1．下列有關(guān)固定化技術(shù)的敘述中，錯(cuò)誤的是（）AB，化學(xué)結(jié)合法比包埋法更有利于底物與酶的接觸C．10％的葡萄溶液為固定化酵母細(xì)胞提供能源物質(zhì)并維持透壓D．與固定化酶相比，固定化細(xì)胞操作更簡(jiǎn)便，成本低吸附在載體表面復(fù)習(xí)A12、下列關(guān)于固定化細(xì)胞與固定化酶的使用的敘述，正確的是A．從酶的固定方式看，吸附法比化學(xué)結(jié)合法對(duì)活性影響大B．尿糖試紙含有固定化的葡萄糖酶和過(guò)氧化氫酶，可以反復(fù)使用C．作為消化酶使用時(shí)，蛋白制劑以口服方式給藥D．將海藻酸鈉凝膠珠用自來(lái)水沖洗，目的是洗去CaCl2和雜菌復(fù)習(xí)C23．某同學(xué)欲通過(guò)制備固定化酵母細(xì)胞進(jìn)行葡萄糖溶液發(fā)酵實(shí)驗(yàn)，圖1表示制備固定化酵母細(xì)胞的有關(guān)操作，圖2是進(jìn)行葡萄糖發(fā)醇的裝置（a是固定化酵母細(xì)胞，b是反應(yīng)柱，c是分布著小孔的篩板），下列敘述正確的是（）A．剛?cè)芑暮Ｔ邂c應(yīng)迅速與活化的母混合制各混合液B，利用固定化母細(xì)胞進(jìn)行發(fā)酵，糖類的作用僅是作為反應(yīng)底物C．圖1中X溶液為CaCl2溶液，將與酵母細(xì)胞混勻的海藻酸鈉溶液迅速注入CaCl2溶液，會(huì)觀察到有凝膠珠形成D．圖2裝置中的長(zhǎng)導(dǎo)管主要是排出CO2，防止空氣中的雜菌進(jìn)入反D34下列有關(guān)固定化酶和固定化細(xì)胞的說(shuō)法正確的是()A．某種固定化酶的優(yōu)勢(shì)在于能催化一系列生化反應(yīng)B．固定化細(xì)胞技術(shù)一次只能固定一種酶C．國(guó)定化酶和固定化細(xì)胞的共同點(diǎn)是所固定的酶都可在細(xì)胞外起作用D．固定化酶和固定化細(xì)胞都能反復(fù)使用，但酶的活性迅速下降c4輔導(dǎo)書53頁(yè)右上，重點(diǎn)記憶催化效率高，低耗能、低污染等。酶既能與反應(yīng)物接觸，又能與產(chǎn)物分離，酶還可以被反復(fù)利用。成本低，操作更容易，產(chǎn)生一系列酶。1、對(duì)環(huán)境條件非常敏感，容易失活；2、溶液中的酶很難回收，不能被再次利用，提高了生產(chǎn)成本；3、反應(yīng)后酶會(huì)混在產(chǎn)物中，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。不利于催化一系列的酶促反應(yīng)可能造成酶的部分失活，酶活力有損失。固定后的酶或細(xì)胞與反應(yīng)物不容易接近，可能導(dǎo)致反應(yīng)效果下降等5提取的原理：色素可以溶解在有機(jī)溶劑中分離的原理：不同色素在有機(jī)溶劑中的溶解度不同

因?yàn)椴煌卦谟袡C(jī)溶劑中的溶解度不同，所以在層析液中溶解度大的，隨層析液上升快，所以四種色素會(huì)分開。紙層析法又稱紙色譜法，是用紙作為載體的一種色譜法，依據(jù)極性相似相溶原理，是以濾紙纖維的結(jié)合水為固定相，而以有機(jī)溶劑作為流動(dòng)相。由于樣品中各物質(zhì)分配系數(shù)不同，因而擴(kuò)散速度不同，從而達(dá)到分離的目的。。637．[生物——選修1：生物技術(shù)實(shí)踐]（15分）淀粉填充聚乙烯類塑料（淀粉—PE）是一種聚乙烯類塑料替代材料，科研人員開展相關(guān)研究，從垃圾堆埋場(chǎng)中篩選到能夠更高效降解淀粉—PE的菌株?；卮鹣铝袉?wèn)題：（1）科研人員從垃圾堆埋場(chǎng)的土樣中篩選分離該菌株的原因是

。（2）在進(jìn)行該菌株的分離篩選時(shí)，需將適宜稀釋倍數(shù)的土壤溶液接種在以

為碳源的液體培養(yǎng)基上，進(jìn)行為期5天的富集培養(yǎng)；進(jìn)一步分離純化該微生物應(yīng)采用的接種方法是

。（3）研究發(fā)現(xiàn)，該菌株能降解淀粉—PE可能是分泌了

酶和

酶。研究人員提純相應(yīng)的酶需用到凝膠色譜法，該方法是根據(jù)

分離蛋白質(zhì)。（4）若要了解相應(yīng)的酶的最適溫度，請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)加以探究（針對(duì)一種酶寫出實(shí)驗(yàn)思路即可）。該菌分布在富含淀粉—PE的環(huán)境中的可能性較高，而垃圾堆埋場(chǎng)里含有較多的淀粉—PE淀粉—PE稀釋涂布平板法（平板劃線法）淀粉降解PE的蛋白質(zhì)的相對(duì)分子質(zhì)量設(shè)置一系列的溫度梯度，其他條件相同且適宜，將淀粉（降解PE的）酶和淀粉液（PE）分組，在各溫度下分別保溫，將相同溫度條件下的進(jìn)行混合，一段時(shí)間后，用一定方法檢測(cè)各組中底物的消耗量或產(chǎn)物的生成量（3分）7一、基礎(chǔ)知識(shí)：（一）蛋白質(zhì)分離原理

（二）蛋白質(zhì)分離的方法

1）凝膠色譜法：又稱分配色譜法

2）電泳法（三）緩沖液的作用

課題3血紅蛋白的提取和分離學(xué)習(xí)目標(biāo)：了解分離生物大分子的基本原理8二、實(shí)驗(yàn)操作－－實(shí)驗(yàn)步驟

血液組成成分

（1）洗滌紅細(xì)胞

（2）釋放血紅蛋白

（3）分離血紅蛋白

（4）透析血紅蛋白1、樣品處理3、純化4、純度鑒定2、粗分離SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定血紅蛋白純度凝膠色譜法進(jìn)行純化注意事項(xiàng)9形狀、大小電荷親和力10相對(duì)分子質(zhì)量的大小分配色譜法多孔的球體多糖類化合物貫穿的通道113、原理：當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)，（）的蛋白質(zhì)容易進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程（），移動(dòng)速度（），而（）的蛋白質(zhì)無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，只能在（）移動(dòng)，路程（），移動(dòng)速度（），相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)因此得以分離。相對(duì)分子質(zhì)量較小較長(zhǎng)較慢相對(duì)分子質(zhì)量較大凝膠外部較短較快總結(jié)：大分子經(jīng)過(guò)路程短，流動(dòng)快；小分子經(jīng)過(guò)路程長(zhǎng)，流動(dòng)慢。12洗脫：從色譜柱上端不斷注入緩沖液，促使蛋白質(zhì)分子的差速流動(dòng)?；旌衔锷现疵摯蠓肿恿鲃?dòng)快小分子流動(dòng)慢收集大分子收集小分子

4、具體過(guò)程13凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)過(guò)程的動(dòng)畫演示

14凝膠色譜法

樣品中分子大的先流出色譜柱，中等分子的后流出，分子最小的最后流出不同時(shí)間進(jìn)行收集15BD16帶電粒子帶電性質(zhì)分子大小遷移速度瓊脂糖凝膠電泳聚丙烯酰胺凝膠電泳分子大小17影響蛋白質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)速度的因素√√√√18

在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳示意圖19練習(xí)．下列各項(xiàng)中不屬于電泳使樣品中各分子分離的原因的是(

)A．分子帶電性質(zhì)的差異B．分子的大小C．分子的形狀

D．分子的變性溫度

D幻燈片2020由弱酸和相應(yīng)的強(qiáng)堿鹽溶解于水中。如H2CO3/NaHCO3，NaH2PO4/Na2HPO4等緩沖溶液－－洗脫劑

（1）作用：

（2）配制：抵制外界酸堿對(duì)溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定。（3）在血紅蛋白的提取和分離實(shí)驗(yàn)中用的緩沖液的原因？

目的是利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的PH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能。21血液組成成分閱讀思考：血液由______和________兩部分組成。血細(xì)胞中________細(xì)胞數(shù)量最多，細(xì)胞的含量最高的化合物是_____________。該化合物是由_____________和____________構(gòu)成的，其中每個(gè)亞基中都含有一個(gè)能與O2和CO2結(jié)合的______________________基團(tuán)。血漿血細(xì)胞紅細(xì)胞血紅蛋白2條α-肽鏈2條β-肽鏈

亞鐵血紅素221.洗滌紅細(xì)胞閱讀思考：洗滌的目的是什么？洗滌的方法是什么？洗滌干凈的標(biāo)志是什么？血液100mL3g檸檬酸鈉低速短時(shí)間離心紅細(xì)胞血漿吸出血漿紅細(xì)胞5倍體積生理鹽水?dāng)嚢?0min重復(fù)洗滌3次，直至上清液沒(méi)有黃色去除雜質(zhì)重復(fù)離心，吸出黃色血漿上清液中沒(méi)有黃色232.釋放血紅蛋白閱讀思考：釋放血紅蛋白過(guò)程中，在洗滌好的紅細(xì)胞加入了哪些物質(zhì)，有什么用？目的分析：蒸餾水的作用是______________________________。加入甲苯的作用是____________________________。充分?jǐn)嚢璧哪康氖莀___________________________。使紅細(xì)胞大量吸水脹裂溶解紅細(xì)胞的細(xì)胞膜加速紅細(xì)胞的破裂24濾紙過(guò)濾脂類物質(zhì)3.分離血紅蛋白分離過(guò)程紅細(xì)胞混合液高速離心10min離心管燒杯有機(jī)溶劑血紅蛋白25②試管中溶液層次：第1層（最上層）：甲苯層（無(wú)色透明）；第2層（中上層）：脂溶性物質(zhì)沉淀層（白色薄層固體）；第3層（中下層）：血紅蛋白的水溶液層（紅色透明液體）；第4層（最下層）：雜質(zhì)沉淀層（暗紅色）。3.分離血紅蛋白③分離：濾紙過(guò)濾：除去脂溶性沉淀層，分液漏斗中靜置：分出下層的紅色透明液體。2620mmol/L磷酸緩沖液4.透析血紅蛋白透析的目的是什么？1mL1mL1mL去除血紅蛋白中的小分子雜質(zhì)①過(guò)程：取1ml的血紅蛋白溶液裝入透析袋中，將透析袋放入盛有300ml的20mmol/l的磷酸緩沖液中（pH為7.0），透析12h27純化－－凝膠色譜法1.凝膠色譜柱的制作：2.凝膠色譜柱的裝填：教材圖5－193.樣品的加入和洗脫28注意：（1）凝膠顆粒＋蒸餾水→充分溶脹；凝膠裝填時(shí)盡量緊密；裝填時(shí)不能有氣泡存在：因?yàn)闅馀輹?huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。

（2）裝完后，立即用緩沖液洗滌，使凝膠裝填緊密293.樣品的加入和洗脫

1.調(diào)液面2.加樣

4.洗脫5.收集緩沖液凝膠注意：洗脫過(guò)程不能發(fā)生洗脫液流干，露出凝膠顆粒的現(xiàn)象，否則重新填裝。3.再調(diào)液面

1.調(diào)液面2.加樣3.再調(diào)液面

4.洗脫、5.收集30注意事項(xiàng)1.紅細(xì)胞的洗滌：

洗滌次數(shù)不能過(guò)少；低速、短時(shí)離心。2.凝膠的預(yù)處理：

沸水浴法，還能除去微生物和氣泡3.色譜柱的裝填：

裝填盡量緊密；無(wú)氣泡；洗脫液不能斷流。4.

色譜柱成功標(biāo)志：紅色區(qū)帶均勻一致地移動(dòng)。Why？31知識(shí)總結(jié)血紅蛋白的提取和分離蛋白質(zhì)分子的差異性凝膠色譜法原理分離過(guò)程凝膠電泳法緩沖溶液組成作用蛋白質(zhì)的提取分離樣品處理粗分離純化純度鑒定321、用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過(guò)程中，關(guān)于蛋白質(zhì)的敘述，正確的是A、相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程大于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)B、相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程小于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)C、相對(duì)分子質(zhì)量較小的蛋白質(zhì)行程等于相對(duì)分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)D、二者根本無(wú)法比較練習(xí)鞏固332.相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進(jìn)行過(guò)程可表示為圖中哪一個(gè)B343.凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時(shí)，凝膠的種類較多，但其作用的共同點(diǎn)是()

A.改變蛋白質(zhì)分子通過(guò)凝膠時(shí)的路徑

B.吸附一部分蛋白質(zhì)，從而影響蛋白質(zhì)分子的移動(dòng)速度

C.將酶或細(xì)胞固定在凝膠中

D.與蛋白質(zhì)分子進(jìn)行化學(xué)反應(yīng)，從而影響其移動(dòng)速度4.在利用凝膠電泳法分離蛋白質(zhì)時(shí)，一定要加入緩沖液，其作用主要是()A.使酶的活性最高B.使蛋白質(zhì)的活性最高

C.維持蛋白質(zhì)所帶的電荷D.使蛋白質(zhì)帶上電荷AC355、使用SDS-聚丙烯酰胺電泳過(guò)程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于A電荷的多少B分子的大小C肽鏈的多少D分子形狀的差異366.下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)操作，其中正確的是（）A．可采集豬血作為實(shí)驗(yàn)材料B．用蒸餾水重復(fù)洗滌紅細(xì)胞C．血紅蛋白釋放后應(yīng)低速短時(shí)間離心D．洗脫液接近色譜柱底端時(shí)開始收集流出液

A378.在裝填凝膠柱時(shí)，不能有氣泡存在的原因是A、氣泡會(huì)攪亂洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果B、氣泡阻礙蛋