65.150

52DB34

水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法Determination

residues

nitrofuran

Products method安徽省市場(chǎng)監(jiān)督管理局

DB34/T

2020前 言

DB34/T

2020水產(chǎn)品中硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定 酶聯(lián)免疫吸附法

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了水產(chǎn)品中四種硝基呋喃類代謝物殘留量的測(cè)定

GB/T

定。試樣中殘留的硝基呋喃代謝物、HRP

酶標(biāo)記抗原共同競(jìng)爭(zhēng)板上的抗體，加TMB底物后的顏色與試樣

450

nm

除另有說明外，所用試劑均為分析純，水為符合

GB/T

6682

4.1

4.2

4.3

鹽酸溶液[1

mol/L]：取

ml

36％鹽酸溶液溶于水中并定容到

100

ml。4.4

4.5

氫氧化鈉溶液[1

mol/L]：稱取

4.6

——包括：呋喃唑酮代謝物（AOZ）測(cè)定試劑盒、呋喃它酮代謝物（AMOZ）測(cè)定試劑盒、呋喃西林——組成參見附錄

A。

DB34/T

2020

樣品提取液：將水與試劑盒中

衍生化試劑：試劑盒自帶

50

mmol/L

5.1

5.2

分析天平：

0.01g。5.3

5.4

5.5

5.6

5.7

氮吹儀：溫控范圍：室溫～100℃5.8

5.9

——單道

20

L、100

L；——八道

50L～300

L。

個(gè)月。

所有操作應(yīng)在

20℃～25℃室溫下進(jìn)行。AOZ、AMOZ、SEM

AHD

測(cè)定試劑盒及所有試劑，使用前

DB34/T

2020稱取

50

離心管中，加入

0.5

mL

mL

水、

鹽酸溶液（4.3）和

80

min，置于恒溫振蕩器中

60℃避光振蕩

37℃

16

mL

的上清液（相當(dāng)于含

0.5

mL

mL

正己

mL

4500

10此最終試液體積（v）為

0.5

g。

相應(yīng)的位置。在每孔中，加入

100

標(biāo)準(zhǔn)工作液或

7.2

中的試液，50

酶標(biāo)抗原，輕敲微孔板邊緣混勻

min，蓋上板膜，放入恒溫培養(yǎng)箱中于

22.5℃±2.5℃避光孵育

30

min；取出酶標(biāo)板，微孔

250

15

次，在吸水紙上拍打，完全去除孔中液體。每孔加入

100

TMB

底物（4.6.8），蓋上板膜，放入恒溫培養(yǎng)箱中于

22.5℃±2.5℃避光孵育

20

min

100

終止液（4.6.9），輕輕振蕩混勻，用酶標(biāo)儀于

450

nm

除不稱取試樣外，均按

7.2

7.3.1

標(biāo)準(zhǔn)品或樣品的百分吸光率按式（1）計(jì)算，百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均

×100％

...........................

(1)

0

n

以相對(duì)吸光度值(％)為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)濃度（ng/mL）為橫坐標(biāo)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。從校正曲線算出對(duì)應(yīng)的試樣中硝基呋喃類代謝物濃度（c），再乘以最終試液體積（v），除以最終試樣質(zhì)量（m），即可DB34/T

2020X=c×

..................................

c——從校正曲線算出試樣中的硝基呋喃類代謝物濃度（ng/mL）；

0.5

g/kg

本方法中

AOZ、AMOZ、SEM

AHD

0.05

AHD

0.05

60％～120％。

20752

DB34/T

2020

Plate)（可拆式）

.................................

標(biāo)準(zhǔn)液(Standards)（ng/mL：0，0.02，0.06，0.18，0.54，1.62）

...............

6×1.8

.........................................

mL ...........................................

mL

(Extraction

..........................................

25

Solution)...........................................

28

Buffer) ..........................................

14

TMB底物(TMB

..........................................

12

50

mM

2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)

......................................

mL

Plate)（可拆式）

...............................

..................

6×1.8

.........................................

mLAMOZ酶標(biāo)抗原(HRP-Conjugate)...........................................

mL

(Extraction

..........................................

25

Solution) ...........................................

28

Buffer) ..........................................

14

TMB底物(TMB

..........................................

12

50

mM

2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)

......................................

mL

Plate)（可拆式）

................................

..................

6×1.8

DB34/T

2020

.........................................

mL...........................................

mL

(Extraction

..........................................

25

20×濃縮洗液(Washing

...........................................

28

..........................................

14

..........................................

12

50

mM

2-硝基苯甲醛(2-Nitrobenzaldehyde)

......................................

mL

Plate)（可拆式）

................................

..................

6×1.8

.........................................

mL ...........................................

mL

(Extraction

..........................................

25

20×濃縮洗液(Washing

...........................................

2