病原微生物生物安全級別試題及答案一、單項選擇題（每題2分，共30分）1.依據(jù)我國《病原微生物實驗室生物安全管理條例》，病原微生物的分類主要基于以下哪項指標？A.實驗室操作難度B.病原體的傳染性及感染后對個體或群體的危害程度C.病原體的培養(yǎng)條件D.病原體的遺傳穩(wěn)定性2.以下哪種微生物屬于生物安全一級（BSL1）實驗室操作范圍？A.結(jié)核分枝桿菌（人型）B.大腸埃希菌（非致病性K12株）C.乙型肝炎病毒D.埃博拉病毒3.生物安全二級（BSL2）實驗室的核心操作要求不包括：A.操作可能產(chǎn)生氣溶膠時需在生物安全柜內(nèi)進行B.實驗室入口處需張貼生物危害標識C.實驗人員需穿戴防護服、手套和護目鏡D.實驗室必須保持持續(xù)負壓4.對于生物安全三級（BSL3）實驗室，以下哪項設(shè)施要求是錯誤的？A.實驗室應設(shè)置獨立的送排風系統(tǒng)，確保氣流從清潔區(qū)流向污染區(qū)B.入口處需設(shè)置緩沖間（氣鎖），并配備高壓蒸汽滅菌器C.實驗臺面應能耐受次氯酸鈉（有效氯≥5000mg/L）的腐蝕D.可使用普通民用空調(diào)調(diào)節(jié)溫濕度5.生物安全四級（BSL4）實驗室的最高防護要求體現(xiàn)在：A.實驗人員需穿戴正壓供氣式防護服B.僅需對實驗廢棄物進行化學消毒C.實驗室無需設(shè)置獨立的污水處理系統(tǒng)D.操作非感染性材料時可簡化防護6.以下哪種操作在BSL2實驗室中無需強制使用生物安全柜？A.離心未封閉的臨床樣本管B.用移液管轉(zhuǎn)移10mL細菌培養(yǎng)液C.對組織樣本進行勻漿處理D.用接種環(huán)挑取固體培養(yǎng)基上的菌落7.根據(jù)WHO《實驗室生物風險管理手冊》，確定微生物生物安全級別的次要因素是：A.當?shù)厥欠裼性摬≡w的流行史B.病原體的傳播途徑（如呼吸道、血液）C.現(xiàn)有預防措施（如疫苗）的有效性D.感染后的死亡率8.以下哪種病原體需在BSL3實驗室中進行操作？A.麻疹病毒（減毒活疫苗株）B.霍亂弧菌（O1群）C.金黃色葡萄球菌（甲氧西林敏感株）D.伯氏疏螺旋體（萊姆病病原體）9.BSL3實驗室的“雙門進入系統(tǒng)”指的是：A.主實驗室與緩沖間各設(shè)一道自動門B.主實驗室入口需通過兩道帶鎖的門，且不能同時開啟C.實驗室需設(shè)置前門（人員進入）和后門（廢棄物出口）D.緩沖間與主實驗室之間的門需保持常開以維持氣流10.關(guān)于BSL1實驗室的生物安全管理，以下說法正確的是：A.可在實驗室內(nèi)飲食或存放食物B.實驗結(jié)束后僅需用清水擦拭臺面C.應制定并執(zhí)行人員培訓與準入制度D.無需記錄實驗活動的生物安全風險評估11.以下哪種場景必須在BSL4實驗室中開展？A.研究HIV病毒的中和抗體B.對未知的高致病性病毒進行初步檢測C.培養(yǎng)馬爾堡病毒的感染性毒株D.分析埃博拉病毒的基因組序列（非活毒操作）12.BSL2實驗室的“定向氣流”要求是指：A.氣流從污染區(qū)流向清潔區(qū)B.氣流從走廊流向?qū)嶒炇褻.實驗室相對于相鄰區(qū)域保持微正壓D.氣流速度需≥0.5m/s13.對于BSL3實驗室的廢棄物處理，錯誤的做法是：A.感染性廢液需先在實驗室內(nèi)部用化學消毒劑浸泡，再排入實驗室污水處理系統(tǒng)B.一次性實驗器材（如移液管）需放入防滲漏的專用垃圾袋，高壓蒸汽滅菌后處理C.實驗動物的尸體需裝入密封容器，經(jīng)80℃冷凍保存后直接丟棄D.廢棄的培養(yǎng)皿需先高壓滅菌，再進行破碎或焚燒處理14.以下哪種微生物的生物安全級別被我國列為第二類（對應BSL3）？A.天花病毒B.脊髓灰質(zhì)炎病毒（野毒株）C.沙門菌（非傷寒血清型）D.白假絲酵母菌（非耐藥株）15.BSL4實驗室的“三級屏障”不包括：A.實驗人員的正壓防護服B.實驗室的雙過濾排風系統(tǒng)C.實驗動物的獨立飼養(yǎng)籠具D.實驗室建筑的防滲漏結(jié)構(gòu)二、判斷題（每題1分，共10分）1.BSL1實驗室可操作所有已知無致病性的微生物，因此無需進行生物安全培訓。（）2.BSL2實驗室必須配備Ⅱ級生物安全柜，否則不能開展任何實驗操作。（）3.BSL3實驗室的工作人員需每年進行健康監(jiān)測，并建立個人健康檔案。（）4.結(jié)核分枝桿菌的培養(yǎng)需在BSL3實驗室中進行，而其涂片鏡檢可在BSL2實驗室完成。（）5.BSL4實驗室的所有實驗活動必須通過雙人監(jiān)督，且至少1人具備高級生物安全資質(zhì)。（）6.對于未知風險的樣本（如不明原因肺炎患者的痰液），應先按BSL1標準處理，待明確病原后調(diào)整級別。（）7.BSL3實驗室的排風需經(jīng)過HEPA過濾器（高效空氣過濾器）處理，過濾效率需≥99.97%（針對0.3μm顆粒）。（）8.實驗人員在BSL2實驗室操作時，若手套無破損，可重復使用同一副手套進行不同樣本的操作。（）9.BSL4實驗室的污水處理系統(tǒng)需采用化學消毒（如次氯酸鈉）與高溫滅菌（≥121℃）的雙重處理。（）10.我國將病原微生物分為四類，其中第一類對應BSL4，第二類對應BSL3，第三類對應BSL2，第四類對應BSL1。（）三、簡答題（每題8分，共40分）1.簡述病原微生物生物安全分級的主要依據(jù)（至少列出4項），并說明BSL1與BSL2實驗室的核心區(qū)別。2.列舉BSL3實驗室的5項關(guān)鍵設(shè)施要求，并解釋其設(shè)計目的。3.對于BSL2實驗室中可能產(chǎn)生氣溶膠的操作（如勻漿、離心），需采取哪些生物安全控制措施？4.某實驗室計劃開展新型冠狀病毒（SARSCoV2）的活病毒中和實驗，應選擇幾級生物安全實驗室？請說明理由，并列出實驗人員的個人防護裝備要求。5.簡述實驗室生物安全“三級屏障”的具體內(nèi)容，并舉例說明BSL4實驗室如何通過三級屏障實現(xiàn)最高防護。四、案例分析題（共20分）某省級疾控中心擬建設(shè)一所BSL3實驗室，用于開展布魯氏菌（可引起人畜共患病，通過呼吸道、皮膚接觸傳播，感染后可導致長期發(fā)熱、關(guān)節(jié)痛，無特效疫苗，可用多西環(huán)素治療）的分離培養(yǎng)與毒力研究。實驗室設(shè)計方案如下：布局：清潔區(qū)（一更）→緩沖間（二更）→主實驗室→污物處理間→滅菌區(qū)設(shè)施：主實驗室與緩沖間之間設(shè)單扇自動門；實驗臺為普通木質(zhì)臺面；配備Ⅱ級A2型生物安全柜；送排風系統(tǒng)為普通空調(diào)改造，未設(shè)置獨立過濾裝置；污水直接排入市政管網(wǎng)。請根據(jù)生物安全規(guī)范，分析該設(shè)計方案的5處不合理之處，并提出改進建議。答案與解析一、單項選擇題1.B（分級核心是病原體的危害程度，包括傳染性、致病力等）2.B（BSL1操作非致病性或低致病性微生物，如大腸埃希菌K12）3.D（BSL2無需持續(xù)負壓，BSL3及以上才要求）4.D（BSL3需獨立送排風系統(tǒng)，普通空調(diào)無法滿足氣流控制）5.A（BSL4要求正壓防護服，其他選項均不符合最高防護要求）6.D（挑取固體菌落一般無氣溶膠風險，無需強制使用生物安全柜）7.A（次要因素包括流行史、實驗室條件等，主要因素是致病性、傳播途徑等）8.D（伯氏疏螺旋體屬BSL3，霍亂弧菌為BSL2，麻疹減毒株為BSL2）9.B（雙門不能同時開啟，防止氣流倒灌）10.C（BSL1需培訓和準入制度，其他選項均違反基本規(guī)范）11.C（馬爾堡病毒屬BSL4，非活毒操作可在低級別實驗室）12.B（BSL2需保持實驗室相對于走廊微負壓，氣流從清潔區(qū)流向污染區(qū)）13.C（實驗動物尸體需高壓滅菌或焚燒，不能直接冷凍丟棄）14.B（脊髓灰質(zhì)炎野毒株屬第二類，天花病毒為第一類，沙門菌為第三類）15.C（三級屏障包括個人防護、實驗室設(shè)施、建筑結(jié)構(gòu)，動物籠具屬二級屏障）二、判斷題1.×（BSL1仍需基礎(chǔ)生物安全培訓）2.×（BSL2推薦使用生物安全柜，但非強制，視操作風險而定）3.√（BSL3人員需定期健康監(jiān)測）4.√（涂片鏡檢風險較低，培養(yǎng)需更高防護）5.√（BSL4需雙人監(jiān)督和高級資質(zhì)）6.×（未知樣本應先按最高可能級別（如BSL3）處理）7.√（BSL3排風HEPA過濾效率需≥99.97%）8.×（不同樣本操作需更換手套，避免交叉污染）9.√（BSL4污水需雙重處理確保滅活）10.√（我國分類與BSL級別一一對應）三、簡答題1.分級依據(jù)：①病原體的傳染性；②感染后對個體的危害程度（如死亡率、后遺癥）；③感染后對群體的危害（如傳播速度、是否引起大流行）；④是否有有效的預防措施（如疫苗）和治療手段（如特效藥）。BSL1與BSL2核心區(qū)別：BSL1操作已知無致病性或低致病性微生物，無需特殊防護設(shè)備（如生物安全柜），實驗室無需負壓；BSL2操作中度風險微生物（如乙肝病毒），需使用生物安全柜處理高風險操作（如產(chǎn)生氣溶膠），實驗室需限制無關(guān)人員進入，配備應急洗眼裝置。2.BSL3關(guān)鍵設(shè)施要求及目的：①獨立送排風系統(tǒng)（維持定向氣流，防止病原外泄）；②雙門緩沖間（氣鎖設(shè)計，避免清潔區(qū)與污染區(qū)直接連通）；③HEPA過濾排風（高效過濾空氣中的病原微生物）；④耐腐蝕性實驗臺面（防止消毒劑腐蝕，便于清潔）；⑤自動閉門裝置（確保門關(guān)閉，維持氣流穩(wěn)定）。3.BSL2氣溶膠操作控制措施：①在Ⅱ級或Ⅲ級生物安全柜內(nèi)進行操作；②使用密封離心杯或安全轉(zhuǎn)頭（防止離心時氣溶膠泄漏）；③勻漿時采用帶安全蓋的勻漿器，且在生物安全柜內(nèi)開啟；④操作前評估風險，必要時佩戴N95口罩或防護面罩；⑤實驗結(jié)束后對操作區(qū)域進行紫外線消毒或化學消毒（如75%乙醇、含氯消毒液）。4.實驗室級別：BSL3（SARSCoV2屬第二類病原微生物，活病毒操作需BSL3）。個人防護裝備要求：①穿戴一次性防護服（連體式，防水）；②佩戴N95或更高防護級別口罩（需進行密合性測試）；③戴雙層手套（內(nèi)層丁腈手套，外層乳膠手套）；④護目鏡或面屏（防液體噴濺）；⑤實驗鞋（專用，不得穿出實驗室）；⑥操作結(jié)束后，在緩沖間按規(guī)范脫除防護裝備（避免接觸外表面）。5.三級屏障內(nèi)容：①一級屏障（個人防護）：如防護服、手套、口罩等；②二級屏障（實驗室設(shè)施）：如生物安全柜、負壓系統(tǒng)、HEPA過濾；③三級屏障（建筑結(jié)構(gòu)）：如防滲漏的墻面地面、獨立的通風系統(tǒng)、雙門氣鎖。BSL4的三級屏障實現(xiàn)：一級屏障為正壓供氣式防護服（自帶氧氣供應，防止外界空氣進入）；二級屏障包括Ⅲ級生物安全柜（全封閉，手套操作）、雙HEPA過濾排風系統(tǒng)（排風經(jīng)兩次過濾）；三級屏障為實驗室建筑整體防滲漏（墻面地面無縫隙），且與其他區(qū)域物理隔離（如獨立建筑或完全分隔的區(qū)域）。四、案例分析題不合理之處及改進建議：1.布局問題：主實驗室與緩沖間之間僅設(shè)單扇自動門。改進：應設(shè)置雙門氣鎖系統(tǒng)（兩道門不能同時開啟），防止氣流倒灌和病原泄漏。2.實驗臺面材質(zhì)：普通木質(zhì)臺面不耐腐蝕。改進：更換為耐化學腐蝕（如次氯酸鈉、過氧乙酸）的材質(zhì)（如環(huán)氧樹脂臺面），且表面無縫隙，便于消毒。3.送排風系統(tǒng)：使用普通空調(diào)改造，未設(shè)置獨立過濾。改進：安裝獨立的