會計學1高效液相色譜法定性定量分析提綱一﹑HPLC系統(tǒng)簡介二﹑HPLC中的固定相和流動相三﹑應(yīng)用范圍四﹑定量定性分析第1頁/共20頁一、HPLC系統(tǒng)HPLC系統(tǒng)輸液第2頁/共20頁泵進樣器色譜柱檢測器數(shù)據(jù)記錄及處理HPLC示意圖第3頁/共20頁輸液泵：輸液泵是HPLC系統(tǒng)中的重要部件之一，泵的性能好壞直接影響到整個系統(tǒng)的質(zhì)量和分析結(jié)果的可靠性。泵應(yīng)具有的性質(zhì)：流量穩(wěn)定；流量范圍寬；輸出壓力高；液缸容積小；密封性能好，耐腐蝕。輸液泵第4頁/共20頁操作時的注意事項：防止任何固體微粒進入泵；流動相不含有任何腐蝕性物質(zhì)；工作時要注意溶劑瓶中的溶第5頁/共20頁劑用完；進樣器：目前采用較多的是六通進樣閥和自動進樣器。

對進樣裝置的要求：密封性好，死體積小，重復性好，保證中心進樣，進樣時對色譜系統(tǒng)的壓力、流量影響小。進樣方式可分為：隔膜進樣、停流進樣、閥進樣、自動進樣。目前應(yīng)用做多的是閥進樣和自動進樣。進樣器第6頁/共20頁色譜柱子度要色譜柱的要求：柱效高、選擇性好，分析速度快等。市售的用于HPLC的各種微粒填料好多孔硅膠以及以硅膠為基質(zhì)的鍵合相、氧化鋁、有機聚合物微球(包括離交換樹脂)、多孔碳等，其粒一般為3，5，7，10μm等，柱效理論值可達5～16萬/米。對于一般的分析只需5000塔板數(shù)的柱效;對于同系物分析，只500即可;對于較難的分離物質(zhì)對則可采用高達2萬的柱子，因此一般10～30CM左右的柱長就能滿足復雜混合物分析的需要。第7頁/共20頁檢測器檢測器是HPLC系統(tǒng)的三大關(guān)鍵部件之一，作用是把洗脫液中的組分的量轉(zhuǎn)化為電信號。HPLC的檢測器要求是靈敏度高，噪音低，線性范圍寬，重復性好，適用范圍廣等特點。第8頁/共20頁數(shù)據(jù)記錄及處理目前對于數(shù)據(jù)記錄及處理所采用的是計算機，計算機的廣泛應(yīng)用使得HPLC操作

更加迅速，簡便，準確，精密和自動化，現(xiàn)在已經(jīng)可以在互聯(lián)網(wǎng)上遠程處理數(shù)據(jù)，目前計算機在HPLC上的用途主要由：采集處理和分析數(shù)據(jù)；控制儀器；色譜系統(tǒng)優(yōu)化和專家系統(tǒng)。第9頁/共20頁HPLC的固定相和流動相固定相：即所說的基質(zhì)或者單體，可以是陶瓷的無機物基質(zhì)，也可以是有機聚合

物基質(zhì)。無機物基質(zhì)主要是硅膠和氧化鋁，在溶劑中不容易膨脹，有機聚合物基質(zhì)主

要是交聯(lián)苯乙烯-二乙烯苯、聚甲基丙烯酸酯。有機聚合物剛性小、易被壓縮，溶劑

或溶質(zhì)容易滲入有機基質(zhì)中，導致填料顆第10頁/共20頁粒膨脹，結(jié)果減少傳質(zhì)，最終使柱效降低。固定相的種類：硅膠氧化鋁3.聚合物固定相的選擇：（+++表示好，++表示一般，+表示差）第11頁/共20頁流動相：一個理想的流動相溶劑應(yīng)具有低粘度、與檢測其兼容性好、易于得到純品和低毒性的特征。選擇流動相要考慮的因素：

1.流動相應(yīng)不改變填料的任何性質(zhì)；2.純度；3.必須與檢測其匹配；第12頁/共20頁應(yīng)用范圍高效液相色譜法適于分析高沸點不易揮發(fā)的、受熱不穩(wěn)定易分解的、分子量大、不同極性的有機化合物；生物活性物質(zhì)和多種天然產(chǎn)物；合成的和天然的高分子化合物等。它們涉及石油化工產(chǎn)品、食品、合成藥物、生物化工產(chǎn)品及環(huán)境污染物等，約占全部有機化合物的80％。其余20％的有機化合物，包括永久性氣體，易揮發(fā)低沸點及中等分子量的化合物，只能用氣相色譜法進行分析。第13頁/共20頁定性分析常用的液相色譜定性方法有：1.利用已知標準樣品定性利用標淮樣品對未知化合物定性是最常用的液相色譜定性方法。由于每一種化合物在特定的色譜條件下（流動相組成、色譜柱、桂溫等相同），其保留值具有特征性，因此可以利用保留值進行定性。第14頁/共20頁2．利用檢測器的選擇性定性同一種檢測器對不同種類的化合物的響應(yīng)值是不同的，而不同的檢測器對同一種化合物的響應(yīng)也是不同的。所以當某一被測化合物同時被兩種或兩種以上檢測器檢測時，兩個或幾個檢測器對被測化合物的檢測靈敏度比值是與被測化合物的性質(zhì)密切相關(guān)的，可以用第來15頁/對共20頁被測化合物進行定性分析，這就是雙檢測器定件體系的基本3．利用紫外檢測器全波長掃描功能定性紫外檢測器是液相色譜中使用最廣泛的一種檢測器。全波長掃描紫外檢測器可以根據(jù)被檢測化合物的紫外光譜圖提供一些有價值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是在色譜圖上某組分的色譜出現(xiàn)極大值即最高濃度時，通過停泵等手段，使組分在檢測池中滯留，然后對檢測池中的組分進行全波長掃描，得到該組分的紫外—可見光譜圖；再取可能的標準樣品按同樣方法處理。對比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標準樣品是否相同。對于某些有特殊紫外譜圖的化合物，也可以通過對照標準譜圖的方法來識別化合物。第16頁/共20頁定量分析歸一化法歸一化法要求所有組分都能分離并有響應(yīng)。由于液相色譜所用檢測器為選擇性檢測器，對很多組分沒有響應(yīng)，因此液相色譜法較少使則歸一化法。外標法外標法是以待測組分純品配制標準試樣和待測試樣同時作色譜分析來進行比較而

定量的，可分為標第準17頁/曲共20頁線法和直接比較法。3.內(nèi)標法內(nèi)標法是比較精確的一種定量方法。它是將已知量的參比物（內(nèi)標物）加