實(shí)驗(yàn)檢測(cè)生物組織中的糖類脂肪和蛋白質(zhì)第1頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月一.實(shí)驗(yàn)原理：某些化學(xué)試劑能夠使生物組織中的有關(guān)有機(jī)化合物產(chǎn)生特定的顏色反應(yīng)。如：①.還原性糖的鑒定：還原性糖+②.脂肪的鑒定：

脂肪+脂肪+

③.蛋白質(zhì)的鑒定：蛋白質(zhì)+④淀粉+斐林試劑磚紅色沉淀蘇丹Ⅲ染液橘黃色蘇丹Ⅳ染液紅色雙縮脲試劑紫色碘藍(lán)色2第2頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月二.目的要求：嘗試用化學(xué)試劑檢測(cè)生物組織中糖類、脂肪和蛋白質(zhì)1、還原糖的檢測(cè)和觀察：選材應(yīng)該選擇含

量高.顏色為

以蘋果.梨為最好。糖白色或近于白色制備組織樣液：制漿過濾取液三.實(shí)驗(yàn)過程:用一層紗布的植物組織，3第3頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月可溶性還原糖與斐林試劑在加熱的過程中生成磚紅色沉淀，說明植物組織樣液中含有還原糖。注入2mL蘋果組織樣液注入1mL剛配制好的斐林試劑水浴加熱約2min呈色反應(yīng)變成磚紅色50----650C的溫水結(jié)論：甲乙液等量混勻現(xiàn)配現(xiàn)用振蕩、混合搖勻呈現(xiàn)藍(lán)色4第4頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月①還原糖有

。

②試劑：

.（甲液：0.1g/ml

的

,乙液：0.05g/ml的

.）甲乙液必須

后再加入樣液中，

。

③必須

。葡萄糖，果糖，麥芽糖用水浴加熱斐林試劑NaOHCuSO4等量混合均勻現(xiàn)配現(xiàn)用注意事項(xiàng)：④顏色變化：淺藍(lán)色棕色磚紅色5第5頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月思考：

1.為什么加入斐林試劑甲液和斐林試劑乙液時(shí)必須混合后再加入？因?yàn)槿粝燃尤隢aOH溶液，還原性糖中的還原性半縮醛羥基易被氧化而失去還原性，再加入CuSO4溶液后不能產(chǎn)生Cu2O磚紅色沉淀，只有將其先配成Cu(OH)2懸濁液，才可產(chǎn)生磚紅色沉淀。6第6頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月2.斐林試劑甲液和乙液既然混合后使用，為什么不能在實(shí)驗(yàn)前配制好，一定要使用時(shí)臨時(shí)配制？

由一分析可知，鑒定試劑實(shí)質(zhì)上是Cu(OH)2懸濁液，很不穩(wěn)定，容易生成藍(lán)色Cu(OH)2沉淀，所以應(yīng)將甲液、乙液分別配制儲(chǔ)存，使用時(shí)再臨時(shí)配制7第7頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月二、脂肪的檢測(cè)方法一：制作臨時(shí)切片（1）選材：經(jīng)浸泡去種皮的花生種子。（2）檢測(cè)過程：制片選取最薄的切片置于潔凈的載玻片中央制成臨時(shí)裝片：滴12滴蒸餾水，蓋上蓋玻片染色：在薄片上滴加23滴蘇丹Ⅲ染液，染色23min洗去浮色：用吸水紙吸去染液，滴加體積分?jǐn)?shù)為50%的酒精12滴鏡觀察：在低倍鏡下尋找到已著色的圓形小顆粒，然后用高倍鏡觀察。切片：花生種子（浸泡３－４h），去皮，將子葉削成薄片。視野中有橘黃色顆粒第8頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月第9頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月橘黃色小圓顆粒即為脂肪顆粒脂肪+蘇丹Ⅲ（或蘇丹Ⅳ）染液橘黃色（或紅色）第10頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月注意事項(xiàng)：

①切片要薄，如厚薄不均就會(huì)導(dǎo)致觀察時(shí)有的地方清晰有的地方模糊。

②酒精的作用是：

。

③需使用顯微鏡觀察

④使用不同的染色劑染色時(shí)間不同顏色變化：

。洗去浮色橘黃色或紅色11第11頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月3、蛋白質(zhì)的檢測(cè)和觀察：選材應(yīng)該選擇含

豐富的豆?jié){或雞蛋清溶液（避免材料自身的顏色對(duì)實(shí)驗(yàn)變化顏色的掩蓋）蛋白質(zhì)黃豆?jié){濾液或蛋清稀釋液制備組織樣液呈色反應(yīng)組織樣液2mL雙縮脲試劑A液1mL雙縮脲試劑B液4滴搖勻后變成紫色結(jié)論：說明組織樣液中存在蛋白質(zhì)。12第12頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月（3）注意事項(xiàng)：①試劑：

（

A液：0.1g/ml的

；B液：0.01g/ml的

）先加

，再加

。注意：先加入試劑A，造成堿性環(huán)境，而只有在堿性環(huán)境中，蛋白質(zhì)才容易與Cu離子發(fā)生顏色反應(yīng)，形成紫色的絡(luò)合物。

B液要求量適中，否則多余的B液將會(huì)與A液發(fā)生反應(yīng)生成大量藍(lán)色Cu(OH)2沉淀而遮蓋試驗(yàn)中所產(chǎn)生的紫色。同樣為了防止生成較Cu(OH)2沉淀遮蔽實(shí)驗(yàn)結(jié)果，在配制溶液時(shí)，雙縮脲試劑B比斐林試劑乙液濃度小得多，這也是斐林試劑和雙縮脲試劑不能互換使用的道理。②鑒定前，留出一部分組織樣液，以便對(duì)比。

③用于蛋白質(zhì)鑒定的蛋清必須稀釋，以免實(shí)驗(yàn)后粘住試管壁，不易洗刷雙縮脲試劑A液1mlB液4滴NaOHCuSO4蛋白質(zhì)的檢測(cè)結(jié)果13第13頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月斐林試劑與雙縮脲試劑的比較：A液:0.1g/mLNaOHB液:0.01g/mLCuSO4甲液:0.1g/mLNaOH乙液:0.05g/mLCuSO4紫色物質(zhì)生成磚紅色沉淀先加A液，再加B液，不需加熱甲液與乙液先混再用，且現(xiàn)配現(xiàn)用，需加熱蛋白質(zhì)還原性糖試劑組成檢驗(yàn)結(jié)果試劑用法檢測(cè)對(duì)象雙縮脲試劑斐林試劑14第14頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月比較項(xiàng)目斐林試劑雙縮脲試劑不同點(diǎn)使用方法甲液和乙液混合均勻后方可使用，且現(xiàn)配現(xiàn)用使用時(shí)先加A液再加B液反應(yīng)條件需50-65℃水浴加熱不需加熱即可反應(yīng)反應(yīng)原理還原糖中的醛基被Cu（OH）2懸濁液氧化,Cu（OH）2被還原為磚紅色Cu2O沉淀具有兩個(gè)以上肽鍵的化合物在堿性條件下與Cu2+反應(yīng)生成紫色絡(luò)合物顏色磚紅色紫色濃度乙液CuSO4濃度為0.05g/mLB液CuSO4濃度為0.01g/mL相同點(diǎn)

都含有NaOH、CuSO4兩種成分，且所用NaOH濃度都是0.1g/mL第15頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月斐林試劑與雙縮脲試劑都由NaOH和CuSO4組成，但二者有如下三點(diǎn)不同：①溶液濃度不同。斐林試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.05g/mL；雙縮脲試劑中NaOH的濃度為0.1g/mL，CuSO4的濃度為0.01g/mL。②使用原理不同。斐林試劑實(shí)質(zhì)是新配制的Cu(OH)2溶液；雙縮脲試劑實(shí)質(zhì)是在堿性環(huán)境下的Cu2＋。③使用方法不同。使用斐林試劑時(shí)，先把NaOH溶液和CuSO4溶液混合，然后立即使用。使用雙縮脲試劑時(shí)，先加入NaOH溶液，然后再加入CuSO4溶液。第16頁，課件共18頁，創(chuàng)作于2023年2月淀粉的檢測(cè)和觀察：