水污染控制技術(shù)

醫(yī)療機(jī)構(gòu)水污染排放標(biāo)準(zhǔn)——檢驗方法5主講教師：成文文檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.1儀器和設(shè)備E.1.1電爐。E.1.2恒溫水浴箱。E.1.3高壓蒸汽滅菌器。E.1.4濾菌器。E.1.5離心機(jī)。E.1.6恒溫培養(yǎng)箱。E.1.7乙酸纖維膜：孔徑為0.3～0.7μｍE.1.8玻璃漏斗G2：孔徑為10～15μｍE.1.9玻璃漏斗G4：孔徑為3～4μｍE.1.10酒精燈檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.2培養(yǎng)基和試劑E.2.1改良羅氏培養(yǎng)基E.2.1.1成分磷酸二氫鉀2.4ｇ硫酸鎂0.24ｇ枸櫞酸鎂0.6ｇ谷氨酸鈉1.2ｇ甘油12ｍｌ淀粉30ｇ蒸餾水600ｍｌ雞蛋液（包括蛋清和蛋黃）1000ml20％孔雀綠20ｍｌ檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.2.1.2制法將磷酸二氫鉀、硫酸鎂、枸櫞酸鈉、谷氨酸鈉、甘油及蒸餾水混合于燒杯內(nèi)，放在沸水浴中加熱溶解。加入淀粉繼續(xù)加熱1ｈ，搖動使其溶解，待冷卻至50℃加雞蛋液及孔雀綠，溶解，混勻。制成斜面，保持溫度90℃，滅菌1ｈ。檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.2.2小川氏培養(yǎng)基E.2.2.1成分甲液：無水磷酸二氫鉀1ｇ味精1ｇ蒸餾水100ｍｌ乙液：全蛋液200ｍｌ甘油6ｍｌ2％孔雀綠6ｍｌ檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.2.2.2制法甲、乙兩液混合分裝試管內(nèi)。制成斜面，保持溫度90℃滅菌1ｈ。E.2.3ｐＨ為7.0的磷酸鹽緩沖液（1mol/L）。E.2.410％吐溫（Tween）80水溶液加等量30％過氧化氫溶液。E.2.55％硫酸溶液。檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.3檢驗程序結(jié)核桿菌檢驗程序見圖檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.4操作步驟E.4.1集菌污水集菌可采用過濾離心法或直接離心法，污泥集菌可采用過濾離心法。E.4.1.1污水樣品過濾離心法：用經(jīng)煮沸消毒的乙酸纖維濾膜（孔徑0.3～0.7μｍ）抽濾，安裝嚴(yán)密后，取污水樣500ｍｌ抽濾，根據(jù)懸浮物的多少，一份水樣需更換數(shù)張濾膜，將同一份水樣濾膜集中于小燒杯內(nèi)。根據(jù)濾膜的多少用100～200ｍｌ4％硫酸溶液反復(fù)沖洗，靜置30min后，收集洗液于離心管中，3000r／min，離心30min，棄去上清液，沉淀物中加1ml滅菌生理鹽水混合均勻后，供接種用。檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)直接離心法：水樣500ｍｌ，分裝于50ｍｌ或200ｍｌ滅菌離心管中，3000r／min，離心30min。同一份水樣的沉淀物集中于試管內(nèi)，加等量4％硫酸處理30min，供接種用。如體積過大，再次離心濃縮后接種。檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.4.1.2污泥樣品過濾離心法：取污泥10ｇ加100ｍｌ蒸餾水沖洗過濾（濾紙漏斗），再經(jīng)玻璃漏斗G2（孔徑10～15μｍ）和G4（孔徑3～4μｍ）抽濾，最后經(jīng)濾膜（孔徑0.45～0.7μｍ）抽濾。取下濾膜，用4％硫酸3ｍｌ，充分振搖沖洗30ｍｉｎ。E.4.2接種污水的集菌液：全部接種于改良羅氏培養(yǎng)基或小川氏培養(yǎng)基培養(yǎng)管內(nèi)斜面上，每支培養(yǎng)管接種0.1ｍｌ。污泥的集菌液：吸取兩個0.1ｍｌ，分別接種于改良羅氏培養(yǎng)基或小川氏培養(yǎng)基培養(yǎng)管內(nèi)斜面上。檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.4.3培養(yǎng)已接種的培養(yǎng)基置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。培養(yǎng)2周后開始觀察結(jié)果，每周觀察2次。一般需要培養(yǎng)8周。分離菌株：在羅氏培養(yǎng)基上呈淡黃色或無色的粗糙型菌落，作抗酸染色，陽性者作分離傳代。分離傳代菌株如生長速度在兩周以上，則需作菌型鑒定；應(yīng)用耐熱觸酶試驗和傳代培養(yǎng)于28℃培養(yǎng)2～4周，觀察是否生長，用此方法即可進(jìn)行初步鑒定。檢驗方法5課程：水污染控制技術(shù)E.4.4致病力試驗?zāi)蜔嵊|酶反應(yīng)陰性，28℃不生長之菌落為可疑結(jié)核桿菌。于小白鼠尾靜脈接種1mg菌量（5mg／ml菌液，每只動物接種0.2ml），死亡時觀察病變或8周后解剖臟器發(fā)現(xiàn)典型結(jié)核病變者可確認(rèn)為檢出結(jié)核桿菌。其耐熱觸酶試驗方法如下：取菌落3～5mg分散于0.5ml磷酸鹽緩沖液中，置68℃水浴中20min后取出．冷卻后加吐溫80h和過氧化氫溶液混合液0.5ml。發(fā)生氣泡為陽性，30min不產(chǎn)生氣泡者為陰性。人型、牛型結(jié)核桿菌，胃分枝桿菌和海魚分枝桿菌為陰性，其他非典型抗酸菌和非致病抗酸菌為陽性。人型、牛型結(jié)核桿菌在