費(fèi)林試劑熱滴定定糖法一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康某醪秸莆召M(fèi)林試劑熱滴定定糖法的原理和方法。正確掌握滴定管的使用方法和熱滴定的終點(diǎn)。二、實(shí)驗(yàn)原理還原糖是指含有自由醛基(如：葡萄糖)或酮基(如：果糖)的單糖和某些二糖(如：乳糖、麥芽糖)。所有的單糖（除二羥丙酮和五碳糖，即核糖和脫氧核糖），不論醛糖、酮糖都是還原糖。大部分雙糖也是還原糖，蔗糖例外。一般情況下，單糖的還原能力主要來(lái)自它的醛基，如葡萄糖，而多糖則大多因?yàn)榘肟s醛羥基的存在。還原后，自己會(huì)變成糖酸。如葡萄糖就會(huì)變成葡萄糖酸。在堿性溶液中，還原糖能將金屬離子(Cu2+、Hg2+、Ag+等)還原，而糖本身被氧化成各種羥酸類化合物。該特性常用于糖的定性和定量測(cè)定。本實(shí)驗(yàn)采用費(fèi)林試劑熱滴定法，費(fèi)林試劑是氧化劑，由甲、乙兩種溶液組成。甲液含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.05g/mL的硫酸銅和次甲基藍(lán)(氧化還原指示劑)；乙液含質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1g/mL的氫氧化鈉，酒石酸鉀鈉和亞鐵氰化鉀。當(dāng)甲、乙兩溶液混合時(shí)，硫酸銅與氫氧化鈉反應(yīng)生成天藍(lán)色的氫氧化銅沉淀。在堿性溶液中，酒石酸鉀鈉與沉淀的氫氧化銅作用形成可溶性的絡(luò)合物，該含Cu2+絡(luò)合物的溶液，被還原后得到磚紅色Cu2O的沉淀。因此，斐林試劑常用于鑒定可溶性的還原性糖的存在與否。費(fèi)林試劑熱滴定定糖法的基本原理,是在沸熱條件下,用還原糖溶液滴定一定量的費(fèi)林試劑時(shí),將費(fèi)林試劑中的銅離子還原為氧化亞銅,以亞甲基藍(lán)為指示劑,稍過(guò)量的還原糖立即將藍(lán)色的氧化型亞甲基藍(lán)還原為無(wú)色的還原型亞甲基藍(lán),指示滴定終點(diǎn)。三、試劑和器材試劑：1.面粉2.6MHCl3.蒸餾水4.碘液5.酚酞試劑6.10%氫氧化鈉7.菲林試劑（甲、乙液）8.標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖（1mg/ml）器材：25毫升堿滴定管。(6)萬(wàn)能夾移液管(5、10毫升)(7)鐵架臺(tái)100毫升溶量瓶(8)點(diǎn)滴板100毫升錐形瓶(9)水浴鍋滴管(10)600瓦電爐四、實(shí)驗(yàn)步驟1.總糖的提取準(zhǔn)確稱取面粉1克，加入6mol/L鹽酸10毫升，蒸餾水15毫升，混勻。沸水浴加熱半小時(shí)后，取出幾滴水解液用碘化鉀-碘溶液檢查水解是否完全，若已經(jīng)水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。冷卻后用10%氫氧化鈉中和至中性溶液，定容至100毫升。準(zhǔn)確吸取該溶液10ml，移入100ml容量瓶?jī)?nèi)并定容至刻度，即為測(cè)定總糖的樣品液。2、空白測(cè)定準(zhǔn)確吸取費(fèi)林甲、乙液各5毫升和蒸餾水5毫升放入250毫升的錐形瓶中，再用滴定管加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液，混勻后放在石棉網(wǎng)上加熱，應(yīng)使瓶?jī)?nèi)溶液在2分鐘內(nèi)達(dá)到沸騰，以每滴4-5秒的速度由滴定管滴入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液直至藍(lán)色消失為止。記錄滴定完后滴定管的刻度，并同時(shí)記錄滴定所需時(shí)間。平行測(cè)定三次，直至所得的平均數(shù)與各組的差值＜0.1ml。沸騰前加入的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量與沸騰后滴定時(shí)所用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液量的總和，就是測(cè)定空白時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液毫升數(shù)(V1)。全部滴定過(guò)程必須在沸騰狀態(tài)下快速進(jìn)行，一般應(yīng)在3分鐘內(nèi)完成。因此，除控制滴定速度外，滴定前需加入一部分標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液。加入該液的數(shù)量，應(yīng)在正式滴定前的預(yù)備滴定試驗(yàn)時(shí)確定，同時(shí)練習(xí)掌握操作條件。3、總糖的測(cè)定準(zhǔn)確稱取面粉1克，加入6N鹽酸10毫升，蒸餾水15毫升，混勻。沸水浴加熱半小時(shí)后，取出幾滴水解液用碘化鉀-碘溶液檢查水解是否完全，若已經(jīng)水解完全，則不呈現(xiàn)藍(lán)色。冷卻后用10%氫氧化鈉中和至中性溶液，過(guò)濾，濾液定容至100毫升。準(zhǔn)確吸取該溶液10毫升，移入100毫升容量瓶?jī)?nèi)并定容至刻度，即為測(cè)定總糖的樣品液。準(zhǔn)確吸取樣品液5毫升放于100毫升錐形瓶?jī)?nèi)，加入費(fèi)林甲液、乙液各5毫升，混勻，然后按測(cè)定空白同樣操作進(jìn)行滴定，記下耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)。平行測(cè)定三次，直至所得的平均數(shù)與各組的差值＜0.1ml。五、數(shù)據(jù)記錄實(shí)驗(yàn)測(cè)定數(shù)據(jù)如下表所示：表一：費(fèi)林試劑熱滴定數(shù)據(jù)記錄表滴定組別空白測(cè)定樣品測(cè)定滴定次數(shù)123平均123平均費(fèi)林甲液/mL555--555--費(fèi)林乙液/mL555--555--蒸餾水/mL555----------樣品液/mL--------555--預(yù)加葡萄糖/ml555----------消耗葡萄糖量V1/ml7.257.257.357.28消耗葡萄糖量V2/ml3.003.103.053.05六、實(shí)驗(yàn)計(jì)算(V1-V2)×標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液濃度(克/毫升)×稀釋倍數(shù)還原糖(或總糖)%=×100%稱取的樣品量(克)×5式中：V1為測(cè)定空白時(shí)耗用標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液毫升數(shù)。V2為測(cè)定總糖時(shí)耗用的標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖的毫升數(shù)。把實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)代入公式得：(7.28-3.05)×0.001×1000還原糖(或總糖)%=×100%1×5=84.6%即面粉中的糖含量為84.6%。七、注意事項(xiàng)1.菲林試劑一般應(yīng)現(xiàn)配現(xiàn)用，因?yàn)殪沉衷噭┘缀挽沉衷噭┮一旌虾髸?huì)因酒石酸有一定的還原性而自發(fā)地緩慢產(chǎn)生氧化亞銅沉淀。2.總糖的提取步驟中，面粉應(yīng)在液體加入三角瓶之后再加入，因?yàn)檫@樣可以使面粉更容易溶解，沸水浴30min后檢查是否水解完全，若未則應(yīng)繼續(xù)加熱。3.用酚酞作指示劑時(shí)用10%氫氧化鈉調(diào)PH至7，應(yīng)先計(jì)算大概需加入氫氧化鈉溶液的體積，然后在接近拐點(diǎn)處應(yīng)一滴一滴甚至半滴半滴的加，因?yàn)榇颂幫蛔兒艽螅苊饧尤霘溲趸c過(guò)量后再用鹽酸調(diào)PH，因?yàn)檫@會(huì)使得葡萄糖溶液變得粘稠。4.空白滴定中一定以每滴1-2秒的速度由滴定管滴入標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖液直至藍(lán)色變成黃色且在30s內(nèi)顏色又變成深紅色為止。5.為使空白測(cè)定與樣品測(cè)定的時(shí)間一致，在樣品滴定之前應(yīng)提前加入一定量的葡萄糖。6.在滴定過(guò)程中，應(yīng)注意在顏色由藍(lán)色變?yōu)樽仙珪r(shí)，應(yīng)減慢滴速，當(dāng)顏色變?yōu)橥咙S色時(shí)，立即停止加入葡萄糖，顏色會(huì)再度變回紫色時(shí)，不應(yīng)再滴加葡萄糖。八、分析與小結(jié)實(shí)驗(yàn)分析實(shí)驗(yàn)測(cè)得的面粉中的糖含量為84.6%，與實(shí)際值有一定的誤差，產(chǎn)生誤差的原因有以下幾點(diǎn)：1)面粉未完全溶解，仍有部分固體殘?jiān)贿^(guò)濾出來(lái)，對(duì)測(cè)量結(jié)果有一定的影響。2)各組滴定的時(shí)間不完全一致，空氣中的O2對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果造成影響。3)對(duì)滴定終點(diǎn)的把握不夠精確，