微生物實(shí)驗(yàn)室人員培訓(xùn)標(biāo)準(zhǔn)試題及答案一、單項(xiàng)選擇題（每題2分，共20分）1.以下哪類微生物屬于原核生物？（）A.酵母菌B.霉菌C.大腸桿菌D.噬菌體答案：C2.高壓蒸汽滅菌時(shí)，若要達(dá)到徹底殺滅細(xì)菌芽孢的效果，常規(guī)滅菌條件應(yīng)為（）A.100℃，30分鐘B.115℃，15分鐘C.121℃，1520分鐘D.134℃，3分鐘答案：C3.生物安全柜操作時(shí)，手臂進(jìn)出安全柜的正確方式是（）A.快速垂直插入，避免氣流擾動(dòng)B.緩慢水平移動(dòng)，保持與前窗平行C.從側(cè)面斜向插入，減少遮擋D.操作完成后立即抽出，無(wú)需等待答案：B4.實(shí)驗(yàn)室常用的LB培養(yǎng)基屬于（）A.基礎(chǔ)培養(yǎng)基B.選擇培養(yǎng)基C.鑒別培養(yǎng)基D.營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基答案：A5.進(jìn)行細(xì)菌革蘭氏染色時(shí)，關(guān)鍵步驟是（）A.結(jié)晶紫初染B.碘液媒染C.95%乙醇脫色D.沙黃復(fù)染答案：C6.實(shí)驗(yàn)室菌種保藏時(shí)，80℃超低溫冰箱保存的常用保護(hù)劑是（）A.生理鹽水B.20%甘油C.75%乙醇D.10%甲醛答案：B7.以下哪種操作可能導(dǎo)致微生物實(shí)驗(yàn)結(jié)果污染？（）A.接種環(huán)灼燒后自然冷卻3秒B.打開培養(yǎng)皿時(shí)，蓋扣于操作臺(tái)C.移液時(shí)吸頭接觸試管內(nèi)壁D.超凈工作臺(tái)使用前紫外照射30分鐘答案：C8.微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全等級(jí)分為4級(jí)，其中BSL3實(shí)驗(yàn)室主要處理（）A.無(wú)或極低個(gè)體/群體危險(xiǎn)的微生物B.中等個(gè)體危險(xiǎn)、低群體危險(xiǎn)的微生物C.高個(gè)體危險(xiǎn)、低群體危險(xiǎn)的微生物D.高個(gè)體/群體危險(xiǎn)的微生物答案：C9.配制培養(yǎng)基時(shí)，若需調(diào)節(jié)pH至7.2，應(yīng)使用的緩沖體系是（）A.醋酸醋酸鈉B.磷酸二氫鉀磷酸氫二鉀C.檸檬酸檸檬酸鈉D.硼酸硼砂答案：B10.實(shí)驗(yàn)室廢棄的含病原微生物的培養(yǎng)物，正確的處理方式是（）A.直接倒入普通垃圾桶B.高壓滅菌后按醫(yī)療廢物處理C.用75%乙醇浸泡30分鐘后丟棄D.密封后放入冰箱暫存答案：B二、多項(xiàng)選擇題（每題3分，共15分，少選、錯(cuò)選均不得分）1.微生物實(shí)驗(yàn)室無(wú)菌操作的核心要求包括（）A.操作區(qū)域需經(jīng)消毒（如紫外、酒精擦拭）B.實(shí)驗(yàn)人員需穿戴滅菌工作服、手套C.開口的培養(yǎng)容器需盡量遠(yuǎn)離氣流擾動(dòng)區(qū)域D.操作過程中禁止交談或咳嗽答案：ABCD2.以下屬于生物安全防護(hù)裝備的有（）A.一次性乳膠手套B.N95口罩C.護(hù)目鏡D.防化服答案：ABCD3.影響微生物生長(zhǎng)的環(huán)境因素包括（）A.溫度B.氧氣濃度C.pH值D.滲透壓答案：ABCD4.實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制的關(guān)鍵環(huán)節(jié)包括（）A.培養(yǎng)基的無(wú)菌試驗(yàn)B.標(biāo)準(zhǔn)菌株的傳代記錄C.儀器設(shè)備的校準(zhǔn)（如培養(yǎng)箱溫度、移液器）D.實(shí)驗(yàn)人員的操作培訓(xùn)考核答案：ABCD5.以下關(guān)于菌種管理的正確做法是（）A.菌種保存需雙人雙鎖，建立進(jìn)出記錄B.高致病性菌種需向省級(jí)衛(wèi)生行政部門備案C.傳代次數(shù)不超過5代（從標(biāo)準(zhǔn)菌種開始）D.廢棄菌種需經(jīng)滅活處理后按醫(yī)療廢物處置答案：ABCD三、判斷題（每題2分，共20分，正確填“√”，錯(cuò)誤填“×”）1.超凈工作臺(tái)的氣流方向是垂直向下，因此操作時(shí)手臂可高于工作臺(tái)面。（）答案：×2.革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁含大量肽聚糖，故脫色后仍保留結(jié)晶紫顏色。（）答案：√3.實(shí)驗(yàn)室生物安全柜的高效過濾器（HEPA）需每年檢測(cè)一次，若破損需立即更換。（）答案：√4.配制生理鹽水時(shí)，需稱取0.9gNaCl溶于100mL蒸餾水中，無(wú)需滅菌。（）答案：×5.進(jìn)行活菌計(jì)數(shù)時(shí)，若平板上菌落數(shù)超過300個(gè)，需稀釋后重新接種。（）答案：√6.實(shí)驗(yàn)室發(fā)生離心管破裂時(shí)，應(yīng)立即用紙巾擦拭，無(wú)需佩戴手套。（）答案：×7.支原體因無(wú)細(xì)胞壁，需在含血清的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)。（）答案：√8.實(shí)驗(yàn)室冰箱可同時(shí)存放樣品、試劑和個(gè)人物品。（）答案：×9.微生物實(shí)驗(yàn)記錄需實(shí)時(shí)填寫，若需修改應(yīng)劃改并簽名，禁止涂抹。（）答案：√10.結(jié)核分枝桿菌屬于BSL3級(jí)微生物，操作時(shí)需在生物安全柜中進(jìn)行。（）答案：√四、填空題（每空2分，共20分）1.微生物實(shí)驗(yàn)室常用的消毒方法包括______（如75%乙醇）、______（如紫外燈）和______（如高壓蒸汽）。答案：化學(xué)消毒；物理消毒（紫外線）；濕熱滅菌2.生物安全二級(jí)實(shí)驗(yàn)室（BSL2）的基本要求包括：實(shí)驗(yàn)室入口需設(shè)______，操作區(qū)與辦公區(qū)______，配備______或______。答案：生物危害標(biāo)識(shí)；分隔；生物安全柜；超凈工作臺(tái)3.細(xì)菌的基本形態(tài)包括______、______和______。答案：球菌；桿菌；螺旋菌4.實(shí)驗(yàn)室移液器的校準(zhǔn)周期通常為______，校準(zhǔn)項(xiàng)目包括______和______。答案：6個(gè)月；準(zhǔn)確性；precision（精密度）五、簡(jiǎn)答題（每題5分，共25分）1.簡(jiǎn)述無(wú)菌操作的核心原則及具體操作要點(diǎn)。答案：核心原則：防止實(shí)驗(yàn)材料被環(huán)境中的微生物污染，同時(shí)避免實(shí)驗(yàn)微生物擴(kuò)散至環(huán)境。具體要點(diǎn)：①操作前用75%乙醇擦拭臺(tái)面，紫外照射30分鐘；②實(shí)驗(yàn)人員穿戴滅菌服、手套，手消毒；③操作時(shí)保持培養(yǎng)容器開口朝上，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露；④接種環(huán)/針使用前后需灼燒滅菌，冷卻后再接觸菌種；⑤操作過程中避免交談、咳嗽，減少氣流擾動(dòng)。2.列舉3種常見的微生物檢測(cè)方法，并說(shuō)明其適用場(chǎng)景。答案：①平板計(jì)數(shù)法：用于檢測(cè)樣品中活菌數(shù)量（如食品、水樣的微生物限度檢測(cè)）；②生化鑒定法：通過代謝產(chǎn)物（如糖發(fā)酵、酶活性）鑒別細(xì)菌種類（如腸桿菌科鑒定）；③PCR檢測(cè)法：快速檢測(cè)特定微生物核酸（如病原微生物的定性/定量檢測(cè)）。3.簡(jiǎn)述培養(yǎng)基配制的關(guān)鍵步驟及質(zhì)量控制要求。答案：步驟：①稱量：按配方準(zhǔn)確稱取成分；②溶解：加熱溶解，調(diào)節(jié)pH（誤差±0.2）；③分裝：根據(jù)需求分裝入試管/三角瓶；④滅菌：高壓蒸汽滅菌（121℃，1520分鐘）；⑤質(zhì)量檢查：無(wú)菌試驗(yàn)（37℃培養(yǎng)24小時(shí)無(wú)雜菌）、性能測(cè)試（接種標(biāo)準(zhǔn)菌株觀察生長(zhǎng)情況）。4.生物安全三級(jí)實(shí)驗(yàn)室（BSL3）的防護(hù)要求包括哪些？答案：①建筑要求：獨(dú)立區(qū)域，負(fù)壓（20Pa至50Pa），雙門氣鎖；②設(shè)施要求：Ⅱ級(jí)或Ⅲ級(jí)生物安全柜，自動(dòng)閉門，高效過濾器（HEPA）排風(fēng)；③個(gè)人防護(hù)：穿戴正壓防護(hù)服或全封閉呼吸防護(hù)裝備；④管理要求：嚴(yán)格準(zhǔn)入制度，操作記錄可追溯，廢棄物需雙滅活（高壓+化學(xué)處理）。5.實(shí)驗(yàn)室發(fā)生樣本泄漏（如含結(jié)核分枝桿菌的試管破裂）時(shí)，應(yīng)如何處理？答案：①立即停止操作，標(biāo)記污染區(qū)域，限制人員進(jìn)入；②佩戴N95口罩、手套、護(hù)目鏡，穿防化服；③用吸水紙覆蓋泄漏物，倒上10%次氯酸鈉溶液（含氯量≥5000mg/L），靜置30分鐘；④用鑷子移除污染材料，放入雙層醫(yī)療廢物袋，高壓滅菌后處理；⑤用75%乙醇擦拭臺(tái)面，紫外照射60分鐘；⑥記錄事件經(jīng)過、處理措施及人員暴露情況，上報(bào)實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。六、案例分析題（10分）某實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行食品中金黃色葡萄球菌檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)以下問題：空白對(duì)照平板（未接種樣品）長(zhǎng)出大量菌落；陽(yáng)性對(duì)照（已知含金黃色葡萄球菌的樣本）未出現(xiàn)典型菌落。請(qǐng)分析可能的原因及解決措施。答案：可能原因：①空白對(duì)照污染：培養(yǎng)基滅菌不徹底（如高壓滅菌時(shí)間不足）、操作過程中無(wú)菌操作不規(guī)范（如超凈工作臺(tái)未提前紫外消毒、接種時(shí)培養(yǎng)皿暴露時(shí)間過長(zhǎng)）；②陽(yáng)性對(duì)照無(wú)典型菌落：標(biāo)準(zhǔn)菌株保存不當(dāng)（如凍存管破裂、復(fù)蘇時(shí)操作錯(cuò)誤）、培養(yǎng)基選擇錯(cuò)誤（如未使用BairdParker選擇性培養(yǎng)基）、培養(yǎng)條件不符（如溫度低于37℃、時(shí)間不足48小時(shí)）。解決措施：①針對(duì)空白對(duì)照污染：重新配制培養(yǎng)基并嚴(yán)格滅菌（121℃，20分鐘），操作前檢查超凈