實(shí)驗15微核的誘導(dǎo)和檢測微核（micronucleus）是染色體畸變的一種表現(xiàn)形式，為有絲分裂后期喪失著絲粒的染色體片斷，在間期細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中形成的一個或多個圓形或杏仁狀結(jié)構(gòu)。微核游離于主核之外，大小在主核的l/3以下。其折光率及細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)性質(zhì)和主核一樣，也具有合成DNA的能力。一般認(rèn)為微核是由有絲分裂后期喪失著絲粒的染色體斷片產(chǎn)生的，但是已有實(shí)驗證明，整條染色體或幾條染色體也能形成微核。這些斷片或染色體在有絲分裂過程中行動滯后，在分裂末期未能進(jìn)入主核，便形成了獨(dú)立于主核之外的核物質(zhì)塊。當(dāng)子細(xì)胞進(jìn)入下一次分裂間期時，它們便濃縮形成主核之外的小核，即形成微核。在環(huán)境污染物中存在著許多具有誘變活性的物質(zhì)，能直接或間接地誘發(fā)生物體發(fā)生基因突變（mutation）、染色體畸變（chromosomeaberration）等細(xì)胞遺傳損傷，染色體畸變在細(xì)胞分裂間期中以微核的形式表現(xiàn)出來，而微核產(chǎn)生的概率又可與誘變因子的劑量呈正比，因此可以用微核出現(xiàn)的頻率來評價環(huán)境誘變因子對生物的誘變影響。目前，常用的微核檢測技術(shù)主要有骨髓微核試驗和蠶豆根尖微核試驗，可應(yīng)用于輻射損傷、輻射防護(hù)、化學(xué)誘變劑、新藥試驗、食品添加劑、環(huán)境檢測的安全評價及染色體遺傳疾病和癌癥前期診斷等各個方面。小鼠骨髓嗜多染紅性細(xì)胞微核試驗：1959年，Evans等人首先提出用微核試驗檢測細(xì)胞遺傳損傷，1966年，Schroeder推薦用骨髓微核試驗代替相對麻煩費(fèi)時的骨髓細(xì)胞中期染色體畸變試驗來研究受試物的有絲分裂毒性（mitotictoxicity）和斷裂劑效應(yīng)（calstogeneffect）。此后，Schmid、Heddle等人在鑒別小鼠骨髓嗜多染性紅細(xì)胞（Polychromaticerythrocyte，PCE）的基礎(chǔ)上建立了哺乳類脊髓微核試驗方法，目前已經(jīng)成為一個相當(dāng)成熟的標(biāo)準(zhǔn)化體內(nèi)檢測系統(tǒng)。具體方法為：（1）染毒：在小鼠腹腔注射受試物。（2）取材：染毒24h后以頸椎脫臼法處死小鼠，取出兩根股骨，剔凈肌肉，用紗布擦掉附在股骨上的血污，剪掉股骨頭。以lml注射器吸取小牛血清沖洗骨髓腔，將骨髓細(xì)胞沖入青霉素小瓶中制成懸液。（3）制片：將骨髓細(xì)胞懸液移入離心管中，1000r/min離。5～10min。棄去上清液，留少量液體混勻后，按血常規(guī)涂片法涂片，待干后再置甲醇溶液中固定5～10min。（4）染色：1：l0Giemsa染液染色10min，樹膠封片。（5）觀察：骨髓嗜多染紅細(xì)胞呈灰藍(lán)色，成熟紅細(xì)胞呈橘紅色。微核大多數(shù)呈圓形或橢圓形，邊緣光滑整齊，嗜染性與核質(zhì)一致，呈紫紅色或藍(lán)紫色。每只動物計數(shù)1000～2000個嗜多染紅細(xì)胞。蠶豆根尖微核試驗：蠶豆根尖微核試驗1986年已被中國環(huán)保局列為一種環(huán)境生物測試的規(guī)范方法，它作為一種環(huán)境變異的檢測手段，在我國不少地區(qū)的環(huán)保部門和醫(yī)療衛(wèi)生系統(tǒng)中都有廣泛的應(yīng)用。蠶豆根尖微核試驗具有準(zhǔn)確、快速、操作簡便、有明顯劑量-效應(yīng)關(guān)系、適合大批量樣品檢測等特點(diǎn)。美國國家環(huán)保局也肯定了蠶豆根尖微核試驗在環(huán)境突變性檢測中的作用，對許多環(huán)境致癌物都作了標(biāo)準(zhǔn)化的試驗，建立了龐大的數(shù)據(jù)庫，并建議在全世界范圍內(nèi)推廣。其操作步驟如下：（1）材料準(zhǔn)備：取蠶豆種子在蒸餾水中浸泡24h，使種子充分吸脹，置于有濾紙的瓷盤中并蓋上濕紗布，在23±1℃的光照培養(yǎng)箱中培養(yǎng)l～2d，使其長出1.5～3.0cm長的初生根，此時切除初生根以保證側(cè)根的生長發(fā)育。（2）染毒處理：待側(cè)根露白后，隨機(jī)分組。每組選擇10粒種子用配制好的溶液染毒處理6h，取出后用蒸餾水沖洗，并移至蒸餾水中修復(fù)培養(yǎng)22～26h(兩個細(xì)胞周期)。（3）材料固定：取修復(fù)培養(yǎng)結(jié)束的蠶豆根尖0.5～1cm于卡諾氏固定液中固定12～14h。（4）材料解離：將固定后的根尖材料用0.1mol·L－1。的鹽酸在60℃（5）制片：將解離后的根尖材料用蒸餾水漂洗數(shù)次，取出置于載片上，從根冠起切取根尖1～1.5mm，用解剖針搗碎，加l～2滴染液，染色10～15min。蓋上蓋玻片輕壓。（6）鏡檢：在40×10倍顯微鏡下，凡小于主核1/4以下的，同主核有相同染色效果的，圓形、橢圓形或其他類似的形狀的染色物質(zhì)都可以算作微核。根據(jù)附表統(tǒng)計微核。（7）微核的定量表示：通常每一處理組至少觀察5張較好的片子，每張片子至少觀察1000個以上細(xì)胞。結(jié)果有兩種表示方法：①微核率‰=微核數(shù)觀察統(tǒng)計的總細(xì)胞數(shù)×1000‰②微核細(xì)胞率‰=具有微核的細(xì)胞數(shù)觀察統(tǒng)計的總細(xì)胞數(shù)×1000‰【實(shí)驗?zāi)康摹苛私馕⒑说陌l(fā)生機(jī)制和監(jiān)測方法；初步掌握實(shí)驗方案設(shè)計、數(shù)據(jù)整理及結(jié)果分析和論文撰寫等基本技能?！緦?shí)驗器材、材料和藥品】1．器材低速離心機(jī)、顯微鏡、光照培養(yǎng)箱、計數(shù)器、1ml注射器、青霉素小瓶、解剖器械、離心管、吸管、紗布等。2．試劑及其配制小牛血清（FCS）甲醇溶液Giemsa染液磷酸鹽緩沖液(PBS)（pH6.8）卡洛氏液70%乙醇1.0mol·L-1鹽酸1.0mol·L-1氫氧化鈉溶液1%醋酸洋紅誘變劑：物理或化學(xué)誘變劑（自選）3．材料小鼠、蠶豆【實(shí)驗方法和步驟】1．查閱資料，選題由教師提供課題，學(xué)生選定研究課題；或由學(xué)生查閱資料、根據(jù)細(xì)胞生物學(xué)理論課所學(xué)知識，就以上實(shí)驗?zāi)康囊孕〗M為單位，自行命題，報教師審批。選擇誘導(dǎo)微核的誘變劑和受體材料。2．查閱資料，靈活運(yùn)用所學(xué)知識和技能設(shè)計實(shí)驗根據(jù)選擇的課題，利用圖書館、網(wǎng)絡(luò)等資源廣泛查閱資料，討論，設(shè)計實(shí)驗方案包括確定誘導(dǎo)條件（如誘導(dǎo)劑的濃度、誘導(dǎo)時間等）、確定合適的微核檢測方法和步驟。將實(shí)驗方案交給并交教師審閱、修改、完善，經(jīng)教師審批后方可實(shí)施。3．實(shí)施并完成自行設(shè)計的實(shí)驗根據(jù)實(shí)驗設(shè)計技術(shù)路線，進(jìn)行實(shí)驗前的準(zhǔn)備工作，實(shí)驗用復(fù)雜溶液配置可在老師指導(dǎo)下配置，實(shí)驗過程中要嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，獨(dú)立完成。并做好實(shí)驗記錄，向教師報告實(shí)驗情況和結(jié)果，經(jīng)教師批準(zhǔn)后方可結(jié)束實(shí)驗。