第39講微生物的培養(yǎng)技術和應用1．（2023秋·江蘇揚州·高三揚州中學?？茧A段練習）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是（

）A．平板涂布時需在酒精燈火焰旁，打開皿蓋放在一邊，用滅菌后的涂布器進行涂布B．空白平板使用前需進行無菌鑒定，接種后未長出菌落的平板可以直接丟棄C．采用稀釋涂布平板計數(shù)時，統(tǒng)計結果往往多于原始菌液中微生物數(shù)量D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物2．（2022·湖北武漢·統(tǒng)考二模）在生活飲用水中如果大腸桿菌含量超標，會造成細菌性痢疾，嚴重時會造成脫水，甚至會危及生命?？衫帽碇械呐囵B(yǎng)基對生活飲用水中的大腸桿菌進行分離和計數(shù)，下列敘述正確的是（

）成分蛋白胨蔗糖乳糖K2HPO4顯色劑（伊紅美藍）瓊脂含量10.0g5.0g5.0g2.0g0.2g12.0g將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mLA．根據(jù)用途劃分該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基B．在配制培養(yǎng)基時應先調節(jié)pH值，再滅菌后倒平板C．使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要經(jīng)過消毒處理，以免污染環(huán)境D．為防止雜菌污染，還可以向培養(yǎng)基中添加適量抗生素3．（2023秋·全國·高三校聯(lián)考階段練習）塑料廢棄后難以降解，給人類的生存環(huán)境造成極大污染?？茖W家從嗜鹽細菌中找到一種具有塑料的理化特性且易被微生物降解的聚羥基脂肪酸酯(PHA)。科研人員從某鹽湖中取水，接種到特殊培養(yǎng)基上，培養(yǎng)一段時間后，挑選單菌落并分別擴大培養(yǎng)，再檢測菌的數(shù)目和PHA的產(chǎn)量，最終獲得目標菌株。下列相關敘述正確的是（

）A．實驗用到的特殊培養(yǎng)基中應含有較高的鹽分B．挑選的單菌落是由若干嗜鹽細菌繁殖而來的C．進行擴大培養(yǎng)時，培養(yǎng)基中需加入適量瓊脂D．實驗中，只有接種需要在酒精燈火焰旁進行4．（2023秋·湖北·高三校聯(lián)考階段練習）大豆富含蛋白質，但其含有的不被人吸收的棉籽糖和水蘇糖卻常使人出現(xiàn)脹氣等不適癥狀。幾千年來，中國人在豆子的轉化中展現(xiàn)著自己的智慧。湖北多地都有做醬豆的傳統(tǒng)，以大豆為主要原料，依次經(jīng)過選豆—浸泡—蒸豆—在蓬松的干稻草中自然發(fā)酵—調味裝壇。下列敘述錯誤的是（）A．脹氣可能是腸道微生物分解棉籽糖和水蘇糖產(chǎn)生氣體所致B．黃豆中的蛋白質在發(fā)酵中被分解成小分子肽和氨基酸，易被人體吸收C．干稻草可能提供了菌種，且起到吸水和保溫的作用D．醬豆制作中參與發(fā)酵的主要菌體的代謝類型最可能為異養(yǎng)厭氧型5．（2023春·全國·高二隨堂練習）下列有關微生物培養(yǎng)基的描述，正確的是（）A．微生物在液體培養(yǎng)基中生長時，可形成肉眼可見的菌落B．各種微生物培養(yǎng)基都含有的營養(yǎng)物質包括水、糖類、脂肪、蛋白質和無機鹽C．培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素D．制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的步驟依次是計算、稱量、溶化、倒平板、滅菌6．（2023春·全國·高二課堂例題）下圖表示研究人員在實驗室中使用的分批培養(yǎng)細菌的方法，下列敘述錯誤的是（）A．尿素分解菌可利用培養(yǎng)基中的尿素是因為能合成脲酶B．平板劃線操作中，灼燒接種環(huán)的次數(shù)等于在培養(yǎng)基上劃線區(qū)域數(shù)C．液體選擇培養(yǎng)基通常可用于選擇培養(yǎng)，增加目標菌種的濃度D．將三角瓶放在搖床上振蕩培養(yǎng)能提高溶氧量和養(yǎng)料的利用率7．（2023春·全國·高二課堂例題）下列有關土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)實驗描述錯誤的是（）A．土壤中的細菌，絕大多數(shù)分布在距離地表約3～8cm的土壤中，取樣時一般鏟去表層土B．測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用102、103、104倍數(shù)的稀釋液進行平板培養(yǎng)C．取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的信封在使用前都需要滅菌D．在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在火焰旁操作8．（2023秋·福建漳州·高三統(tǒng)考階段練習）纖維素分解菌是一種新型飼料添加劑，能夠提高粗纖維飼料的轉化率，為養(yǎng)殖業(yè)提供更多的飼料來源。研究人員從反芻動物糞便中分離篩選纖維素分解菌，步驟如下：

關于上述實驗的分析正確的是（

）A．可采用干熱滅菌法對培養(yǎng)基A、B進行滅菌B．培養(yǎng)基B中應加入纖維素作為唯一氮源C．④能通過涂布平板法培養(yǎng)獲得單菌落D．乙中透明圈與菌落的直徑比值越小說明細菌分解纖維素能力越強9．（2023秋·湖南·高三校聯(lián)考階段練習）為了分離和純化高效分解石油的細菌，科研人員利用被石油污染過的土壤進行下圖A所示的實驗。同學甲進行步驟④的操作，其中一個平板經(jīng)培養(yǎng)后的菌落分布如圖B所示。同學乙也按照同學甲的接種方法進行了步驟④的操作：將1mL樣品稀釋100倍，在5個培養(yǎng)基平板上分別接入0.1mL稀釋液，培養(yǎng)一段時間后，平板上長出的細菌菌落數(shù)分別為13、156、462、178和191。在接種前，隨機取若干滅菌后的空白平板先行培養(yǎng)了一段時間，無菌落產(chǎn)生。下列敘述正確的是（

）

A．乙同學計算得出每升樣品中的活菌數(shù)約為3.3×108個B．步驟③與步驟②中培養(yǎng)基成分的最大區(qū)別是步驟③的培養(yǎng)基中石油是唯一碳源C．步驟④甲同學出現(xiàn)圖B結果可能的操作失誤是樣品的稀釋程度太低導致D．步驟⑤后取樣測定石油含量的目的是篩選出能分解石油的細菌10．（2023·湖南永州·統(tǒng)考一模）一般情況下，一定濃度的抗生素會殺死細菌，但變異的細菌可能產(chǎn)生耐藥性。為探究某種抗生素對細菌的選擇作用，實驗人員在接種了金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)基中放置了含某種抗生素的圓形濾紙片和不含抗生素的圓形濾紙片，一段時間后測量濾紙片周圍抑菌圈的直徑。從抑菌圈邊緣的菌落上挑取細菌富集培養(yǎng)，然后重復上述步驟培養(yǎng)三代，結果如下表所示。下列有關敘述錯誤的是（）

培養(yǎng)代數(shù)平板各區(qū)域濾紙片周圍抑菌圈的直徑/cm①號區(qū)域②號區(qū)域③號區(qū)域④號區(qū)域第一代02.272.132.27第二代01.952.021.87第三代01.801.871.78A．一定濃度的抗生素會誘導細菌產(chǎn)生耐藥性的變異B．采用稀釋涂布平板法將金黃色葡萄球菌接種到固體培養(yǎng)基上C．平板中①號區(qū)域的濾紙片不含抗生素，起空白對照的作用D．隨培養(yǎng)代數(shù)增多，抑菌圈的直徑越小，說明細菌的耐藥性越強11．（2024·新疆·校聯(lián)考模擬預測）某研究小組設計了一個利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實驗，實驗流程如圖所示(清水淋洗時菌T不會流失)。下列分析錯誤的是（

）

A．在粉碎的秸稈中接種菌T是為了將秸稈中的纖維素大量分解B．淋洗液主要為酵母菌的生長繁殖提供碳源、能源等C．采用濕熱滅菌法對培養(yǎng)基進行滅菌時需控制壓力為100kPa，溫度為100℃D．與以糧食為原料發(fā)酵生產(chǎn)乙醇相比，圖中方式能節(jié)約糧食和提高能量利用率12．（2023秋·安徽·高三校聯(lián)考階段練習）三糖鐵（TS）培養(yǎng)基含有牛肉膏、蛋白陳、蔗糖、乳糖、微量葡萄糖、硫酸亞鐵、氯化鈉、酚紅、瓊脂等成分，可根據(jù)觀察單一細菌對三種糖的分解能力及是否產(chǎn)生硫化氫來鑒別細菌的種類。三糖鐵（TS）瓊脂試驗方法是：使用筆直的接種針挑取待測菌落，將接種針平穩(wěn)刺入三糖鐵固體斜面培養(yǎng)基內，然后沿原穿刺途徑慢慢抽出接種針，最后在斜面上進行“之”字劃線，36℃下培養(yǎng)18～24h觀察實驗結果。酚紅在酸性條件下顯黃色，在堿性條件下顯紅色。細菌產(chǎn)生的硫化氫與鐵鹽反應生成黑色沉淀。下列敘述正確的是（）A．穿刺或劃線的目的是將純培養(yǎng)物進行二次傳代培養(yǎng)，須嚴格控制交叉污染B．若培養(yǎng)基出現(xiàn)黑色沉淀，可推測該細菌不能分解牛肉膏、蛋白C．若細菌能分解乳糖和葡萄糖而產(chǎn)酸、產(chǎn)CO2，推測斜面為黃色、底層為紅色且有氣泡D．三糖鐵（TSI）培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基13．（2023秋·江西宜春·高三江西省豐城中學?？茧A段練習）某同學欲檢測消毒餐具中大腸桿菌的數(shù)量是否超標，進行如下操作：用蒸餾水分3~5次沖洗待檢餐具內表面，制成待測樣液備用；配制伊紅一亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基，將待測樣液接種于瓊脂培養(yǎng)基上。下列敘述錯誤的是（）A．為了確保檢測的準確性，沖洗待檢餐具的蒸餾水應該換成無菌水B．為便于觀察菌落的顏色，應將培養(yǎng)基的pH調至中性或弱堿性C．設置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作對照可檢驗該鑒別培養(yǎng)基的效果D．生長在伊紅一亞甲藍瓊脂培養(yǎng)基上的大腸桿菌菌落具有金屬光澤14．（2023秋·福建三明·高三三明一中?？茧A段練習）尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)肥料，但若不經(jīng)細菌的分解，就不能更好地被植物利用。生活在土壤中的微生物種類和數(shù)量繁多，某生物興趣小組完成了“土壤中分解尿素的細菌分離與計數(shù)”的實驗，實驗中用到的尿素培養(yǎng)基成分如下表所示，具體操作流程如圖所示。請分析回答。KH2PO4Na2HPO4MgSO4·7H2O葡萄糖尿素瓊脂1．4g2．1g0．2g10．0g1．0g15．0g將上述物質溶解后，用蒸餾水定容到1000mL。

(1)在實驗中，下列材料或用具需要滅菌的是，需要消毒的是（填序號）。①培養(yǎng)細菌用的培養(yǎng)基與培養(yǎng)皿②玻棒、試管、錐形瓶③實驗操作者的雙手④操作空間⑤接種用具(2)培養(yǎng)基中加入尿素的目的是，從作用分析這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基，本實驗還同時設立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行接種后培養(yǎng)，目的是。(3)除了本實驗的接種培養(yǎng)方法外，通常還可以采用方法能將單個微生物分散在固體培養(yǎng)基上，之后經(jīng)培養(yǎng)得到的單菌落一般是由單個微生物繁殖形成的；此實驗不選這個方法的原因是。(4)分解尿素的細菌生長所需的氮源和碳源分別來自培養(yǎng)基中的和，實驗需要振蕩的目的是。(5)該興趣小組在三種稀釋度下吸取0．1mL的菌液涂布平板，統(tǒng)計菌落數(shù)，得到下圖數(shù)據(jù)，則10g土樣中的活菌數(shù)約為個。

平板1平板2平板310432034235610519824327910623182115．（2023秋·四川綿陽·高三四川省綿陽南山中學校考階段練習）在農(nóng)業(yè)用地中發(fā)現(xiàn)一種廣泛使用的除草劑（含氮有機化合物）在土壤中不易降解，長期使用可污染土壤。為修復被該除草劑污染的土壤，可按下面程序選育能降解該除草劑的細菌（已知該除草劑在水中溶解度一定，含該除草劑的培養(yǎng)基不透明）。

(1)制備土壤浸出液時，為避免菌體濃度過高，需將浸出液進行處理。(2)要從富含（或長期使用）該除草劑的土壤中分離目的菌，上述培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基的特點是：固體培養(yǎng)基且（培養(yǎng)基成分應具備的主要特點）。若需要調節(jié)培養(yǎng)基pH，應該在各種成分都溶化后且分裝（填“前”或“后”）進行。對培養(yǎng)基進行滅菌，常采用的方法是。(3)圖B、C所示方法能夠純化目的菌株的原因是。如果要對活菌進行計數(shù)，則應采用的接種方法為。(4)經(jīng)培養(yǎng)后發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基上只出現(xiàn)少量帶有透明帶的菌落，大部分細菌在此培養(yǎng)基上不能生長的最可能原因是。培養(yǎng)基中也出現(xiàn)了極少量沒有透明帶的菌落，原因是這些微生物。1．（2023·廣東·統(tǒng)考高考真題）研究者擬從堆肥中取樣并篩選能高效降解羽毛、蹄角等廢棄物中角蛋白的嗜熱菌。根據(jù)堆肥溫度變化曲線（如圖）和選擇培養(yǎng)基篩選原理來判斷，下列最可能篩選到目標菌的條件組合是（

）

A．a(chǎn)點時取樣、尿素氮源培養(yǎng)基B．b點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基C．b點時取樣、蛋白胨氮源培養(yǎng)基D．c點時取樣、角蛋白氮源培養(yǎng)基2．（2022·遼寧·統(tǒng)考高考真題）為避免航天器在執(zhí)行載人航天任務時出現(xiàn)微生物污染風險，需要對航天器及潔凈的組裝車間進行環(huán)境微生物檢測。下列敘述錯誤的是（

）A．航天器上存在適應營養(yǎng)物質匱乏等環(huán)境的極端微生物B．細菌形成菌膜粘附于航天器設備表面產(chǎn)生生物腐蝕C．在組裝車間地面和設備表面采集環(huán)境微生物樣品D．采用平板劃線法等分離培養(yǎng)微生物，觀察菌落特征3．（2022·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列是某同學分離高產(chǎn)脲酶菌的實驗設計，不合理的是（

）A．選擇農(nóng)田或公園土壤作為樣品分離目的菌株B．在選擇培養(yǎng)基中需添加尿素作為唯一氮源C．適當稀釋樣品是為了在平板上形成單菌落D．可分解酚紅指示劑使其褪色的菌株是產(chǎn)脲酶菌4．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）高中生物學實驗中，下列實驗操作能達成所述目標的是（）A．用高濃度蔗糖溶液處理成熟植物細胞觀察質壁分離B．向泡菜壇蓋邊沿的水槽中注滿水形成內部無菌環(huán)境C．在目標個體集中分布的區(qū)域劃定樣方調查種群密度D．對外植體進行消毒以杜絕接種過程中的微生物污染5．（2023·浙江·統(tǒng)考高考真題）某同學想從泡菜汁中篩選耐高鹽乳酸菌，進行了如下實驗：取泡菜汁樣品，劃線接種于一定NaCl濃度梯度的培養(yǎng)基，經(jīng)培養(yǎng)得到了單菌落。下列敘述正確的是（

）A．培養(yǎng)基pH需偏堿性 B．泡菜汁需多次稀釋后才能劃線接種C．需在無氧條件下培養(yǎng) D．分離得到的微生物均為乳酸菌6．（2022·天津·高考真題）下圖所示實驗方法的應用或原理，不恰當?shù)氖牵?/p>

）實驗方法應用原理A．分離綠葉中的色素B．不同色素在層析液中溶解度不同C．細菌計數(shù)D．逐步稀釋A．A B．B C．C D．D7．（2022·海南·統(tǒng)考高考真題）為探究校內植物園土壤中的細菌種類，某興趣小組采集園內土壤樣本并開展相關實驗。下列有關敘述錯誤的是（

）A．采樣時應隨機采集植物園中多個不同地點的土壤樣本B．培養(yǎng)細菌時，可選用牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基C．土壤溶液稀釋倍數(shù)越低，越容易得到單菌落D．鑒定細菌種類時，除形態(tài)學鑒定外，還可借助生物化學的方法8．（2023·遼寧·統(tǒng)考高考真題）細菌氣溶膠是由懸浮于大氣或附著于顆粒物表面的細菌形成的。利用空氣微生物采樣器對某市人員密集型公共場所采樣并檢測細菌氣溶膠的濃度（菌落數(shù)/m3）。下列敘述錯誤的是（

）A．采樣前需對空氣微生物采樣器進行無菌處理B．細菌氣溶膠樣品恒溫培養(yǎng)時需將平板倒置C．同一稀釋度下至少對3個平板計數(shù)并取平均值D．稀釋涂布平板法檢測的細菌氣溶膠濃度比實際值高9．（2023·江蘇·統(tǒng)考高考真題）下列關于細菌和酵母菌實驗的敘述正確的是（）A．通常酵母菌培養(yǎng)基比細菌培養(yǎng)基有更高的碳氮比B．通常細菌的生長速度比酵母菌快，菌落比酵母菌落大C．通常細菌培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌，酵母菌培養(yǎng)基用過濾除菌法除菌D．血細胞計數(shù)板既可用于酵母菌的數(shù)量測定，也可用于細菌的數(shù)量測定10．（2023·山東·高考真題）平板接種常用在微生物培養(yǎng)中。下列說法正確的是（

）A．不含氮源的平板不能用于微生物培養(yǎng)B．平板涂布時涂布器使用前必須進行消毒C．接種后未長出菌落的培養(yǎng)基可以直接丟棄D．利用以尿素為唯一氮源的平板能分離出合成脲酶的微生物11．（2023·北京·統(tǒng)考高考真題）自然界中不同微生物之間存在著復雜的相互作用。有些細菌具有溶菌特性，能夠破壞其他細菌的結構使細胞內容物釋出?？茖W家試圖從某湖泊水樣中分離出有溶菌特性的細菌。(1)用于分離細菌的固體培養(yǎng)基包含水、葡萄糖、蛋白胨和瓊脂等成分，其中蛋白胨主要為細菌提供和維生素等。(2)A菌通常被用做溶菌對象。研究者將含有一定濃度A菌的少量培養(yǎng)基傾倒在固體培養(yǎng)平板上，凝固形成薄層。培養(yǎng)一段時間后，薄層變渾濁（如圖），表明。(3)為分離出具有溶菌作用的細菌，需要合適的菌落密度，因此應將含菌量較高的湖泊水樣后，依次分別涂布于不同的渾濁薄層上。培養(yǎng)一段時間后，能溶解A菌的菌落周圍會出現(xiàn)。采用這種方法，研究者分離、培養(yǎng)并鑒定出P菌。(4)為探究P菌溶解破壞A菌的方式，請?zhí)岢鲆粋€假設，該假設能用以下材料和設備加以驗證（主要實驗材料和設備：P菌、A菌、培養(yǎng)基、圓形濾紙小片、離心機和細菌培養(yǎng)箱）。12．（2022·湖南·高考真題）黃酒源于中國，與啤酒、葡萄酒并稱世界三大發(fā)酵酒。發(fā)酵酒的釀造過程中除了產(chǎn)生乙醇外，也產(chǎn)生不利于人體健康的氨基甲酸乙酯（EC）。EC主要由尿素與乙醇反應形成，各國對酒中的EC含量有嚴格的限量標準?；卮鹣铝袉栴}:(1)某黃酒釀制工藝流程如圖所示，圖中加入的菌種a是，工藝b是（填“消毒”或“滅菌”），采用工藝b的目的是。(2)以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入指示劑，根據(jù)顏色變化，可以初步鑒定分解尿素的細菌。尿素分解菌產(chǎn)生的脲酶可用于降解黃酒中的尿素，脲酶固定化后穩(wěn)定性和利用效率提高，固