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定性方法俞建君常州工程職業(yè)技術(shù)學院目的:確定試樣的組成,即確定每個色譜峰各代表何種組分依據(jù):在一定固定相和一定操作條件下,每種物質(zhì)都有各自確定的保留值或確定的色譜數(shù)據(jù),并且不受其它組分的影響。也就是說,保留值具有特征性。注意:但在同一色譜條件下,不同物質(zhì)也可能具有相似或相同的保留值,即保留值并非是專屬的。所以:對于一個完全未知的混合樣品單靠色譜法定性比較困難,往往需要采用多種方法綜合解決,例如與質(zhì)譜儀、紅外光譜儀等聯(lián)用。定性分析利用已知標準樣品定性利用檢測器的選擇性定性利用紫外檢測器全波長掃描功能定性此外,利用二極管陣列檢測器得到的包括有色譜信號、時間、波長的三維色譜光譜圖,其定性結(jié)果與傳統(tǒng)方法相比具有更大的優(yōu)勢。IIIIIIHPLC定性方法檢測系統(tǒng)利用保留時間定性利用已知標準樣品定性由于每一種化合物在特定的色譜條件下(流動相組成、色譜柱、柱溫等相同),其保留值具有特征性,因此可以利用保留值進行定性。檢測系統(tǒng)加入標準物增加峰高的方法利用已知標準樣品定性在得到未知樣品的色譜圖后,在未知樣品中加入一定量的已知標準物質(zhì),然后在同樣的色譜條件下,作已知標準物質(zhì)的未知樣品的色譜圖。對比這兩張色譜圖,哪個峰增高了,則說明該峰就是加入的已知純物質(zhì)的色譜峰。檢測系統(tǒng)用相對保留值定性利用已知標準樣品定性相對保留值是在相同色譜操作條件下,組分與參比組分的調(diào)整保留值之比。相對保留值只受柱溫和固定相性質(zhì)的影響,而柱長、固定相的填充情況均不影響相對保留值(??_(??,??))的大小。所以在柱溫和固定相一定時,相對保留值為一定值,用它來定性可得到較可靠的結(jié)果。檢測系統(tǒng)同一種檢測器對不同種類的化合物的響應(yīng)值是不同的,而不同的檢測器對同一種化合物的響應(yīng)也是不同的。所以當某一被測化合物同時被兩種或兩種以上檢測器檢測時,兩檢測器或幾個檢測器對被測化合物檢測靈敏度比值是與被測化合物的性質(zhì)密切相關(guān)的,可以用來對被測化合物進行定性分析,這就是雙檢測器定性體系的基本原理。利用檢測器的選擇性定性在液相色譜中最常用于定性鑒定工作的雙檢測體系是紫外檢測器(UV)和熒光檢測器(FL)。下圖是UV和FL串聯(lián)檢測食物中有毒胺類化合物的色譜圖。檢測系統(tǒng)紫外檢測器是液相色譜中使用最廣泛的一種檢測器。全波長掃描紫外檢測器可以根據(jù)被檢測化合物的紫外光譜圖提供一些有價值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是:在色譜圖上某組分的色譜峰出現(xiàn)極大值,即最高濃度時,通過停泵等手段,使組分在檢測池中滯留,然后對檢測池中的組分進行全波長掃描,得到該組分的紫外-可見光譜圖;再取可能的標準樣品按同樣方法處理。對比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標準樣品是否相同。對于某些有特殊紫外光譜圖的化合物,也可以通過對照標準譜圖的方法來識別化合物。利用已知標準樣品定性二極管陣列檢測器就相當于n個紫外檢測器并聯(lián),它既能得到化合物的

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