第九章核酸分子雜交技術試題A型題：要探知細胞內某一蛋白質的表達水平，可以通過_______實現(xiàn)。SouthernblotNorthernblotWesternblot原位分子雜交核酸的變性是_______。一級結構的斷裂二級結構的破壞伴有共價鍵的斷裂是DNA的降解過程。固相雜交不包括_______。Northern印跡雜交原位雜交吸附雜交Southern印跡雜交染色體原位雜交結果如圖所示羊水細胞間期核與13、18、21、X和Y染色體的DNA探針雜交。左圖顯示細胞核與13號染色體（綠）和21號染色體（紅）的探針雜交。右圖顯示細胞核與18號染色體（淺藍）、X染色體(綠)和Y染色體（紅）的探針雜交。請根據(jù)該結果得出診斷為_______。21三體女性胎兒染色體微缺失正常男性胎兒染色體原位雜交結果如下圖左圖：用13號染色體（綠）和21號染色體（紅）的探針與來自羊水的間期細胞雜交，右圖：用18號染色體（淺藍色）、X染色體（綠）和Y染色體(紅)的探針與羊水細胞雜交。針對該檢測結果判斷疾病為_______。男性21三體女性21三體DiGeorge綜合癥正常胎兒熒光原位雜交結果如下圖X染色體著絲粒探針（Xcen）和Xp22.3探針都用紅色熒光標記，根據(jù)該結果可診斷為_______。染色體微缺失21三體男性胎兒正常女性胎兒熒光素FITC是_______。異硫氰酸熒光素四乙基羅達明德克薩斯紅吲哚二羧菁B型題著絲粒探針染色體涂抹探針基因座特異探針端粒重復序列探針可用于中期及間期細胞，檢測染色體的非整倍性可用于中期及間期細胞，檢測微缺失和微重復可用于中期及間期細胞，檢測染色體的非整倍性和端粒微小末端重排只能用于中期細胞，確定小標識染色體或畸變重復序列探針固相雜交液相雜交Western印跡FISHRx-FISH菌落原位雜交斑點和狹縫雜交Southern印跡雜交Northern印跡雜交復性速率液相雜交吸附雜交發(fā)光液相雜交液相夾心雜交原位雜交DNA的濃度DNA的大小和復雜性溫度離子強度影響DNA復性的因素影響DNA變性的因素影響核酸分子雜交的因素X型題根據(jù)性質及來源不同，核酸探針又可被分為基因組DNA探針DNA探針RNA探針寡核苷酸探針等常用的核酸探針非放射性標記物有地高辛生物素酶熒光素系統(tǒng)常用的核酸探針熒光素標記物有異硫氰酸熒光素四乙基羅達明德克薩斯紅吲哚二羧菁等非放射性探針檢測方法有直接法間接免疫法直接親合法間接親合法等Southern印跡技術是檢測RNA的核酸雜交技術是以發(fā)明者的名字命名的屬于固相雜交的范疇可用于遺傳病的檢測Northern印跡技術是檢測RNA的核酸雜交技術是以發(fā)明者的名字命名的屬于固相雜交的范疇與Southern印跡雜交的方法類似，只是變性劑不同核酸原位雜交是核酸分子雜交技術與組織細胞化學和免疫組織化學結合起來的一種雜交方法，基本原理及探針的標記方法與傳統(tǒng)核酸分子雜交技術相同不能確定與探針互補的核酸序列在細胞內的空間位置不需要將核酸從細胞中提取出來熒光原位雜交的標本中期染色體間期核完整細胞或組織切片最廣泛應用的標本是中期染色體液相分子雜交包括吸附雜交發(fā)光液相雜交液相夾心雜交復性速率液相分子雜交名詞解釋核酸分子雜交核酸探針Southern印跡Northern印跡Western印跡染色體原位雜交重復序列探針單一序列探針全染色體涂抹探針基因座特異探針變性復性增色效應雜交反應的嚴格度退火FISHRx-FISH問答題原位雜交的基本原理簡述原位雜交在臨床中的應用。簡述臨床診斷常用的FISH探針的類型及用途。舉例說明FISH技術在分子診斷上的應用。M-FISH的原理及其優(yōu)缺點。參考答案一、1、C2、B3、C4、D5、B6、A7、A二、1.A2.C3.C4.B5.AD6.A7.A8.A9.A10.B11.B12.B13.B14.A15.ABCD16.CD17.ABCD三、1．ABCD2.ABCD3.ABCD4.ABCD5.BCD6.ACD7.ABD8.ABCD9.ABCD四、名詞解釋核酸分子雜交：不同來源的單鏈核酸分子在合適的溫度和離子強度下，通過堿基互補形成雙鏈雜交體的過程稱之。核酸探針：是指能與待檢測的靶核酸序列互補雜交的某種已知序列的核酸片段。它具有高度的特異性，并且一般來講帶有某種適當?shù)臉擞浺员銠z測。Southern印跡將待檢測的DNA樣品固定在固相載體上（硝酸纖維素膜或尼龍膜），與標記的核酸探針進行雜交，在與探針有同源序列的位置上顯示出雜交信號。通過Southern雜交可以判斷被檢測的DNA樣品中是否有與探針同源的片段以及該片段的長度。Northern印跡指RNA經(jīng)電泳分離后轉移至膜性支持物上進行雜交反應的技術，目前主要用于檢測某一組織或細胞中已知的特異mRNA的表達水平以及比較不同組織和細胞的同一基因的表達情況。Western印跡Western印跡又稱免疫印跡(immunoblotting)，是一種通過標記的抗體檢測經(jīng)SDS分離的特定蛋白質的技術。染色體原位雜交熒光原位雜交可以檢測非分裂期即間期細胞核的染色體的數(shù)量及結構異常這種方法稱為染色體原位雜交（chromosomeinsituhybridization），是FISH優(yōu)于傳統(tǒng)細胞遺傳學技術的重要特點。重復序列探針是指與某一條特定的染色體結構結合、特異識別重復DNA序列的探針如著絲粒探針、端粒探針等。單一序列探針指能與位于某條染色體特定的區(qū)域或基因的單拷貝DNA序列雜交的探針。全染色體涂抹探針來源于一條染色體的DNA文庫，這種探針可以識別一條特定染色體全長上的單一序列，從而將一條完整的染色體染色而得以顯示（painting）?；蜃禺愄结樖桥c染色體上某一特定基因的單拷貝DNA序列雜交的探針。當已經(jīng)分離到一個基因的一小段，想檢測該基因定位于哪條染色體時，應用該探針。變性當有酸、堿、熱及某些變性劑（如尿素、乙醇、甲酰胺、胍等）等因素存在時，DNA分子雙鏈間的氫鍵斷裂，解離成兩條無規(guī)則的卷曲狀單鏈DNA，此現(xiàn)象稱之。復性去除變性因素后，單鏈DNA可通過堿基互補重新結合成穩(wěn)定的雙鏈螺旋結構，此過程稱為復性（renaturation）。增色效應DNA變性后，由于雙螺旋解體，堿基堆積不再存在，藏于螺旋內部的堿基暴露出來，從而使變性后的DNA對260nm紫外光的吸光率比變性前明顯增加，這種現(xiàn)象稱之。雜交反應的嚴格度在雜交反應中容許錯配的程度稱之。退火當熱變性DNA緩慢冷卻時，可以復性，這種復性稱之。FISH是一種利用非放射性的熒光信號對原位雜交樣本進行檢測的技術。它通過熒光標記的探針與待測標本的核酸進行原位雜交，在熒光顯微鏡下對熒光信號進行辨別和計數(shù)，從而對染色體或基因異常的細胞、組織標本畸形檢測和診斷。Rx-FISHRx-FISH技術是采用多種熒光素混合物標記與人類DNA有高度同源性的猿或其它靈長類動物的DNA作為探針，雜交后使人類的24條染色體呈現(xiàn)特異的帶型，根據(jù)彩色的熒光條帶進行核型分析。五、問答題原位雜交的基本原理樣本經(jīng)適當處理后，使細胞通透性增加，讓探針進入細胞內與組織、細胞中待檢測的核酸進行特異性結合形成雜交體，然后通過組織化學或免疫組織化學方法在被檢測的核酸原位形成的雜交信號，在顯微鏡或電子顯微鏡下對待測核酸進行細胞內定位的方法。簡述原位雜交在臨床中的應用原位雜交技術可以通過標記的探針與分裂中期染色體DNA雜交來精確定位特定核苷酸序列在染色體上的位置；與細胞RNA雜交可觀察組織細胞中特定基因的表達水平；還可用特異性的細菌或病毒的核酸序列作為探針與組織、細胞雜交，以確定有無病原體的感染等。原位雜交能在成分復雜的組織中對單一細胞進行研究，不受同一組織中其它成分的影響，因此對于那些細胞數(shù)量少且散在于其它組織中的細胞內DNA或RNA的研究更為方便。此外，原位雜交不需要從組織中提取核酸，有利于檢測組織中含量極低的靶序列，并可完整地保持組織和細胞的形態(tài)，更能準確地反應出組織細胞的相互關系及功能狀態(tài)。舉例：原位雜交檢測上皮細胞中人乳頭狀瘤病毒（HPV）DNA簡述臨床診斷常用的FISH探針的類型及用途。根據(jù)核酸探針的序列特點，可將FISH探針分為三大類：重復序列探針、單一序列探針和全染色體涂抹探針。重復序列探針（repetitivesequencesprobes）是指與某條特定的染色體結構結合、特異識別重復DNA序列的探針如著絲粒探針、端粒探針等。一般來說，不同的染色體，著絲粒重復序列中的核苷酸序列也不同，但端粒重復序列不具有染色體特異性。單一序列探針(Uniquesequenceprobes)與某條染色體上特定的區(qū)域或基因的單拷貝DNA序列雜交。包括帶特異性探針（bandspecialprobes）和基因座特異性探針（LocusSpecificprobes）等。全染色體涂抹探針（wholechromosomepaintingprobes,WCP）是識別一條特定染色體全長上的單一序列探針的混合物。種類主要應用著絲粒探針（centromericprobes）可用于中期及間期細胞，檢測染色體的非整倍性染色體涂抹探針（Chromosomepaints）只能用于中期細胞，確定小標識染色體或畸變基因座特異探針(LocusSpecificProbes)可用于中期及間期細胞，檢測微缺失和微重復端粒重復序列探針（Telomere-repeatprobes）可用于中期及間期細胞，檢測染色體的非整倍性和端粒微小末端重排舉例說明FISH技術在分子診斷上的應用21三體，微缺失，腫瘤，病原微生物等的檢測與診斷。M-FISH的原理及其優(yōu)缺點混合數(shù)種熒光原色，形成不同