高效液相色譜法測定蘆薈中的植物源植物植物

蘆筍是一個集藥物、保健、美化和觀賞于一體的植物。它是百合科穩(wěn)定型蘆筍屬多年生草本植物。在藥用中常見的蘆薈品種有華蘆薈、庫拉索蘆薈、元江蘆薈、不夜城蘆薈和木立蘆薈等。其味苦性寒,歸胃、肝、大腸經。具通便、清肝熱等功效,傳統(tǒng)醫(yī)學用于治療皮炎、便秘、潰瘍等,藥用歷史悠久。第二次世界大戰(zhàn)后期,發(fā)現(xiàn)蘆薈對結核和輻射灼傷具有神奇效果,從而引起了許多科學家的興趣,并開始對其進行了較為系統(tǒng)的研究。現(xiàn)代研究發(fā)現(xiàn),蘆薈除具有抗輻射、抗炎等功效外,還具有抗衰老、抗氧化、調節(jié)血糖、抗腫瘤等多種藥理作用。1實驗數(shù)據(jù)1.1試驗箱HPLC:Agilent1100系列,色譜柱:ODS2(5μm,6mm×150mm),柱號:E1915651,紫外檢測器,四元泵,HP化學工作站;pH-25型酸度計(上海電冰箱廠),新型電熱恒溫鼓風干燥箱(寧波江南儀器廠)———DHG-9070AS型;超聲波清洗機(寧波江南儀器廠)———JN-5200DT、容量:10L、頻率:40KHz、功率:300W、電源:220V,50Hz;甲醇、乙醇均為分析純試劑。1.2實驗方法1.2.1溶液生產1.2.1.驗證產物的提取精密稱量華蘆薈鮮品27.0749g,不夜城蘆薈鮮品22.6625g,木立蘆薈鮮品18.6608g,庫拉索蘆薈鮮品34.5006g,未知蘆薈鮮品16.9431g,用豆?jié){機分別將其打碎后,各加80%乙醇溶液50mL,超聲波振蕩提取20min,取上清液,再往殘渣中加80%乙醇溶液40mL,超聲波振蕩提取20min,取上清液,再往殘渣中加80%乙醇溶液30mL,超聲波振蕩提取20min,收集上清液,與前兩次上清液合并,減壓蒸餾濃縮,將濃縮液轉移至50mL容量瓶中,用乙醇定容至刻度。1.2.1.甲醇定容液精密稱量蘆薈苷標準對照品0.0007g,用甲醇定容至1mL。精密稱量蘆薈苷標準對照品0.0013g,用甲醇定容至1mL。1.2.2條件11.2.3方法研究1.2.3.精密度與定量限蘆薈苷標準品(700μg/mL),稀釋80倍進樣,每次20μL,重復進樣5次,分別測定峰面積,計算蘆薈苷含量,以蘆薈苷含量的RSD表示精密度。1.2.3.2重復試驗在1.2.1.1項下制備木立蘆薈溶液3份,用高效液相色譜法測定,每份進樣3次,每次進樣20μL,分別測定峰面積。1.2.3.峰面積的測定將華蘆薈的樣品溶液,取20μL注入高效液相色譜儀,測得含量為58.23867mg/L,取3份上述溶液每份0.50mL,向其中加入高,中,低量濃度為700mg/L的對照品,分別測定峰面積。1.2.3.4-樣品分析在1.2.3下每個樣品重復進樣3次,每次20μL,分別測定峰面積,計算蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量。進樣前用0.45μm濾膜濾過。1.2.3.5各蘆葦酸測定2結果2.1系統(tǒng)的適用性2.2精密度的測定精密度測定結果的RSD=2.88%(n=5),結果表明該方法有較好的精密度。進樣號1,2,3,4,5的蘆薈含量分別為11.44298,10.66978,10.73138,11.15615,11.03006μg/L,RSD為2.88%。2.3重復實驗2.4樣品取樣性能根據(jù)1.2.3.3項下測定的結果計算回收率,得平均回收率為108.0%,RSD=2.2%(n=9),結果見表3。2.5樣品分析在相應的色譜條件下每個樣品重復進樣3次,每次20μL,蘆薈苷和蘆薈大黃素的含量見表4。色譜圖見圖1~8。2.6所有甘蔗酸的測定3超聲振蕩提取法3.1試驗中比較了庫拉索蘆薈表皮及其凝膠汁液中蘆薈苷的含量,庫拉索蘆薈表皮中蘆薈苷含量為177.6μg/g,其凝膠汁液中的含量為18.28μg/g,比表皮中的低很多。3.2試驗中用華蘆薈表皮研究了超聲波振蕩和回流兩種提取方法對蘆薈苷的提取效率,結果表明超聲波振蕩提取液中蘆薈苷含量為208.1μg/g,回流提取液中含量為72.79μg/g。顯然超聲振蕩提取法要優(yōu)于回流提取法,因此,本文采用了超聲振蕩提取法。3.3蘆薈苷和蘆薈大黃素同屬蒽醌類物質,蘆薈大黃素與一個葡萄糖分子結合就形成蘆薈苷,蘆薈苷水解生成蘆薈大黃素。蘆薈苷和蘆薈大黃素結構式見圖9、圖10。查文獻時發(fā)現(xiàn),許多文章報道多種蘆薈中能同時檢出蘆薈苷和蘆薈大黃素,但本試驗表明只有華蘆薈能同時檢出蘆薈苷和蘆薈大黃素,其他品種蘆薈只能檢出蘆薈苷。這可能與實驗條件或者蘆薈生長環(huán)境有關。測定的5種蘆薈中蘆薈苷的含量分別為華蘆薈73.92μg/g、不夜城蘆薈2.722μg/g、木立蘆薈613.3μg/g、庫拉索蘆薈136.3μg/g、元江蘆薈213.5μg/g。說明不同蘆薈品種蘆薈苷的含量不同。華蘆薈中蘆薈大黃素含量33.45μg/g,其他品種蘆薈中未檢出蘆薈大黃素。檢測波長359nm;流動相:甲醇-1%:醋酸(45∶55);柱溫:40℃;流速:1mL/min。將蘆薈葉片劃開,取各蘆薈凝膠汁液適量,用pH25型酸度計分別測定其p