保健食品及其原料毒理學(xué)評價程序（征求意見稿）本程序合用于保健食品及其原料的毒理學(xué)安全性評價。1術(shù)語1.1保健食品是指聲稱保健功效，不得對人體產(chǎn)生急性、亞急性或者慢性危害的特殊食品。涉及屬于補(bǔ)充維生素、礦物質(zhì)等營養(yǎng)物質(zhì)的營養(yǎng)素補(bǔ)充劑，以及聲稱保健功效的產(chǎn)品。1.2保健食品原料形成保健食品功效成分和配方的初始物料。2受試物2.1受試物能夠是保健食品或保健食品原料。2.2資料性規(guī)定2.2.1應(yīng)提供受試物的名稱、性狀、規(guī)格、批號、生產(chǎn)日期、保質(zhì)期、保存條件、申請單位名稱、生產(chǎn)公司名稱、配方、生產(chǎn)工藝、質(zhì)量原則、保健功效以及推薦攝入量等信息。2.2.2受試物為保健食品原料時應(yīng)提供動物和植物類原料的產(chǎn)地和食用部位、微生物類原料的分類學(xué)地位和生物學(xué)特性、食用條件和方式、食用歷史、食用人群等基本信息，以及其它有助于安全性評定的資料。2.2.3原料為從動物、植物、微生物中分離的成分時，還需提供該成分的理化特性和化學(xué)構(gòu)造等資料。2.2.4提供受試物的重要成分、功效成分/標(biāo)志性成分及可能的有害成分的分析報告。2.3受試物的特殊規(guī)定2.3.1保健食品應(yīng)提供包裝完整的定型產(chǎn)品。毒理學(xué)實驗所用樣品批號應(yīng)與功效學(xué)實驗所用樣品批號一致，并且為衛(wèi)生學(xué)實驗所用三批樣品之一（益生菌、奶制品等產(chǎn)品保質(zhì)期短于整個實驗周期的產(chǎn)品除外）。根據(jù)技術(shù)審評意見規(guī)定補(bǔ)做實驗的，若原批號樣品已過保質(zhì)期，可使用新批號的樣品實驗，但應(yīng)提供新批號樣品按產(chǎn)品技術(shù)規(guī)定檢查的全項目檢查報告。2.3.2由于推薦量較大等因素不適合直接以定型產(chǎn)品進(jìn)行實驗時，能夠?qū)λ蜋z樣品適宜解決，如濃縮、部分去除輔料或已知安全的食品成分等。應(yīng)提供受試樣品解決過程的闡明和對應(yīng)的證明文獻(xiàn)，解決過程應(yīng)與原保健食品的重要生產(chǎn)工藝環(huán)節(jié)保持一致。3.毒理學(xué)實驗的重要項目根據(jù)GB15193開展下列實驗。3.1急性經(jīng)口毒性實驗3.2遺傳毒性實驗：細(xì)菌回復(fù)突變實驗，體內(nèi)哺乳動物紅細(xì)胞微核實驗，哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變實驗，小鼠精原細(xì)胞或精母細(xì)胞染色體畸變實驗，體外哺乳類細(xì)胞HGPRT基因突變實驗，體外哺乳類細(xì)胞TK基因突變實驗，體外哺乳類細(xì)胞染色體畸變實驗、嚙齒類動物顯性致死實驗，體外哺乳類細(xì)胞DNA損傷修復(fù)（非程序性DNA合成）實驗，果蠅伴性隱性致死實驗。遺傳毒性實驗組合：普通應(yīng)遵照原核細(xì)胞與真核細(xì)胞、體內(nèi)與體外實驗相結(jié)合的原則，并涉及不同的終點（誘導(dǎo)基因突變、染色體構(gòu)造和數(shù)量變化），推薦下列遺傳毒性實驗組合：組合一：細(xì)菌回復(fù)突變實驗；哺乳動物紅細(xì)胞微核實驗或哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變實驗；小鼠精原細(xì)胞或精母細(xì)胞染色體畸變實驗或嚙齒類動物顯性致死實驗。組合二：細(xì)菌回復(fù)突變實驗；哺乳動物紅細(xì)胞微核實驗或哺乳動物骨髓細(xì)胞染色體畸變實驗；體外哺乳類細(xì)胞染色體畸變實驗或體外哺乳類細(xì)胞TK基因突變實驗。根據(jù)受試物的特點也可用其它體外或體內(nèi)測試替代推薦組合中的一種或多個體外測試。3.328天經(jīng)口毒性實驗3.4致畸實驗3.590天經(jīng)口毒性實驗3.6生殖毒性實驗3.7毒物動力學(xué)實驗3.8慢性毒性實驗3.9致癌實驗3.10慢性毒性和致癌合并實驗4.毒性實驗的選擇4.1保健食品原料需要開展安全性評價的保健食品原料應(yīng)參考新食品原料安全性審查的有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。4.2保健食品4.2.1保健食品普通應(yīng)進(jìn)行急性經(jīng)口毒性實驗、三項遺傳毒性實驗和28天經(jīng)口毒性實驗。根據(jù)實驗成果和目的人群決定與否增加90天經(jīng)口毒性實驗、致畸實驗和生殖毒性實驗、慢性毒性和致癌實驗及毒物動力學(xué)實驗。4.2.2采用造成物質(zhì)基礎(chǔ)發(fā)生重大變化等非傳統(tǒng)工藝生產(chǎn)的保健食品，應(yīng)進(jìn)行急性經(jīng)口毒性實驗、三項遺傳毒性實驗、90天經(jīng)口毒性實驗和致畸實驗，必要時開展其它毒性實驗。4.2.3以普通食品、保健食品原料目錄內(nèi)的物質(zhì)為原料，僅采用物理粉碎或水提等傳統(tǒng)食品生產(chǎn)工藝生產(chǎn)、食用辦法與傳統(tǒng)食用辦法相似，且原料推薦食用量為常規(guī)用量或符合國家有關(guān)食品用量規(guī)定的保健食品，普通可不開展毒性實驗。5.特定產(chǎn)品的毒理學(xué)設(shè)計規(guī)定5.1如產(chǎn)品配方中含有人體必需營養(yǎng)素或已知存在安全問題等物質(zhì)，如某一過量攝入易產(chǎn)生安全性問題的人體必需營養(yǎng)素等物質(zhì)（如維生素A、硒等）或已知存在安全問題物質(zhì)（如咖啡因等），在按其推薦量設(shè)計實驗劑量時，如該物質(zhì)的劑量達(dá)成已知的毒性作用劑量，在原有劑量設(shè)計的基礎(chǔ)上，應(yīng)考慮增設(shè)去除該物質(zhì)或減少該物質(zhì)劑量（如降至未觀察到有害作用劑量）的受試物劑量組，方便對受試物中其它成分的毒性作用及該物質(zhì)與其它成分的聯(lián)合毒性作用做出評價。5.2推薦量較大的含乙醇的受試物，在按其推薦量設(shè)計實驗劑量時，如超出動物最大灌胃容量，能夠進(jìn)行濃縮。乙醇濃度低于15％（V/V)的受試物，濃縮后應(yīng)將乙醇恢復(fù)至受試物定型產(chǎn)品原來的濃度。乙醇濃度高于15％的受試物，濃縮后應(yīng)將乙醇濃度調(diào)節(jié)至15％，并將各劑量組的乙醇濃度調(diào)節(jié)一致。不需要濃縮的受試物，其乙醇濃度高于15％時，應(yīng)將各劑量組的乙醇濃度調(diào)節(jié)至15％。在調(diào)節(jié)受試物的乙醇濃度時，原則上應(yīng)使用生產(chǎn)該受試物的酒基，無法達(dá)成定型產(chǎn)品的濃度時，可用食用酒精。5.3針對適宜人群為孕婦、乳母或小朋友的產(chǎn)品，應(yīng)特別關(guān)注與否存在生殖毒性和發(fā)育毒性，必要時還需檢測某些神經(jīng)毒性和免疫毒性指標(biāo)。5.4對益生菌、真菌等有特殊規(guī)定的保健食品，應(yīng)按規(guī)定增加對應(yīng)的實驗，如毒力實驗。6.動物實驗設(shè)計共性問題6.1受試物的前解決6.1.1袋泡茶類受試物的提取辦法應(yīng)與產(chǎn)品推薦飲用的辦法相似，可用該受試物的水提取物進(jìn)行實驗。如果產(chǎn)品無特殊推薦飲用辦法，水提取物可采用下列提取條件進(jìn)行：常壓、溫度80℃～90℃，浸泡時間30min，水量為受試物質(zhì)量的10倍或以上，提取2次，將提取液合并濃縮至所需濃度，并標(biāo)明該濃縮液與原料的比例關(guān)系。如產(chǎn)品有特殊推薦服用辦法（如推薦食用浸泡后的產(chǎn)品），在實驗時予以考慮。6.1.2液體受試物需要進(jìn)行濃縮解決時，應(yīng)采用不破壞其中有效成分的辦法?？墒褂脺囟?0℃～70℃減壓或常壓蒸發(fā)濃縮、冷凍干燥等辦法。液體受試物經(jīng)濃縮后達(dá)成人體推薦量的實驗規(guī)定，但不能通過灌胃予以的，允許以摻入飼料的方式予以實驗動物。6.1.3不易粉碎的固體受試物（如含膠基、蜜餞類）可用凍干粉碎的方式解決，并在實驗報告中具體闡明。6.1.4含益生菌或其它微生物的受試物在進(jìn)行細(xì)菌回復(fù)突變實驗或體外細(xì)胞實驗時，應(yīng)將微生物滅活，并闡明具體辦法。6.1.5對人體推薦量較大的受試物，在按其推薦量設(shè)計實驗劑量時，如超出動物的最大灌胃容量或超出摻入飼料中的限量（10％（w/w）），可允許去除無安全問題的部分輔料進(jìn)行實驗，并在實驗報告中具體闡明。6.1.6吸水膨脹率較高的受試物應(yīng)考慮吸水膨脹對受試物予以劑量和實驗動物的影響，以此來選擇適宜的受試物予以方式（灌胃或摻入飼料）。如采用灌胃方式予以，應(yīng)選擇水為溶媒。6.2受試物的予以方式6.2.1受試物應(yīng)經(jīng)口予以。根據(jù)受試物的性質(zhì)及人體推薦攝入量，選擇摻入飼料或飲水、灌胃的方式予以受試物。應(yīng)具體闡明受試物配制辦法、予以辦法和時間。6.2.2灌胃予以受試物時，應(yīng)根據(jù)實驗的特點和受試物的理化性質(zhì)選擇適合的溶媒（溶劑、助懸劑或乳化劑），將受試物溶解或懸浮于溶媒中，普通可選用蒸餾水、植物油、淀粉、明膠、羧甲基纖維素、蔗糖脂肪酸酯等，如使用其它溶媒應(yīng)闡明理由。所選用的溶媒本身應(yīng)不產(chǎn)生毒性作用；與受試物各成分之間不發(fā)生化學(xué)反映，且保持其穩(wěn)定性；無特殊刺激性或氣味。6.2.3摻入飼料或飲水方式予以受試物時，應(yīng)確保受試物的穩(wěn)定性和均一性及飼料的適口性，以不影響動物攝食、營養(yǎng)均衡和飲水量為原則。當(dāng)受試物在飼料中的最大加入量超出5%（w/w）時，需考慮動物的營養(yǎng)需要，結(jié)合受試物的蛋白質(zhì)含量將各組飼料蛋白質(zhì)水平調(diào)節(jié)一致，并闡明具體調(diào)節(jié)辦法。原則上添加的受試物最高不超出飼料的10%（w/w），否則應(yīng)闡明理由。6.3實驗動物的選擇實驗動物應(yīng)符合對應(yīng)國標(biāo)的規(guī)定，同時結(jié)合保健功效（如減肥、輔助降血脂等）的特點來選擇實驗動物的品系、性別和年紀(jì)等。7.實驗成果的鑒定與應(yīng)用7.1急性毒性實驗如LD50不大于人的推薦（可能）攝入量的100倍，則普通應(yīng)放棄該受試物用于保健食品，不再繼續(xù)進(jìn)行其它毒理學(xué)實驗。7.2遺傳毒性實驗7.2.1如三項實驗均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性實驗。7.2.2如遺傳毒性實驗組合中兩項或以上實驗陽性，則表達(dá)該受試物很可能含有遺傳毒性和致癌作用，普通應(yīng)放棄該受試物應(yīng)用于保健食品。7.2.3如遺傳毒性實驗組合中一項實驗為陽性，根據(jù)其遺傳毒性終點、結(jié)合受試物的構(gòu)造分析、化學(xué)反映性、生物運用度、代謝動力學(xué)、靶器官等資料綜合分析，再選兩項備選實驗（最少一項為體內(nèi)實驗）。如再選的實驗均為陰性，則可繼續(xù)進(jìn)行下一步的毒性實驗；如其中有一項實驗陽性，則應(yīng)放棄該受試物應(yīng)用于保健食品。7.328天經(jīng)口毒性實驗對只需要進(jìn)行急性毒性、遺傳毒性和28天經(jīng)口毒性實驗的受試物，若實驗未發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，綜合其它各項實驗成果可做出初步評價；若實驗中發(fā)現(xiàn)有明顯毒性作用，特別是有劑量—反映關(guān)系時，則普通應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。7.490天經(jīng)口毒性實驗根據(jù)實驗所得的未觀察到有害作用劑量進(jìn)行評價，原則是：a)未觀察到有害作用劑量不大于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表達(dá)毒性較強(qiáng)，普通應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。b)未觀察到有害作用劑量不不大于100倍而不大于300倍者，應(yīng)進(jìn)行慢性毒性實驗。c)未觀察到有害作用劑量不不大于或等于300倍者則不必進(jìn)行慢性毒性實驗，可進(jìn)行安全性評價。7.5致畸實驗 根據(jù)實驗成果評價受試物是不是實驗動物的致畸物。若致畸實驗成果陽性則不再繼續(xù)進(jìn)行生殖毒性實驗和生殖發(fā)育毒性實驗。在致畸實驗中觀察到的其它發(fā)育毒性，應(yīng)結(jié)合28天和（或）90天經(jīng)口毒性實驗成果進(jìn)行評價。7.6生殖毒性實驗和生殖發(fā)育毒性實驗根據(jù)實驗所得的未觀察到有害作用劑量進(jìn)行評價，原則是：a)未觀察到有害作用劑量不大于或等于人的推薦（可能）攝入量的100倍表達(dá)毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。b)未觀察到有害作用劑量不不大于100倍而不大于300倍者，應(yīng)進(jìn)行慢性毒性實驗。c)未觀察到有害作用劑量不不大于或等于300倍者則不必進(jìn)行慢性毒性實驗，可進(jìn)行安全性評價。7.7慢性毒性和致癌實驗7.7.1根據(jù)慢性毒性實驗所得的未觀察到有害作用劑量進(jìn)行評價的原則是：a)未觀察到有害作用劑量不大于或等于人的推薦（可能）攝入量的50倍者，表達(dá)毒性較強(qiáng)，應(yīng)放棄該受試物用于保健食品。b)未觀察到有害作用劑量不不大于50倍而不大于100倍者，經(jīng)安全性評價后，決定該受試物可否用于食品。c)未觀察到有害作用劑量不不大于或等于100倍者，則可考慮允許使用于保健食品。7.7.2根據(jù)致癌實驗所得的腫瘤發(fā)生率、潛伏期和多發(fā)性等進(jìn)行致癌實驗成果鑒定的原則是（凡符合下列狀況之一，可認(rèn)為致癌實驗成果陽性。若存在劑量反映關(guān)系，則判斷陽性更可靠）：a)腫瘤只發(fā)生在實驗組動物，對照組中無腫瘤發(fā)生。b)實驗組與對照組動物均發(fā)生腫瘤，但實驗組發(fā)生率高。c)實驗組動物中多發(fā)性腫瘤明顯，對照組中無多發(fā)性腫瘤，或只是少數(shù)動物有多發(fā)性腫瘤。d)實驗組與對照組動物腫瘤發(fā)生率雖無明顯差別，但實驗組中發(fā)生時間較早。致癌實驗成果陽性應(yīng)放棄將該受試物用于保健食品。8.安全性綜合評價時需要考慮的因素8.1實驗指標(biāo)的統(tǒng)計學(xué)意義、生物學(xué)意義和毒理學(xué)意義對實驗中某些指標(biāo)的異常變化，應(yīng)根據(jù)實驗組與對照組指標(biāo)與否有統(tǒng)計學(xué)差別、其有無劑量反映關(guān)系、同類指標(biāo)橫向比較、兩種性別的一致性及與本實驗室的歷史性對照值范疇等，綜合考慮指標(biāo)差別有無生物學(xué)意義，并進(jìn)一步判斷與否具毒理學(xué)意義。另外，如在受試物組發(fā)現(xiàn)某種在對照組沒有發(fā)生的腫瘤，即使與對照組比較無統(tǒng)計學(xué)意義，仍要予以關(guān)注。8.2人體推薦（可能）攝入量較大的受試物首先，若受試物摻入飼料的最大加入量（原則上最高不超出飼料的10%）或液體受試物經(jīng)濃縮后仍達(dá)不到未觀察到有害作用劑量為人體推薦（可能）攝入量的規(guī)定倍數(shù)時，綜合其它的毒性實驗成果和實際食用或飲用量進(jìn)行安全性評價。另首先，應(yīng)考慮予以受試物量過大時，可能通過影響營養(yǎng)素攝入量及其生物運用率、從而造成某些與受試物無關(guān)的毒理學(xué)體現(xiàn)。8.3時間-毒性效應(yīng)關(guān)系對由受試物引發(fā)實驗動物的毒性效應(yīng)進(jìn)行分析評價時，要考慮在同一劑量水平下毒性效應(yīng)隨時間的變化狀況。8.4人群資料由于存在著動物與人之間的物種差別，在評價食品的安全性時，應(yīng)盡量收集人群接觸受試物后的反映資料。人體的毒物動力學(xué)或代謝資料對于將動物實驗成果推論到人含有很重要的意義。8.5動物毒性實驗和體外實驗資料本程序所列的各項動物毒性實驗和體外實驗系統(tǒng)是現(xiàn)在管理（法規(guī)）毒理學(xué)評價水平下所得到的最重要的資料，也是進(jìn)行安全性評價的重要根據(jù)。結(jié)合其它來源于計算機(jī)分析、體外實驗或體內(nèi)實驗的有關(guān)資料，有助于更加全方面地解釋實驗成果、做出科學(xué)的評價。8.6不擬定系數(shù)即安全系數(shù)。將動物毒性實驗成果外推到人時，鑒于動物與人的物種和個體之間的生物學(xué)差別，不擬定系數(shù)普通為100，但可根據(jù)受試物的原料來源、理化性質(zhì)、毒性大小、代謝特點、蓄積性、接觸的人群范疇、食品中的使用量和人的可能攝入量、使用范疇及功效等因素來綜合擬定其安全系數(shù)的大小。8.7毒物動力學(xué)實驗的資料毒物動力學(xué)實驗是對化學(xué)物質(zhì)進(jìn)行毒理學(xué)評價的一種重要方面，由于不同化學(xué)物質(zhì)、劑量大小，在毒物動力學(xué)或代謝方面的差別往往對毒性作用影響很大。在毒性實驗中，