應(yīng)縣一中血紅蛋白的提取與分離

生物組劉陟3、基本單位：氨基酸蛋白質(zhì)小知識(shí)（回憶）氨基NH2COOH羧基HR—C—導(dǎo)入新課1、含量：占細(xì)胞干重的50％以上，是細(xì)胞中含量最多的有機(jī)化合物。2、組成元素：C、H、O、N（主要）4、分子結(jié)構(gòu)：氨基酸多肽蛋白質(zhì)肽鍵：—CO—NH—脫水縮合盤(pán)曲折疊5、相對(duì)分子質(zhì)量：高分子化合物導(dǎo)入新課學(xué)習(xí)目標(biāo)學(xué)習(xí)目標(biāo)：

1、了解色譜法分離生物大分子的基本原理和方法；（重、難點(diǎn)）2、了解電泳法分離生物大分子的基本原理和方法；1.分離生物大分子的基本思路是什么？（10組）2.蛋白質(zhì)的分離和提取的原理是什么？提取分離方法？（5組）3.凝膠色譜法的概念？凝膠色譜法的原理？（3組）4.緩沖溶液的概念、作用？（1組）5.電泳法的原理？（9組）6.聚丙稀酰胺凝膠電泳原理？SDS作用機(jī)理？（7組）自學(xué)引導(dǎo)展示任務(wù)1.分離生物大分子的基本思路是什么？（10組）學(xué)生展示1.分離生物大分子的基本思路：

選用一定的物理或化學(xué)的方法分離具有不同物理或化學(xué)性質(zhì)的生物大分子?；A(chǔ)知識(shí)2.蛋白質(zhì)的分離和提取的原理是什么？提取分離方法？（5組）學(xué)生展示3、提取分離方法凝膠色譜法凝膠電泳法基礎(chǔ)知識(shí)2.蛋白質(zhì)分離和提取的原理：

根據(jù)蛋白質(zhì)各種特性的差異，如分子的形狀和大小、所帶電荷的性質(zhì)和多少、溶解度、吸附性質(zhì)和對(duì)其他分子的親和力等等，可以用來(lái)分離不同種類的蛋白質(zhì)。3.凝膠色譜法的概念？凝膠色譜法的原理？（3組）學(xué)生展示2.凝膠：

大多數(shù)凝膠是由多糖類化合物（如葡聚糖或瓊脂糖）構(gòu)成的多孔小球體，內(nèi)部有許多貫穿的通道。

根據(jù)被分離的蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量的大小，利用具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)的凝膠的分子篩作用，來(lái)進(jìn)行分離。1.概念：（一）凝膠色譜法（分配色譜法）基礎(chǔ)知識(shí)3.原理：當(dāng)不同的蛋白質(zhì)通過(guò)凝膠時(shí)相對(duì)分子質(zhì)量較小相對(duì)分子質(zhì)量較大凝膠內(nèi)部的通道容易進(jìn)入無(wú)法進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道只能在凝膠外部移動(dòng)路程較長(zhǎng)移動(dòng)速度較慢路程較短移動(dòng)速度較快相對(duì)分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)因此得以分離。凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的原理直徑大小運(yùn)動(dòng)方式運(yùn)動(dòng)速度運(yùn)動(dòng)路程洗脫次序相對(duì)分子質(zhì)量大相對(duì)分子質(zhì)量小較大較小垂直向下的運(yùn)動(dòng)無(wú)規(guī)則的擴(kuò)散運(yùn)動(dòng)較快較慢較短先流出較長(zhǎng)后流出4.緩沖溶液的概念、作用？（1組）學(xué)生展示（二）緩沖溶液1.概念:

在一定的范圍內(nèi)，凡是能夠抵制外加少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿的影響使原來(lái)溶液pH值基本保持不變的混合溶液。

能夠抵制外界的酸和堿對(duì)溶液pH值的影響，維持pH基本不變。2.作用:基礎(chǔ)知識(shí)3.緩沖溶液的配制:

通常由1－2種緩沖劑溶解于水中配制而成。調(diào)節(jié)緩沖劑的使用比例就可以制得在不同PH范圍內(nèi)使用的緩沖液。

思考：說(shuō)出人體血液中緩沖液。NaH2PO4/Na2HPO4H2CO3/NaHCO3基礎(chǔ)知識(shí)4.提問(wèn)：在本課題中使用的緩沖液是:___________,其目的是:

利用緩沖液模擬細(xì)胞內(nèi)的PH環(huán)境，保證血紅蛋白的正常結(jié)構(gòu)和功能，便于觀察(紅色)和科學(xué)研究(活性)磷酸緩沖液基礎(chǔ)知識(shí)

（三）電泳：1.概念：帶電粒子在電場(chǎng)作用下發(fā)生遷移的過(guò)程?；A(chǔ)知識(shí)5.電泳法的原理？（9組）學(xué)生展示2.原理：

①許多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的PH下，這些基團(tuán)會(huì)帶上正電或負(fù)電。

②在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)。

③電泳利用了待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)的差異以及分子本身的大小，形狀的不同，使帶電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離?；A(chǔ)知識(shí)影響蛋白質(zhì)分子運(yùn)動(dòng)速度的因素

決定運(yùn)動(dòng)方向形成庫(kù)侖力形成阻力決定運(yùn)動(dòng)速率電荷性質(zhì)電荷量分子形狀分子大小√√√√√√√基礎(chǔ)知識(shí)

在電場(chǎng)的作用下，這些帶電分子會(huì)向著與其所帶電荷相反的電極移動(dòng)瓊脂糖凝膠電泳示意圖3.類型:瓊脂糖凝膠電泳、聚丙稀酰胺凝膠電泳。測(cè)定（）通常用十二烷基硫酸鈉（SDS）—聚丙稀酰胺凝膠電泳蛋白質(zhì)相對(duì)分子質(zhì)量基礎(chǔ)知識(shí)6.聚丙稀酰胺凝膠電泳原理？SDS作用機(jī)理？（7組）學(xué)生展示

蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取于它所帶凈電荷的多少以及分子的大小等因素。1.聚丙稀酰胺凝膠電泳原理：

SDS能使蛋白質(zhì)發(fā)生完全變性。解聚成單條肽鏈，因此測(cè)定的結(jié)果只是單條肽鏈的分子量。SDS能與各種蛋白質(zhì)形成蛋白質(zhì)—SDS復(fù)合物，SDS所帶負(fù)電荷的量大大超過(guò)了蛋白質(zhì)分子原有的電荷量。因而掩蓋了不同種蛋白質(zhì)間的電荷差別，使電泳遷移率完全取決于分子的大小。2.SDS作用機(jī)理:基礎(chǔ)知識(shí)血液血漿水分固體物質(zhì)：血漿蛋白、無(wú)機(jī)鹽、磷脂、葡萄糖等血細(xì)胞白細(xì)胞血小板紅細(xì)胞（最多）血紅蛋白（90％）兩個(gè)α－肽鏈兩個(gè)β一肽鏈四個(gè)亞鐵血紅素基團(tuán)思考：血液有哪些成分？1．凝膠色譜法是根據(jù)（）分離蛋白質(zhì)的有效方法。A.分子的大小B.相對(duì)分子質(zhì)量的大小C.帶電荷的多少D.溶解度2．緩沖液的作用是：在一定范圍內(nèi)，抵制外界的影響來(lái)維持（）基本不變。A.溫度B.pHC.滲透壓D.氧氣濃度3．電泳是指帶電粒子在電場(chǎng)的作用下向著與其所帶電荷（）的電極移動(dòng)。A.相同B.相反C.相對(duì)D.相向BBB目標(biāo)檢測(cè)4、用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)的過(guò)程中，關(guān)于蛋白質(zhì)的敘述，正確的是（）A相對(duì)分子質(zhì)量較小