紫外檢測器高效液相色譜儀的檢定操作規(guī)程頁碼：第1頁，共5頁說明適用范圍：適用于具可變波長紫外檢測器的高效液相色譜儀的檢定。參照依據(jù)：國家技術(shù)監(jiān)督局JJG705-2002“實(shí)驗(yàn)室液相色譜儀檢定規(guī)程”、相關(guān)儀器操作說明書及中國藥典2005版二部附錄VD制定。儀器操作及環(huán)境條件：應(yīng)符合相應(yīng)儀器的操作及維護(hù)規(guī)程(SOP)。檢定項(xiàng)目和技術(shù)要求泵流量設(shè)定值誤差應(yīng)Ss<±2%；流量穩(wěn)定性誤差應(yīng)Sr<±2%o柱溫箱溫度設(shè)定值誤差A(yù)Ts應(yīng)不超過±2.0°C；柱溫箱溫度穩(wěn)定性應(yīng)不超過1.0°C。波長示值誤差應(yīng)V±2nm；波長重復(fù)性應(yīng)優(yōu)于1nm。定性測量重復(fù)性誤差(5次定量環(huán)進(jìn)樣)應(yīng)RSD<1.5%。定量測量重復(fù)性誤差(5次定量環(huán)進(jìn)樣)應(yīng)RSD<1.5%o基線漂移應(yīng)<5x10-3(Au/h),基線噪聲應(yīng)<5x10-4Au。最小檢測濃度應(yīng)不超過4x10-8g/ml(萘的甲醇溶液)。梯度誤差Gc應(yīng)不超過±3%(無梯度裝置不進(jìn)行此項(xiàng)檢定)檢定方法3?1?泵流量設(shè)定值誤差Ss,流量穩(wěn)定性誤差Sr的檢定3?1?1?儀器與用具分析天平萬分之一 秒表 精度0.01秒容量瓶50ml3?1?2?操作程序?qū)⒈?、進(jìn)樣器、色譜柱和檢測器連接好，以甲醇為流動相。按表1設(shè)定流量，待流速穩(wěn)定后，在流動相排出口用事先精密稱定過重量的容量瓶收集流動相，同時用秒表記錄，準(zhǔn)確收集10?25分鐘，再精密稱定其重量。收集時間應(yīng)符合下表規(guī)定，每個設(shè)定值重復(fù)測定3次。3?1?3?結(jié)果計(jì)算按下列公式計(jì)算SS和Sr：Fm=(W2-W1)/(P.t)SS=(F-Fs)/Fsx100%SR=(Fmax-Fmin)/FX100%w2為容量瓶+流動相的重量(g)w1為容量瓶的重量P為實(shí)驗(yàn)條件下的流動相密度(g/cm3)t為收集流動相的時間(min)PFm流量實(shí)測值(ml/min)F；流量設(shè)定值Fmin同一組測量中流量最小值FmU1同一組測量中流量最大值max流量設(shè)定值(ml/min)0.51.01.5測量次數(shù)333收集流動相時間(min)251510允許誤差Ss3%2%2% 3%2%2%:表規(guī)定F為同一組測量中流量的算術(shù)平均值3?1?4?結(jié)果判斷：SS和S/直應(yīng)符合:表規(guī)定紫外檢測器高效液相色譜儀的檢定操作規(guī)程頁碼：第2頁，共5頁3?1?5?注意事項(xiàng):收集時間應(yīng)將“秒”換算為“分”代入公式計(jì)算。柱溫箱溫度設(shè)定值誤差A(yù)T、柱溫箱溫度穩(wěn)定性Tc的檢定3?2?1?操作步驟：將溫度設(shè)為60°C，將一經(jīng)過校正的溫度計(jì)放入柱溫箱內(nèi)，每隔lOmin讀取溫度計(jì)顯示溫度與柱溫箱顯示溫度一次，共讀取7次，求出平均值。平均值與設(shè)定值之差為ATs，7次讀數(shù)中最大值與最小值之差為控溫穩(wěn)定性Tc。 S結(jié)果判斷：柱溫箱溫度設(shè)定值誤差A(yù)Ts應(yīng)不超過±2.0C；柱溫箱溫度穩(wěn)定性應(yīng)不超過1.OC。3?3?波長示值誤差及波長重復(fù)性的檢定 S3?3?1?方法3?3?1?1?方法一制備60ug/ml基準(zhǔn)重鉻酸鉀的0.005mol/l硫酸溶液，用一節(jié)空管代替色譜柱將進(jìn)樣器與檢測器連通，以水做流動相，流量為0.5?1.Oml/min,采用步進(jìn)進(jìn)樣法，即在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四個波段處，分別每2min改變lnm,用注射器注入5?10ul（或定量環(huán)）標(biāo)準(zhǔn)溶液，重復(fù)測量三次。記錄色譜圖。3?3?1?2?方法二制備60ug/ml基準(zhǔn)重鉻酸鉀的0.005mol/l硫酸溶液，按紫外分光光度法，用1cm石英比色皿分別在235nm±5nm、257nm±5nm、313nm±5nm、350nm±5nm四個波段處，以0.005mol/L硫酸為空白，測定各波長處60ug/ml基準(zhǔn)重鉻酸鉀的0.005mol/l硫酸溶液的吸收度，各波長重復(fù)測量三次。3?3?1?3?方法三對于儀器有波長準(zhǔn)確度自檢功能的，可利用其自檢功能進(jìn)行檢查，重復(fù)測量三次。具體詳見相關(guān)儀器操作說明書。結(jié)果計(jì)算：最大（或最小）吸收點(diǎn)對應(yīng)的波長與標(biāo)準(zhǔn)波長之差即為波長示值誤差。三次測量平均值與三次測量值中最大差值即為波長重復(fù)性誤差。結(jié)果判斷：波長示值誤差應(yīng)V±2nm；波長重復(fù)性應(yīng)優(yōu)于1nm。3?4?基線漂移和基線噪聲的檢定3?4?1?色譜條件：色譜柱：C18流動相：甲醇流速：1ml/min波長：254nm3.4.2.操作步驟將儀器各部份聯(lián)接好，將靈敏度設(shè)置為最靈敏檔，開機(jī)，以甲醇為流動相，待基線穩(wěn)定后，記錄基線10min,計(jì)算基線噪聲。記錄基線60min,計(jì)算基線漂移。3?4?3?結(jié)果計(jì)算：Nd=KB式中： Nd--檢測器基線噪聲；K--衰減倍數(shù)；B--測得的基線峰-峰高對應(yīng)的記錄儀標(biāo)度，AU基線漂移用1h內(nèi)基線偏離原點(diǎn)的值（AU/h）表示。結(jié)果判斷：基線漂移<5x10-3（Au/h）基線噪聲<5"0-4Au

紫外檢測器高效液相色譜儀的檢定操作規(guī)程頁碼紫外檢測器高效液相色譜儀的檢定操作規(guī)程頁碼：第3頁，共5頁3.5.最低檢測濃度的檢定3?5?1?對照品溶液的配制：用甲醇配制含萘4xl0-8g/ml的甲醇溶液。色譜條件：色譜柱：C18流動相：甲醇流速：lml/min波長：254nm進(jìn)樣量：20ul（定量環(huán)）操作步驟：將儀器各部份聯(lián)接好，以甲醇為流動相，開機(jī)，待基線穩(wěn)定后，將上述配制好的對照品溶液進(jìn)樣，記錄色譜圖。按下式計(jì)算最小檢測濃度：52兀5式中：C］：最小檢測濃度（g/ml）；Nd：基線噪聲峰-峰高，mm；C：對照品溶液濃度（g/ml）；H：標(biāo)準(zhǔn)溶液的色譜峰高，mm。3?5?5?結(jié)果判斷：對照品溶液的峰高應(yīng)大于或等于兩倍基線噪聲峰高，即最低檢測濃度應(yīng)低于4x10-8g/ml（萘的甲醇溶液）。3?6?梯度誤差的檢定3?6?1?色譜條件流動相：A為純水；B為0.1%丙酮水溶液流速：lml/min波長：254nm3?6?2?操作步驟：將輸液泵和檢測器連接（不接色譜柱），開機(jī)后以溶劑A沖洗系統(tǒng)，基線平穩(wěn)后開始執(zhí)行下列梯度程序，記錄色譜圖。重復(fù)測量2次。3?6?3?梯度程序：A：系統(tǒng)是色譜工作站控制的，按下表程序：時間流速A%B%0min1ml/min100%0%3min1ml/min100%0%5min1ml/min80%20%8min1ml/min80%20%10min1ml/min60%40%13min1ml/min60%40%15min1ml/min40%60%18min1ml/min40%60%20min1ml/min20%80%23min1ml/min20%80%25min1ml/min0100%28min1ml/min0100%30min1ml/min100%0

紫外檢測器高效液相色譜儀的檢定操作規(guī)程頁碼：第4頁，共5頁B：系統(tǒng)是梯度控制儀控制的，按下表程序:時間流速A%B%0min1ml/min100%0%3min1ml/min100%0%5min1ml/min75%25%8min1ml/min75%25%10min1ml/min50%50%13min1ml/min50%50%15min1ml/min25%75%18min1ml/min25%75%20min1ml/min0100%23min1ml/min0100%25min1ml/min100%03?6?4?結(jié)果計(jì)算：g=（L-L）/Lx100%ci i mm式中：Gci--第i段梯度誤差（％）；Li--第i段輸出信號值平均值;m-各段輸出信號平均值的平均值。3?6?5?結(jié)果判斷：不超過±3%3.7.定性、定量測量重復(fù)性試驗(yàn)3?7?1?色譜條件色譜柱：C18流動相：甲醇流速：1ml/min波長：254nm進(jìn)樣量：20ul（定量環(huán)）3?7?2操作程序?qū)x器連接好，使之處于正常的工作狀態(tài)，待基線穩(wěn)定后，用進(jìn)樣閥的定量環(huán)注入20ul4x10-5g/ml萘的甲醇溶液或穩(wěn)定的待分析樣品溶液，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄萘的峰保留時間和峰面積。3?7?3?結(jié)果計(jì)算：RSD%=￡(X-X)2/(5-1)x=x100%-iX式中：RSD%--定性（定量）測量重復(fù)性相對標(biāo)準(zhǔn)偏差;--第--第i次測得的保留時間或峰面積;X--5次測量結(jié)果的算術(shù)平均值;紫外檢測器高效液相色譜儀的檢定操作規(guī)程頁碼：第5頁，共5頁i--測量序號。3.7.4.結(jié)果判斷定性測量重復(fù)性誤差：5次峰保留時間相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)應(yīng)<1.5%o定量測量重復(fù)性誤差