臨床微生物實(shí)驗(yàn)室

質(zhì)量控制及質(zhì)量保證6/10/20241微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制

為保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、可靠性，臨床細(xì)菌室室內(nèi)質(zhì)控需要：

對(duì)人員進(jìn)行評(píng)估建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)、選擇和適的質(zhì)控物對(duì)標(biāo)本質(zhì)量進(jìn)行評(píng)價(jià)對(duì)試劑、培養(yǎng)基、儀器設(shè)備進(jìn)行監(jiān)測對(duì)檢測過程進(jìn)行監(jiān)控對(duì)檢測結(jié)果和結(jié)果的臨床應(yīng)用進(jìn)行評(píng)估6/10/20242臨床微生物實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制環(huán)節(jié)標(biāo)本合格判定培養(yǎng)基、試劑儀器設(shè)備結(jié)果報(bào)告標(biāo)本留取運(yùn)送分析前分析后分析中人員6/10/20243人員具備相關(guān)教育背景，每年接受專業(yè)技術(shù)及知識(shí)培訓(xùn)，熟悉微生物實(shí)驗(yàn)室操作規(guī)程、消毒滅菌及生物安全知識(shí)。..包括新員工培訓(xùn)、老員工的再培訓(xùn)以及員工工作能力評(píng)估人員能力人員培訓(xùn)人員資質(zhì)包括其對(duì)諸如分析前、中、后特定階段的專業(yè)經(jīng)驗(yàn)和熟練試驗(yàn)技術(shù)。并直接參與質(zhì)控工作6/10/20244分析前質(zhì)量控制6/10/20245分析前質(zhì)量控制建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)（SOP)

制定自檢測申請(qǐng)、標(biāo)本采集開始到發(fā)出檢測結(jié)果報(bào)告止的全過程的操作和管理程序微生物檢驗(yàn)標(biāo)本質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室應(yīng)給標(biāo)本采集者提供標(biāo)本采集和運(yùn)送的指導(dǎo)手冊(cè)實(shí)驗(yàn)室應(yīng)持續(xù)監(jiān)測標(biāo)本采集和運(yùn)送過程實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)標(biāo)本質(zhì)和量進(jìn)行評(píng)估不合格標(biāo)本拒收6/10/20246標(biāo)本采集和運(yùn)送標(biāo)本采集和運(yùn)送是細(xì)菌培養(yǎng)成功的最最重要的環(huán)節(jié)但由于標(biāo)本的采集和運(yùn)送常有護(hù)士或醫(yī)生或病人自己完成,所以也是最不容易控制的環(huán)節(jié)，造成的后果是:標(biāo)本污染、陽性率低6/10/20247標(biāo)本收集基本原則1）在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本2）采樣時(shí)嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作3）采樣后立即送檢4）棉拭子標(biāo)本宜用運(yùn)送培養(yǎng)基5）標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑。6）送檢標(biāo)本應(yīng)注明來源和檢驗(yàn)?zāi)康?/10/20248

標(biāo)本收集和運(yùn)送的質(zhì)量控制

向臨床提供標(biāo)本采集說明(sop)不同部位標(biāo)本的采集方法采集最佳時(shí)間、次數(shù)標(biāo)本采集量正確時(shí)間、部位、方法等

對(duì)收集和運(yùn)送標(biāo)本的容器控制

無菌、無防腐劑、足夠大、安全嚴(yán)密、不易破碎、選擇合適的運(yùn)送培養(yǎng)基

6/10/20249

標(biāo)本收集和運(yùn)送的質(zhì)量控制正確的運(yùn)送方式

標(biāo)本因冷藏及pH改變或在氧氣中暴露，可能減少很多種細(xì)菌的存活時(shí)間

腦膜炎球菌，淋病奈瑟菌，流感嗜血桿菌，肺炎鏈球菌，沙門菌，志賀氏菌，霍亂弧菌，空腸彎曲菌及厭養(yǎng)菌定量評(píng)價(jià)細(xì)菌數(shù)量的培養(yǎng)（尿標(biāo)本）（運(yùn)送時(shí)間）需進(jìn)行微生物學(xué)檢測的所有標(biāo)本，應(yīng)在收集后2小時(shí)內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室6/10/202410標(biāo)本運(yùn)送貯存溫度血血培養(yǎng)瓶室溫或37膿、腦脊液、胸水、心包積液、腹水、滑液關(guān)節(jié)鼻竇分泌物短時(shí)間內(nèi)運(yùn)送：標(biāo)本在帶帽的注射器內(nèi)保證厭氧條件長時(shí)間內(nèi)運(yùn)送：使用運(yùn)送培養(yǎng)基室溫避免冷藏支氣管肺泡液、痰、其他分泌物、便等立刻送檢2-3小時(shí)冷藏眼、耳、鼻、尿道、生殖道、直腸、傷口拭子用運(yùn)送培養(yǎng)基>4小時(shí)室溫微生物檢驗(yàn)標(biāo)本的運(yùn)送及貯存條件6/10/202411

有可靠的標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)方法6/10/202412

有可靠的標(biāo)本質(zhì)量評(píng)價(jià)方法6/10/202413不合格標(biāo)本拒收除非不能再采集的標(biāo)本，否則不予檢測；如果培養(yǎng)或檢測，要對(duì)結(jié)果進(jìn)行說明。6/10/202414樣本拒收標(biāo)準(zhǔn)1）樣本上無病患標(biāo)簽或病患標(biāo)簽與檢驗(yàn)申請(qǐng)單不符；2）樣本以不當(dāng)?shù)臏囟取⑦\(yùn)送培養(yǎng)基及容器運(yùn)送；3）樣本量不足、已被防腐劑固定或運(yùn)送時(shí)間過長；4）樣本外漏、容器破損及明顯受污染的標(biāo)本；5）樣本的檢驗(yàn)項(xiàng)目申請(qǐng)不適合進(jìn)行；6）特殊的難以再次獲得標(biāo)本，與臨床醫(yī)師聯(lián)系后再做相應(yīng)處理6/10/202415分析中質(zhì)量控制6/10/202416分析中質(zhì)量控制培養(yǎng)基主要試劑自制生化鑒定試劑染色液細(xì)菌、酵母菌鑒定系統(tǒng)藥物敏感試驗(yàn)儀器設(shè)備對(duì)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室室內(nèi)質(zhì)控的基本要求只能滿足分析中對(duì)主要培養(yǎng)基、試劑的質(zhì)控需要是試驗(yàn)室進(jìn)行相應(yīng)操作的應(yīng)做到或至少要做到6/10/202417培養(yǎng)基的質(zhì)量控制6/10/202418培養(yǎng)基的質(zhì)量控制購買有質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的商品培養(yǎng)基，保存制造商質(zhì)量控制性能合格的證明文件購買無質(zhì)量保證標(biāo)準(zhǔn)的商品或自制培養(yǎng)基，每批號(hào)產(chǎn)品檢測相應(yīng)的性能，如無菌試驗(yàn)、生長試驗(yàn)、生長抑制試驗(yàn)等6/10/202419最好使用標(biāo)準(zhǔn)菌ATCC美國典型菌株保藏中心

NCTC英國國家典型菌種保藏中心6/10/202420培養(yǎng)基質(zhì)量控制肉眼檢查培養(yǎng)基的顏色、均一性、厚度、氣泡等無菌試驗(yàn)<100塊隨機(jī)選取5%的量，>100塊則任意選取10塊平板或管裝培養(yǎng)基35℃，培養(yǎng)24小時(shí)，無菌生長為合格。生長試驗(yàn)生長抑制試驗(yàn)（必要時(shí)）6/10/202421常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗(yàn)6/10/202422常用培養(yǎng)基已知菌生長試驗(yàn)6/10/202423常用生化反應(yīng)培養(yǎng)基的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)

質(zhì)控要求：每批試劑使用前應(yīng)使用相應(yīng)陰性和陽性反應(yīng)（標(biāo)準(zhǔn)）菌株做質(zhì)控6/10/202424試劑質(zhì)量控制具體要求：每批次或使用當(dāng)天用相應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)菌株作陰、陽性對(duì)照控。氧化酶試驗(yàn)血漿凝固酶試驗(yàn)過氧化氫酶試驗(yàn)β-內(nèi)酰胺酶6/10/202425

過氧化氫酶（H2O2）陽性對(duì)照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對(duì)照：糞腸球菌ATCC29212區(qū)別鏈球菌屬/葡萄球菌屬，少見G-菌、G+菌6/10/202426血漿凝固酶試驗(yàn)

陽性對(duì)照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對(duì)照：表皮葡萄球菌ATCC12228區(qū)別金黃色葡萄球菌/凝固酶陰性葡萄球菌6/10/202427氧化酶陽性對(duì)照：綠膿假單胞菌ATCC27853陰性對(duì)照：大腸桿菌ATCC25922氧化酶試驗(yàn)G-菌區(qū)別，腸桿菌科/非發(fā)酵菌/弧菌科/少見G-菌等6/10/202428β內(nèi)酰胺酶陽性對(duì)照：金黃色葡萄球菌ATCC25923陰性對(duì)照：流感嗜血桿菌ATCC29247判斷苛養(yǎng)菌流感嗜血桿菌、卡他布蘭漢菌和淋病奈瑟菌對(duì)青霉素、阿莫西林和氨芐西林的敏感性。6/10/202429染色液質(zhì)控革蘭染色：G+:金黃色葡萄球菌ATCC25923G-:大腸埃希菌ATCC25922抗酸染色:陽性:Mube.trculosisATCC25177陰性:大腸埃希菌ATCC25922要求:每批試劑并每周6/10/202430照片革蘭氏抗酸6/10/202431設(shè)備質(zhì)量控制新設(shè)備的檢查，包括如安全性、配件、有無破損等新設(shè)備比對(duì)實(shí)驗(yàn)（與舊設(shè)備比對(duì)或與參考設(shè)備或方法比對(duì)）設(shè)備運(yùn)行記錄、維護(hù)保養(yǎng)記錄、維修記錄制定和執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程培訓(xùn)操作人員6/10/202432手工、半自動(dòng)、自動(dòng)鑒定系統(tǒng)使用廠家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)相應(yīng)試劑進(jìn)行質(zhì)控，每批試劑至少1次使用廠家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株做質(zhì)控，應(yīng)符合預(yù)期結(jié)果當(dāng)新儀器啟用時(shí)、新批號(hào)試劑啟用時(shí)、結(jié)果出現(xiàn)問題時(shí)都需要做質(zhì)控6/10/202433設(shè)備質(zhì)量控制天平、pH計(jì)、離心機(jī)、加樣槍、溫度計(jì)、生物安全柜、高壓鍋等需進(jìn)行校準(zhǔn)冷藏和培養(yǎng)等設(shè)備應(yīng)進(jìn)行溫度監(jiān)控并記錄6/10/202434藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制紙片擴(kuò)散法：每周至少1次；更換藥物或培養(yǎng)基時(shí)要做質(zhì)控。常見菌：大腸埃希菌ATCC25922,金黃色葡萄球菌25923,綠膿假單胞菌27853質(zhì)控手工法（稀釋法）：每周至少1次，最好每次試驗(yàn)做控。解釋：常規(guī)試驗(yàn)通常使用微量肉湯稀釋法，標(biāo)準(zhǔn)做法是每批試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)菌株與臨床分離株同時(shí)做。金黃色葡萄球菌29213,大腸埃希菌ATCC25922綠膿假單胞菌27853質(zhì)控6/10/202435藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制藥物敏感試驗(yàn)（儀器法）使用廠家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)菌株對(duì)相應(yīng)試劑進(jìn)行質(zhì)控?每批試劑至少1次?當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果異常、不穩(wěn)定，或缺少經(jīng)驗(yàn)的人員操作時(shí)，應(yīng)增加質(zhì)控的頻率。6/10/202436紙片擴(kuò)散法藥敏試驗(yàn)質(zhì)量控制條件及質(zhì)控菌株細(xì)菌類別質(zhì)控菌株試驗(yàn)條件腸桿菌科大腸埃希菌ATCC25922大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h銅綠假單胞及不動(dòng)桿菌屬銅綠假單胞ATCC27853大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）同上葡萄球菌屬金黃色葡萄球菌ATCC25923大腸埃希菌ATCC35218(用于β-內(nèi)酰胺類藥/β-內(nèi)酰胺酶抑制劑）培養(yǎng)基：Mueller-Hinton瓊脂接種液：生長法或直接菌落懸液孵育：35℃；空氣；16-18h如測試苯唑西林、甲氧西林時(shí)，孵育時(shí)間應(yīng)增至24h6/10/202437紙片擴(kuò)散法藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制連續(xù)質(zhì)控檢測1次/天共30天，獲30個(gè)檢測值如：1、≤3個(gè)值超出范圍，可行每周一次質(zhì)控2、≥4個(gè)值超出范圍，繼續(xù)做每天一次質(zhì)控3、每當(dāng)試劑、藥敏紙片、培養(yǎng)基改變時(shí)，應(yīng)重新行30天的質(zhì)控4、每周一次質(zhì)控時(shí)如某周出現(xiàn)一次失控，則應(yīng)連續(xù)做5次質(zhì)控。零失控時(shí)作每周一次質(zhì)控，否則行連續(xù)30次質(zhì)控6/10/202438藥物敏感試驗(yàn)質(zhì)量控制

藥敏紙片保存：藥敏紙片應(yīng)在有干燥劑的容器內(nèi)低溫（-20℃）保存。少量日常工作用紙片4℃保存。藥敏紙片從冰箱取出后，應(yīng)平衡至室溫，從而減少暖空氣與冷的紙片接觸產(chǎn)生的冷凝。紙片應(yīng)在有效期內(nèi)使用，過期應(yīng)該丟棄。6/10/202439藥物敏感試驗(yàn)的規(guī)則

目前，我國絕大多數(shù)臨床微生物實(shí)驗(yàn)室均參考美國國家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)(CLSI)出版的對(duì)各類細(xì)菌進(jìn)行常規(guī)藥敏試驗(yàn)和報(bào)告時(shí)的選藥指南6/10/202440CLSICLSI(clinicalandlaboratorystandardsinstitute)-美國臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化研究所-已被我國衛(wèi)生部指定為部頒標(biāo)準(zhǔn)-每年有新版6/10/202441

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)該認(rèn)真瀏覽CLSIM100內(nèi)容，將新的推薦內(nèi)容融入到實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)測試中，使之形成可行的操作規(guī)范M100每年更新一次M02,M07每三年更新一次6/10/2024422011年CLSI主要變化修正-腸桿菌科—頭孢唑啉折點(diǎn)-腸桿菌科—碳青霉烯類折點(diǎn)-銅綠—氨曲南和頭孢菌素折點(diǎn)（再評(píng)價(jià)）-附錄A—罕見AST結(jié)果的核實(shí)增加-表格—β溶血鏈球菌組可誘導(dǎo)克林霉素耐藥-厭氧菌表格-腸桿菌科細(xì)菌天然耐藥6/10/202443腸桿菌科-頭孢唑林折點(diǎn)的修訂

藥物紙片擴(kuò)散法（mm）MIC法（ug/ml)SIRSIR頭孢唑林2009>=1815-17<=14<=816>=32頭孢唑林2010---<=12>=4頭孢唑林2011*>=2320-22<=19<=24>=8*頭孢唑啉的新折點(diǎn)是建立在每8小時(shí)2克的給藥劑量上6/10/202444腸桿菌科-碳青霉烯類折點(diǎn)的修訂

藥物紙片擴(kuò)散法（mm）CLSIM100S-19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南--->=2320-22<=19厄他培南>=1916-18<=15>=2320-22<=19美洛培南>=1614-15<=13>=2320-22<=19亞胺培南>=1614-15<=13>=2320-22<=196/10/202445腸桿菌科-碳青霉烯類折點(diǎn)的修訂

藥物MIC法（ug/ml)CLSIM100S19(2009)CLSIM100S-21(2011)SIRSIR多利培南---<=12>=4厄他培南<=24>=8<=0.250.5>=1亞胺培南<=48>=16<=12>=4美洛培南<=48>=16<=12>=46/10/202446分析后質(zhì)量控制6/10/202447分析后質(zhì)量控制報(bào)告的核對(duì)與審核分級(jí)報(bào)告報(bào)告結(jié)果的保存加強(qiáng)與臨床的溝通交流6/10/202448報(bào)告的核對(duì)與審核

在發(fā)出報(bào)告前確保所有室內(nèi)質(zhì)控在控。一般檢驗(yàn)的審核：檢測項(xiàng)目與申請(qǐng)單內(nèi)容是否一致。病人基本信息、檢測項(xiàng)目與申請(qǐng)單內(nèi)容是否一致。細(xì)菌的分離和鑒定流程是否符合標(biāo)準(zhǔn)。鑒定的細(xì)菌和臨床標(biāo)本是否相符。細(xì)菌的耐藥情況是否合理？對(duì)于連續(xù)送檢的患者，結(jié)果是否有變化？6/10/202449報(bào)告的核對(duì)與審核

異常檢驗(yàn)結(jié)果的審核：如細(xì)菌鑒定結(jié)果與藥敏實(shí)驗(yàn)結(jié)果相矛盾，與臨床基本信息及診斷有矛盾，檢驗(yàn)結(jié)果之間關(guān)系不合理，此次結(jié)果與近期測定結(jié)果不相符，應(yīng)作如下分析：對(duì)檢驗(yàn)過程進(jìn)行審核，如標(biāo)本編號(hào)是否正確、結(jié)果錄入是否準(zhǔn)確。分析是否可能存在標(biāo)本采集、運(yùn)輸及保存中的問題，并及時(shí)與臨床聯(lián)系；分析是否可能存在與治療及病程進(jìn)展有關(guān)的問題，并及時(shí)與臨床聯(lián)系。如對(duì)以上情況無法確認(rèn)應(yīng)對(duì)標(biāo)本進(jìn)行必要的復(fù)檢，所有重復(fù)或特殊處理均應(yīng)在備注欄中標(biāo)明。6/10/20245