第第PAGE\MERGEFORMAT1頁共NUMPAGES\MERGEFORMAT1頁pcr實(shí)驗(yàn)室生物安全測試題及答案解析（含答案及解析）姓名：科室/部門/班級：得分：題型單選題多選題判斷題填空題簡答題案例分析題總分得分

一、單選題（共20分）

1.在PCR實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣本處理時，以下哪項(xiàng)操作不符合生物安全一級防護(hù)要求？

（）A.在生物安全柜內(nèi)打開含有病毒的樣本管蓋

（）B.使用一次性移液器頭進(jìn)行樣品轉(zhuǎn)移

（）C.處理完樣本后立即使用70%酒精對工作臺面進(jìn)行消毒

（）D.在離心機(jī)樣品間放置吸水紙以吸收潛在泄漏

2.PCR實(shí)驗(yàn)室中，用于儲存廢棄樣本的容器應(yīng)具備以下哪些特性？

（）A.耐高溫、防滲漏、標(biāo)記清晰

（）B.透明材質(zhì)以便觀察內(nèi)部情況

（）C.允許樣本在室溫下保存

（）D.具備自動封口功能

3.根據(jù)我國《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》（GB19489-2008），以下哪項(xiàng)屬于二級生物安全實(shí)驗(yàn)室的強(qiáng)制要求？

（）A.配備獨(dú)立通風(fēng)空調(diào)系統(tǒng)（HVAC）

（）B.工作人員必須佩戴防護(hù)面罩

（）C.設(shè)置氣密性實(shí)驗(yàn)操作柜

（）D.實(shí)驗(yàn)室入口處需安裝腳踏式洗手池

4.在進(jìn)行PCR反應(yīng)體系配置時，若使用含有內(nèi)源核酸的試劑（如Tris-DNA處理液），應(yīng)采取哪種措施降低污染風(fēng)險？

（）A.確保試劑瓶蓋密封完好

（）B.將試劑保存在-20℃冷凍

（）C.使用無核酸酶處理的移液器頭

（）D.在超凈工作臺中完成配置

5.若PCR實(shí)驗(yàn)室發(fā)生氣溶膠泄漏，以下哪項(xiàng)處置措施是優(yōu)先級最高的？

（）A.立即疏散無關(guān)人員

（）B.使用紫外燈照射消毒

（）C.撤離并銷毀實(shí)驗(yàn)設(shè)備

（）D.對實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行全面通風(fēng)

6.根據(jù)生物安全柜的運(yùn)行原理，以下關(guān)于A2型生物安全柜的描述哪項(xiàng)正確？

（）A.僅能保護(hù)操作人員，無法保護(hù)環(huán)境

（）B.可用于處理高致病性病原體

（）C.氣流方向?yàn)閱蜗蛄?/p>

（）D.操作口需始終處于關(guān)閉狀態(tài)

7.在PCR實(shí)驗(yàn)室中，以下哪項(xiàng)屬于潛在的實(shí)驗(yàn)室感染風(fēng)險源？

（）A.實(shí)驗(yàn)服的定期更換

（）B.工作臺面的日常消毒

（）C.使用一次性手套

（）D.未經(jīng)消毒的玻璃器皿

8.《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》規(guī)定，從事高致病性病原微生物實(shí)驗(yàn)活動的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備哪些條件？

（）A.具備與實(shí)驗(yàn)活動規(guī)模相適應(yīng)的防護(hù)設(shè)施

（）B.實(shí)驗(yàn)人員需通過崗前培訓(xùn)

（）C.設(shè)置獨(dú)立的廢液處理系統(tǒng)

（）D.以上均為正確選項(xiàng)

9.PCR實(shí)驗(yàn)室中，用于樣本核酸提取的試劑應(yīng)避免哪些潛在污染途徑？

（）A.多次開啟試劑瓶蓋

（）B.使用金屬吸管頭

（）C.在室溫下長時間儲存

（）D.嚴(yán)格限制試劑取用量

10.若實(shí)驗(yàn)室檢測到PCR污染（如假陽性），以下哪項(xiàng)措施可幫助追溯污染源？

（）A.對所有操作人員采樣檢測

（）B.檢查樣本管標(biāo)簽是否清晰

（）C.回收已完成的實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物

（）D.對實(shí)驗(yàn)室環(huán)境進(jìn)行隨機(jī)采樣

二、多選題（共15分，多選、錯選均不得分）

21.PCR實(shí)驗(yàn)室中，符合生物安全二級防護(hù)的操作規(guī)范包括哪些？

（）A.使用腳踏式開門的實(shí)驗(yàn)服

（）B.定期檢測生物安全柜的運(yùn)行參數(shù)

（）C.對實(shí)驗(yàn)廢棄物進(jìn)行高壓滅菌

（）D.限制實(shí)驗(yàn)室內(nèi)人員數(shù)量

22.以下哪些因素可能導(dǎo)致PCR實(shí)驗(yàn)出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增？

（）A.引物設(shè)計(jì)不合理

（）B.dNTP濃度過高

（）C.退火溫度設(shè)置過低

（）D.模板核酸濃度過高

23.根據(jù)《生物安全柜性能驗(yàn)證指南》（ISO14644-3），對生物安全柜進(jìn)行日常檢查時，應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注哪些指標(biāo)？

（）A.濾網(wǎng)是否完好

（）B.風(fēng)速是否達(dá)標(biāo)

（）C.照明系統(tǒng)是否正常

（）D.地板縫隙是否密封

24.PCR實(shí)驗(yàn)室中，潛在的交叉污染風(fēng)險可能出現(xiàn)在哪些環(huán)節(jié)？

（）A.共用移液器

（）B.未清潔的離心管架

（）C.空氣流動路徑

（）D.污染的實(shí)驗(yàn)服

25.若實(shí)驗(yàn)室發(fā)生疑似生物安全事故，應(yīng)遵循哪些應(yīng)急處置流程？

（）A.立即向?qū)嶒?yàn)室負(fù)責(zé)人報告

（）B.對污染區(qū)域進(jìn)行隔離

（）C.評估風(fēng)險等級

（）D.保留現(xiàn)場物證

三、判斷題（共10分，每題0.5分）

26.PCR實(shí)驗(yàn)室中，所有實(shí)驗(yàn)廢棄物均需先滅菌再分類處理。（）

27.生物安全柜的進(jìn)風(fēng)口應(yīng)直接對準(zhǔn)操作人員。（）

28.使用酒精擦拭生物安全柜內(nèi)壁可有效殺滅氣溶膠。（）

29.實(shí)驗(yàn)室門應(yīng)始終朝外開，以方便緊急疏散。（）

30.PCR產(chǎn)物可自行丟棄，無需特殊處理。（）

31.在進(jìn)行氣密性實(shí)驗(yàn)操作時，生物安全柜的紫外燈應(yīng)保持開啟狀態(tài)。（）

32.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)使用專用離心機(jī)處理潛在污染的樣本。（）

33.根據(jù)生物安全原則，二級實(shí)驗(yàn)室必須配備壓力監(jiān)測系統(tǒng)。（）

34.操作人員的手套污染后可直接更換新手套繼續(xù)工作。（）

35.PCR實(shí)驗(yàn)室的設(shè)計(jì)應(yīng)遵循“污染區(qū)域向清潔區(qū)域流動”的原則。（）

四、填空題（共10空，每空1分，共10分）

36.PCR實(shí)驗(yàn)室應(yīng)定期對__________進(jìn)行消毒，頻率至少為每周一次。

37.處理高致病性病原體時，應(yīng)使用__________生物安全柜進(jìn)行操作。

38.實(shí)驗(yàn)室廢棄物可分為__________、____________和__________三類。

39.若檢測到PCR污染，應(yīng)檢查__________、____________和__________是否存在污染。

40.根據(jù)《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全管理?xiàng)l例》，實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人需具備__________相關(guān)資質(zhì)。

41.生物安全柜的運(yùn)行風(fēng)速一般要求在__________L/min以上。

42.實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)設(shè)置__________和__________兩種洗手設(shè)施。

43.PCR反應(yīng)體系配置時，為避免污染，應(yīng)使用__________移液器頭。

44.若實(shí)驗(yàn)室發(fā)生氣溶膠泄漏，應(yīng)立即啟動__________應(yīng)急預(yù)案。

45.實(shí)驗(yàn)室門口應(yīng)張貼__________標(biāo)識，并配備__________。

五、簡答題（共30分）

46.簡述PCR實(shí)驗(yàn)室生物安全風(fēng)險評估的主要步驟。（6分）

47.在進(jìn)行PCR實(shí)驗(yàn)時，如何預(yù)防氣溶膠和接觸性污染？（8分）

48.根據(jù)《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》，簡述實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理的基本原則。（7分）

49.若實(shí)驗(yàn)室發(fā)現(xiàn)一名工作人員出現(xiàn)流感樣癥狀，應(yīng)采取哪些應(yīng)急措施？（9分）

六、案例分析題（共25分）

50.案例背景：某PCR實(shí)驗(yàn)室在檢測H7N9病毒樣本時，連續(xù)三批次出現(xiàn)假陽性結(jié)果。經(jīng)排查，發(fā)現(xiàn)所有樣本均來自同一批次，且操作人員均使用了同一臺移液器進(jìn)行核酸提取。實(shí)驗(yàn)室環(huán)境檢測未發(fā)現(xiàn)氣溶膠污染，但部分實(shí)驗(yàn)服袖口存在破損。

問題：

（1）分析可能造成該案例假陽性結(jié)果的原因。（8分）

（2）提出針對性的改進(jìn)措施，以避免類似事件再次發(fā)生。（10分）

（3）總結(jié)該案例對實(shí)驗(yàn)室生物安全管理的啟示。（7分）

參考答案及解析部分

參考答案及解析

一、單選題

1.D

解析：生物安全一級防護(hù)要求在離心機(jī)等設(shè)備操作時，需確保樣品間封閉，避免氣溶膠擴(kuò)散。A、B、C均符合防護(hù)要求，D選項(xiàng)中吸水紙僅能處理小范圍液滴，無法防止氣溶膠擴(kuò)散。

2.A

解析：根據(jù)《醫(yī)療廢物管理?xiàng)l例》，廢棄樣本容器需耐高溫（便于滅菌）、防滲漏（防止泄漏擴(kuò)散）并清晰標(biāo)記。透明材質(zhì)（B）會增加操作污染風(fēng)險；室溫儲存（C）可能影響病毒活性；自動封口功能（D）非強(qiáng)制要求。

3.A

解析：二級實(shí)驗(yàn)室強(qiáng)制要求配備獨(dú)立HVAC系統(tǒng)（GB19489-2008第4.3.2條），B、C屬于三級實(shí)驗(yàn)室要求，D僅是一級實(shí)驗(yàn)室要求。

4.C

解析：內(nèi)源核酸試劑需使用無核酸酶移液器頭，以避免模板污染（培訓(xùn)中“試劑選擇”模塊強(qiáng)調(diào)）。A、B、D均無法有效降低內(nèi)源核酸污染風(fēng)險。

5.A

解析：氣溶膠泄漏優(yōu)先疏散人員，以保障生命安全（培訓(xùn)中“應(yīng)急預(yù)案”模塊強(qiáng)調(diào)）。B、C、D均屬于事后處理措施。

6.B

解析：A2型生物安全柜可處理高致病性病原體（ISO14644-3標(biāo)準(zhǔn)），A、C、D均為錯誤描述（A2型既保護(hù)人員又保護(hù)環(huán)境，氣流為層流，操作口需打開）。

7.D

解析：未經(jīng)消毒的玻璃器皿可能殘留前次實(shí)驗(yàn)的核酸，導(dǎo)致交叉污染（培訓(xùn)中“設(shè)備管理”模塊強(qiáng)調(diào)）。A、B、C均符合生物安全要求。

8.D

解析：高致病性實(shí)驗(yàn)室需滿足防護(hù)設(shè)施、培訓(xùn)、廢液處理等多項(xiàng)條件（條例第19條）。A、B、C均為具體要求。

9.A

解析：多次開啟試劑瓶蓋會暴露內(nèi)部于環(huán)境，增加氣溶膠和接觸污染風(fēng)險（培訓(xùn)中“試劑管理”模塊強(qiáng)調(diào)）。B、C、D均符合規(guī)范。

10.B

解析：檢查樣本管標(biāo)簽可追溯污染環(huán)節(jié)，如標(biāo)簽錯誤導(dǎo)致樣本混淆（培訓(xùn)中“污染控制”模塊強(qiáng)調(diào)）。A、C、D均為無效追溯手段。

二、多選題

21.ABC

解析：二級實(shí)驗(yàn)室防護(hù)措施包括：腳踏式實(shí)驗(yàn)服（防止氣溶膠污染）、HVAC參數(shù)檢測（保障通風(fēng)效果）、高壓滅菌廢棄物（殺滅病原體）（培訓(xùn)中“二級防護(hù)”模塊強(qiáng)調(diào)）。D僅是一級實(shí)驗(yàn)室要求。

22.ABC

解析：非特異性擴(kuò)增的常見原因包括：引物設(shè)計(jì)不合理（如二聚體）、dNTP濃度過高（抑制特異性結(jié)合）、退火溫度過低（非特異性結(jié)合）（培訓(xùn)中“PCR優(yōu)化”模塊強(qiáng)調(diào)）。D高濃度模板一般不直接導(dǎo)致非特異性。

23.ABC

解析：生物安全柜性能驗(yàn)證需檢查：濾網(wǎng)完好性（防止堵塞）、風(fēng)速達(dá)標(biāo)（保障氣流）、照明正常（便于觀察）（ISO14644-3第7.2條）。D地板密封主要影響環(huán)境潔凈度，非核心指標(biāo)。

24.ABCD

解析：交叉污染可源于：共用移液器（接觸污染）、未清潔管架（表面污染）、空氣流動（氣溶膠傳播）、實(shí)驗(yàn)服（攜帶污染）（培訓(xùn)中“交叉污染”模塊強(qiáng)調(diào)）。

25.ABCD

解析：應(yīng)急處置流程包括：報告負(fù)責(zé)人（啟動響應(yīng)）、隔離現(xiàn)場（控制范圍）、評估風(fēng)險（分級處理）、保留物證（后續(xù)追溯）（條例第21條）。

三、判斷題

26.√

解析：所有廢棄物需先滅菌（如高壓滅菌）再分類（GB19489-2008第4.5條）。

27.×

解析：進(jìn)風(fēng)口應(yīng)遠(yuǎn)離操作口，避免氣流干擾（ISO14644-3第6.3.2條）。

28.×

解析：酒精無法殺滅氣溶膠中的病毒（培訓(xùn)中“消毒劑選擇”模塊強(qiáng)調(diào)）。

29.√

解析：門朝外開便于緊急時快速疏散（GB19489-2008第4.3.3條）。

30.×

解析：PCR產(chǎn)物含病原體，需滅活后處理（條例第20條）。

31.×

解析：紫外燈會破壞實(shí)驗(yàn)樣本，氣密性實(shí)驗(yàn)無需開啟（培訓(xùn)中“紫外燈使用”模塊強(qiáng)調(diào)）。

32.√

解析：專用離心機(jī)可防止交叉污染（培訓(xùn)中“設(shè)備隔離”模塊強(qiáng)調(diào)）。

33.√

解析：二級實(shí)驗(yàn)室需安裝正壓監(jiān)測系統(tǒng)（GB19489-2008第4.3.2條）。

34.×

解析：手套污染需立即更換并消毒雙手（條例第18條）。

35.√

解析：實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)應(yīng)遵循“污染區(qū)域→清潔區(qū)域”單向流動原則（GB19489-2008第4.3條）。

四、填空題

36.工作臺面

解析：工作臺面是高頻接觸表面，需定期消毒（培訓(xùn)中“表面消毒”模塊強(qiáng)調(diào)）。

37.生物安全柜

解析：高致病性病原體需在生物安全柜內(nèi)操作（條例第17條）。

38.醫(yī)療廢物、實(shí)驗(yàn)廢棄物、生活垃圾

解析：實(shí)驗(yàn)室廢棄物按來源分類（條例第9條）。

39.試劑、設(shè)備、環(huán)境

解析：污染源排查需覆蓋這三方面（培訓(xùn)中“污染溯源”模塊強(qiáng)調(diào)）。

40.生物安全

解析：實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人需具備生物安全管理資質(zhì)（條例第14條）。

41.100

解析：生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)速要求≥100L/min（ISO14644-3第6.3.1條）。

42.洗手池、腳踏式洗手池

解析：二級實(shí)驗(yàn)室需配備兩種洗手設(shè)施（GB19489-2008第4.3.4條）。

43.無核酸酶

解析：PCR配置需使用無核酸酶移液器頭（培訓(xùn)中“試劑選擇”模塊強(qiáng)調(diào)）。

44.生物安全事故

解析：氣溶膠泄漏需啟動應(yīng)急預(yù)案（條例第22條）。

45.生物安全、腳踏式洗手池

解析：門口應(yīng)張貼生物安全標(biāo)識，配備腳踏式洗手池（GB19489-2008第4.3.3條）。

五、簡答題

46.

答：

①確定實(shí)驗(yàn)活動（如PCR檢測）。

②識別潛在病原體及暴露途徑（如氣溶膠、接觸）。

③評估暴露風(fēng)險（基于病原體致病性、傳播途徑）。

④制定控制措施（如使用生物安全柜、個人防護(hù)）。

⑤評價控制效果（如監(jiān)測感染率）。

解析：以上步驟對應(yīng)培訓(xùn)中“風(fēng)險評估”模塊的核心內(nèi)容。

47.

答：

①氣溶膠預(yù)防：在生物安全柜內(nèi)操作、戴N95口罩、避免產(chǎn)生氣溶膠動作（如劇烈吹吸）。

②接觸性預(yù)防：使用一次性移液器頭、定期清潔工作臺和設(shè)備表面、實(shí)驗(yàn)服避免破損。

解析：措施來自培訓(xùn)中“污染控制”模塊的實(shí)踐要求。

48.

答：

①分類收集：醫(yī)療廢物、實(shí)驗(yàn)廢棄物、生活垃圾嚴(yán)格分類（條例第9條）。

②消毒滅活：實(shí)驗(yàn)廢棄物需高壓滅菌或化學(xué)滅活（GB19489-2008第4.5條）。

③安全轉(zhuǎn)運(yùn)：委托有資質(zhì)單位處理（條例第11條）。

④記錄存檔：建立廢棄物處理臺賬（條