昆明景潤食品有限公司作業(yè)指導(dǎo)書文件號:KJWI-QA-26版本:A1日期:2012-5-25 頁數(shù):PagePAGE1ofNUMPAGES標(biāo)題：霉菌和酵母菌計數(shù)作業(yè)指導(dǎo)書編寫:楊劍莉?qū)徍?馬莉鴻批準：伏麗玲文件修改記錄版本修訂次數(shù)修訂日期修訂內(nèi)容002011-02-01A12012-05-25修訂分發(fā)號:______(僅適用于控制文件)(僅蓋有紅色印章的文件才有效)1.0目的1.1規(guī)定食品中霉菌和酵母菌計數(shù)的方法。2.0適用范圍2.1適用于加多寶涼茶、濃縮汁、原輔材料中的霉菌和酵母菌的計數(shù)。3.0職責(zé)微生物檢驗員負責(zé)按作業(yè)指導(dǎo)書進行檢驗。4.0術(shù)語（無）5.0工作流程圖見附錄A中A.16.0內(nèi)容及要求6.1設(shè)備和材料除微生物實驗室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外，其他設(shè)備和材料如下：6.1.1冰箱：2℃～56.1.2恒溫培養(yǎng)箱：28℃±16.1.3顯微鏡：10×～100×。6.1.4電子天平：感量0.1g。6.1.5無菌錐形瓶:容量500mL、250mL。6.1.6無菌廣口瓶：500mL。6.1.7無菌吸管：1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)。6.1.8無菌平皿：直徑90mm。6.1.9無菌試管:10mm×75mm。6.1.10無菌滅菌桶。6.2培養(yǎng)基和試劑6.2.1馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂培養(yǎng)基：見附錄A中A.2。6.2.2孟加拉紅培養(yǎng)基：見附錄A中A.3。6.3操作步驟6.3.1樣品的稀釋6.3.1.1固體和半固體樣品：稱取25g樣品至盛有225mL滅菌蒸餾水的錐形瓶中，充分振搖，即為1:10稀釋液。或放入盛有225mL無菌蒸餾水的均質(zhì)袋中，用拍擊式均質(zhì)器拍打2min，制成1:10的樣品勻液。6.3.1.2液體樣品：以無菌吸管吸取25mL樣品至盛有225mL無菌蒸餾水的錐形瓶（可在瓶內(nèi)預(yù)置適當(dāng)數(shù)量的無菌玻璃珠）中，充分混勻，制成1:10的樣品勻液。6.3.1.3取1mL1:10稀釋液注入含有9mL無菌水的試管中,另換一支1mL無菌吸管反復(fù)吹吸,此液為1:100稀釋液。6.3.1.4按6.3.1.3操作程序，制備10倍系列稀釋樣品勻液。每遞增稀釋一次，換用1次1mL無菌吸管。6.3.1.5根據(jù)對樣品污染狀況的估計，選擇2個～3個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液），在進行10倍遞增稀釋的同時，每個稀釋度分別吸取1mL樣品勻液于2個無菌平皿內(nèi)。同時分別取1mL樣品稀釋液加入2個無菌平皿作空白對照。6.3.1.6及時將15mL～20mL冷卻至46℃的馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂或孟加拉紅培養(yǎng)基(可放置于46℃±6.3.2培養(yǎng)待瓊脂凝固后，將平板倒置，28℃±1℃6.3.3菌落計數(shù)肉眼觀察，必要時可用放大鏡，記錄各稀釋倍數(shù)和相應(yīng)的霉菌和酵母數(shù)。以菌落形成單位（colonyformingunits，CFU）表示。選取菌落數(shù)在10CFU～150CFU的平板，根據(jù)菌落形態(tài)分別計數(shù)霉菌和酵母數(shù)。霉菌蔓延生長覆蓋整個平板的可記錄為多不可計。菌落數(shù)應(yīng)采用兩個平板的平均數(shù)。6.4結(jié)果與報告6.4.1計算兩個平板菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)計算。6.4.1.1若所有平板上菌落數(shù)均大于150CFU，則對稀釋度最高的平板進行計數(shù)，其他平板可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。6.4.1.2若所有平板上菌落數(shù)均小于10CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。6.4.1.3若所有稀釋度平板均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算；如為原液，則以小于1計數(shù)。6.4.2報告6.4.2.1菌落數(shù)在100以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字報告。6.4.2.2菌落數(shù)大于或等于100時，前3位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前2位數(shù)字，后面用0代替位數(shù)來表示結(jié)果；也可用10的指數(shù)形式來表示，此時也按“四舍五入”原則修約，采用兩位有效數(shù)字。6.4.2.3稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告，報告或分別報告霉菌和/或酵母數(shù)。7.0相關(guān)文件無8.0質(zhì)量記錄表單8.1KJWIF-QA-35《原輔料及食品接觸面微生物檢驗報告》附錄A(規(guī)范性附錄)培養(yǎng)基和試劑A.1馬鈴薯-葡萄糖-瓊脂A.1.1成分馬鈴薯(去皮切塊)300g葡萄糖20.0g瓊脂20.0g氯霉素0.1g蒸餾水1000mLA.1.2制法將馬鈴薯去皮切塊，加1000mL蒸餾水，煮沸10min～20min。用紗布過濾，補加蒸餾水至1000mL。加入葡萄糖和瓊脂，加熱溶化，分裝后，121℃A.2孟加拉紅培養(yǎng)基A.2.1成分蛋白胨5.0g葡萄糖10.0g磷酸二氫鉀1.0g硫酸鎂（無水）0.5g瓊脂20.0g孟加拉紅0.033g氯霉素0.1g蒸餾水1000mLA.2.2制法上述各成分加入蒸餾水中，加熱溶化，補足蒸餾水至1000mL，分裝后，121℃附錄B(資料性附錄)霉菌直接鏡檢計數(shù)法常用的為郝氏霉菌計測法，本方法適用于番茄醬罐頭。B.1設(shè)備和材料B.1.1折光儀。B.1.2顯微鏡。B.1.3郝氏計測玻片：具有標(biāo)準計測室的特制玻片。B.1.4蓋玻片。B.1.5測微器：具標(biāo)準刻度的玻片。B.2操作步驟B.2.1檢樣的制備：取定量檢樣,加蒸餾水稀釋至折光指數(shù)為1.3447～1.3460（即濃度為7.9%～8.8%），備用。B.2.2顯微鏡標(biāo)準視野的校正：將顯微鏡按放大率90～125倍調(diào)節(jié)標(biāo)準視野，使其直徑為1.382mm。B.2.3涂片：洗凈郝氏計測玻片，將制好的標(biāo)準液，用玻璃棒均勻的攤布于計測室，以備觀察。B.2.4觀測：將制好之載玻片放于顯微鏡標(biāo)準視野下進行霉菌觀測，一般每一檢樣觀察50個視野，同一檢樣應(yīng)由兩人進行觀察。B.2.5