雀綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫的保留時(shí)間約為孔雀石綠4.0min,隱色孔雀石綠13.6min、結(jié)晶紫5.4min和隱色結(jié)晶紫14.7min。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附錄A中圖A.1o空白實(shí)驗(yàn)除不加試樣外，按上述測(cè)定步驟進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算用色譜數(shù)據(jù)處理機(jī)或按下式分別計(jì)算供試樣品中的孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫和隱色結(jié)晶紫殘留量。式中:w—水產(chǎn)品中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫和隱色結(jié)晶紫殘留量，單位為微克每千克（ug/kg）；ci—標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出試樣溶液中孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫和隱色結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)工作溶液的濃度，單位為微克每升（ug/L）；V—最終定容體積數(shù)，單位為毫升（mL）；2—換算常數(shù);m—供試試料樣品質(zhì)量，單位為克（g）。本方法分別計(jì)算孔雀石綠及代謝產(chǎn)物隱色孔雀石綠，并分別報(bào)告孔雀石綠及代謝產(chǎn)物隱色孔雀石綠結(jié)果。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日本方法分別計(jì)算結(jié)晶紫及代謝產(chǎn)物隱色結(jié)晶紫，并分別報(bào)告結(jié)晶紫及代謝產(chǎn)物隱色結(jié)晶紫結(jié)果。檢測(cè)限本方法孔雀石綠、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫的檢測(cè)限均為2.0ug/kg?；厥章时痉椒兹甘G、隱色孔雀石綠、結(jié)晶紫、隱色結(jié)晶紫回收率為:85%?105%。高效液相色譜熒光檢測(cè)法原理樣品中殘留的孔雀石綠或結(jié)晶紫用硼氫化鉀還原為其相應(yīng)的代謝產(chǎn)物隱色孔雀石綠或隱色結(jié)晶紫，乙腈-乙酸銨緩沖混合液提取，二氯甲烷液液萃取，固相萃取柱凈化，反相色譜柱分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。試劑除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純，試驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682一級(jí)水的標(biāo)準(zhǔn)。乙月青:色譜純。二氯甲烷。酸性氧化鋁:分析純，粒度0.071mm?0.150mm。二甘醇。硼氫化鉀。無(wú)水乙酸銨。冰乙酸。氨水。硼氫化鉀溶液[0.03mol/L]:稱取0.405g硼氫化鉀于燒杯中，加250mL水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。硼氫化鉀溶液[0.2mol/L]:稱取0.54g硼氫化鉀于燒杯中，加50mL水溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。20%鹽酸羥胺溶液:溶解12.5g鹽酸羥胺在50m水中。對(duì)-甲苯磺酸溶液[0.05mol/L]:稱取0.95g對(duì)-甲苯磺酸，用水稀釋至100mL。乙酸銨緩沖溶液[0.1mol/L]:稱取7.71g無(wú)水乙酸銨溶解于1000mL水中，氨水調(diào)pH到10.0。乙酸銨緩沖溶液[0.125mol/L]:稱取9.64g無(wú)水乙酸銨溶解于1000mL水中，冰乙酸調(diào)pH到4.5。作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日酸性氧化鋁固相萃取柱:500mg，3mL。使用前用5mL乙青活化。VarianPRS柱或相當(dāng)者:500mg,3mL。使用前用5mL乙青活化。標(biāo)準(zhǔn)品:孔雀石綠(MG)分子式為[(CHN)(CHO)]CHO、結(jié)晶紫(GV)分子式為CHCIN,23252 2 4 2224 2529 3純度大于98%。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液:準(zhǔn)確稱取適量的孔雀石綠、結(jié)晶紫標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈分別配制成100ug/mL的標(biāo)準(zhǔn)貯備液?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)中間液(1ug/mL):分別準(zhǔn)確吸取l.00mL孔雀石綠和結(jié)晶紫的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液至100mL容量瓶中，用乙腈稀釋至刻度，配制成1ug/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。-18°C避光保存?；旌蠘?biāo)準(zhǔn)工作溶液:根據(jù)需要，臨用時(shí)準(zhǔn)確吸取一定量的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液，加人硼氫化鉀溶液(7.2.9)0.40mL，用乙月青準(zhǔn)確稀釋至2.00mL，配制適當(dāng)濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)工作液。儀器與設(shè)備高效液相色譜儀:配熒光檢測(cè)器。勻漿機(jī)。離心機(jī):4000r/min。旋渦振蕩器。固相萃取裝置。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。7.4.樣品制備取樣魚去鱗、去皮，沿背脊取肌肉部分；蝦去頭、殼、腸腺，取肌肉部分；蟹、甲魚等取可食部分。樣品切為不大于0.5cmX0.5cmX0.5cm的小塊后混合。提取稱取5.00g樣品于50mL離心管內(nèi)，加入10mL乙青,1000r/min勻漿提取30s，加入5g酸性氧化鋁，振蕩2min,4000r/min離心10min，上清液轉(zhuǎn)移至125mL分液漏斗中，在分液漏斗中加入2mL二甘醇，3mL硼氫化鉀溶液(7.2.10)，振搖2min。另取50mL離心管加入10mL乙青，洗滌勻漿機(jī)刀頭10s，洗滌液移入前一離心管中，加入3mL硼氫化鉀溶液(7.2.10)，用玻棒搗散離心管中的沉淀并攪勻，漩渦混勻器上振蕩1min，靜置20min,4000r/min離心10min，上清液并入125mL分液漏斗中。在50mL離心管中繼續(xù)加入1.5mL鹽酸羥胺溶液(7.2.11),2.5mL對(duì)-甲苯磺酸溶液(7.2.12),5.0mL乙酸銨緩沖溶液(7.2.14)，振蕩2min，再加入10mL乙青，繼續(xù)振蕩2min，

作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：作業(yè)指導(dǎo)書第頁(yè)共頁(yè)第A版第0次修改標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定頒布日期：標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定頒布日期：2014年月日4000r/min離心10min，上清液并入125mL分液漏斗中，重復(fù)上述操作一次。在分液漏斗中加人20mL二氯甲烷，具塞，劇烈振搖2min，靜置分層，將下層溶液轉(zhuǎn)移至250mL茄形瓶中，繼續(xù)在分液漏斗中加入5mL乙月青、10mL二氯甲烷，振搖2min，把全部溶液轉(zhuǎn)移至50mL離心管，4000r/min離心10min，下層溶液合并至250mL茄形瓶，45°C旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至近干，用2.5mL乙青溶解殘?jiān)?。凈化將PRS柱安裝在固相萃取裝置上，上端連接酸性氧化鋁固相萃取柱，用5mL乙青活化，轉(zhuǎn)移提取液到柱上，再用乙青洗茄形瓶?jī)纱?，每?.5mL，依次過柱，棄去酸性氧化鋁柱，吹PRS柱近干，在不抽真空的情況下，加入3mL等體積混合的乙青和乙酸銨溶液(7.2.13)，收集洗脫液，乙青定容至3mL，過0.45um濾膜，供液相色譜測(cè)定。測(cè)定色譜條件色譜柱:ODS-C］柱，250mmX4.6mm(內(nèi)徑)，粒度5頃。流動(dòng)相：乙青+乙酸銨緩沖溶液(0.125mol/L,pH4.5)=80+2O。流速：1.3mL/min。柱溫：35C。激發(fā)波長(zhǎng)：265nm。發(fā)射波長(zhǎng)：360nm。進(jìn)樣量:20uLo色譜分析分別注入20UL孔雀石綠和結(jié)晶紫混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液及樣品提取液于液相色譜儀中，按上述色譜條件進(jìn)行色譜分析，記錄峰面積，響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測(cè)的線性范圍之內(nèi)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖參見附錄A。結(jié)果計(jì)算樣品中孔雀石綠和結(jié)晶紫的殘留量按下式計(jì)算:_AxCxV

XASxm作業(yè)指導(dǎo)書文件編號(hào)：第頁(yè)共頁(yè)標(biāo)題：水產(chǎn)品中孔雀石綠的測(cè)定第A版第0次修改頒布日期：2014年月日式中：X一樣品中待測(cè)組分殘留量，單位為毫克每千克(mg/kg)；c一待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)工作液的濃度，單位為微克每毫升(ug/mL)；sA一樣品中待測(cè)組分的峰面積；A一待測(cè)組分標(biāo)準(zhǔn)工作液的峰面積；sV—樣液最終定容體積，單位為毫升(mL)；m—樣品質(zhì)量，單位為克(g)。線性范圍孔雀石綠和結(jié)晶紫混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的線性范圍：0.1ng/mL?600ng/mL。檢出限本方法孔雀石綠、結(jié)晶紫的檢出限均為0.5ug/kg?；厥章试跇悠分刑砑?.4ug/kg?100ug/kg孔雀石綠時(shí)，回收率為70%?110%。在樣品中添加0.4ug/kg?100ug/kg結(jié)晶紫時(shí)，回收率為70%?110%。重復(fù)性本方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差W15%。相關(guān)文件孔雀石綠酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒使用說明書天平稱量操作規(guī)程高速離心機(jī)操作規(guī)程氮