萍鄉(xiāng)市人民醫(yī)院電鏡標(biāo)本制備考核一、單選題（每題2分，共20題）1.電鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)時，常用的染色劑是（）。A.甲基綠-派洛寧B.蘇木精-伊紅C.鋨酸D.HE染色液2.制作超薄切片時，理想的組織塊厚度應(yīng)為（）。A.1-2mmB.5-10μmC.50-70μmD.100-200μm3.電鏡樣品干燥過程中，最適合生物樣品的干燥方法是（）。A.自然風(fēng)干B.真空干燥C.乙醇梯度脫水D.加熱干燥4.脫水過程中，乙醇濃度從低到高的目的是（）。A.減少樣品收縮B.增加樣品透明度C.防止樣品變形D.以上都是5.超薄切片常用的包埋劑是（）。A.石蠟B.樹脂（如Epon或Spurr）C.膠水D.硅橡膠6.超薄切片機(jī)常用的刀片材料是（）。A.不銹鋼B.碳化鎢C.石英D.合金鋼7.電鏡樣品固定常用的fixative是（）。A.甲醇B.戊二醛C.丙酮D.乙醇8.脫水后，樣品在丙酮中的作用是（）。A.去除水分B.引入包埋劑C.防止樣品收縮D.以上都是9.超薄切片的厚度通常為（）。A.0.5μmB.1μmC.70-90nmD.5μm10.電鏡樣品染色常用的染色劑是（）。A.甲基綠B.鋨酸C.蘇木精D.伊紅二、多選題（每題3分，共10題）1.電鏡樣品制備過程中，常用的固定劑包括（）。A.戊二醛B.鋨酸C.甲醇D.丙酮2.超薄切片的制備步驟包括（）。A.固定B.脫水C.包埋D.脫水后染色3.電鏡樣品干燥方法包括（）。A.自然風(fēng)干B.真空干燥C.臨界點干燥D.乙醇梯度脫水4.超薄切片機(jī)的主要組成部分包括（）。A.切割刀B.支撐臺C.冷凍系統(tǒng)D.光學(xué)顯微鏡5.電鏡樣品染色常用的染色劑包括（）。A.鋨酸B.鈾鹽C.甲基綠D.乙酰黑6.脫水過程中，乙醇濃度梯度的作用包括（）。A.防止樣品收縮B.增加樣品透明度C.防止樣品變形D.去除水分7.電鏡樣品制備的常見問題包括（）。A.樣品收縮B.樣品變形C.染色不均勻D.切片斷裂8.超薄切片的包埋劑作用包括（）。A.固定樣品結(jié)構(gòu)B.提供切割支撐C.防止樣品變形D.增加樣品密度9.電鏡樣品固定劑的選擇原則包括（）。A.與樣品組織親和力強(qiáng)B.能有效固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)C.對樣品損傷小D.易于去除10.超薄切片機(jī)的維護(hù)保養(yǎng)包括（）。A.定期清潔切割刀B.檢查冷卻系統(tǒng)C.校準(zhǔn)切割參數(shù)D.更換支撐臺三、判斷題（每題2分，共15題）1.電鏡樣品制備過程中，固定劑的作用是去除水分。（×）2.超薄切片的厚度通常為1μm。（×）3.電鏡樣品干燥過程中，臨界點干燥最適合生物樣品。（√）4.脫水過程中，乙醇濃度從高到低可以防止樣品收縮。（×）5.超薄切片機(jī)常用的刀片材料是碳化鎢。（√）6.電鏡樣品染色常用的染色劑是鋨酸和鈾鹽。（√）7.超薄切片的包埋劑是石蠟。（×）8.脫水后，樣品在丙酮中的作用是引入包埋劑。（×）9.電鏡樣品固定劑的選擇應(yīng)考慮與樣品組織的親和力。（√）10.超薄切片機(jī)的維護(hù)保養(yǎng)包括定期清潔切割刀。（√）11.超薄切片的制備步驟包括固定、脫水、包埋、切片、染色。（√）12.電鏡樣品干燥方法包括自然風(fēng)干和真空干燥。（√）13.超薄切片機(jī)的主要組成部分包括切割刀和支撐臺。（√）14.電鏡樣品染色常用的染色劑是甲基綠和伊紅。（×）15.超薄切片的包埋劑作用是固定樣品結(jié)構(gòu)。（√）四、簡答題（每題5分，共5題）1.簡述電鏡樣品制備過程中，脫水步驟的目的和作用。2.簡述超薄切片機(jī)的主要組成部分及其功能。3.簡述電鏡樣品染色常用的染色劑及其作用。4.簡述電鏡樣品干燥方法的選擇原則。5.簡述超薄切片的包埋劑作用及其選擇原則。五、論述題（每題10分，共2題）1.論述電鏡樣品制備過程中，固定劑的選擇原則及其對樣品結(jié)構(gòu)的影響。2.論述超薄切片機(jī)的維護(hù)保養(yǎng)對切片質(zhì)量的影響，并列舉常見的維護(hù)保養(yǎng)措施。答案與解析一、單選題答案與解析1.C.鋨酸解析：電鏡觀察細(xì)胞結(jié)構(gòu)時，鋨酸是常用的染色劑，能固定生物樣品并增強(qiáng)電子密度。2.C.50-70μm解析：超薄切片的制備需要將組織塊厚度控制在50-70μm，以便后續(xù)包埋和切片。3.B.真空干燥解析：真空干燥能快速去除水分，防止樣品收縮和變形，適合生物樣品。4.D.以上都是解析：乙醇梯度脫水能減少樣品收縮、增加透明度，并防止變形。5.B.樹脂（如Epon或Spurr）解析：超薄切片常用Epon或Spurr樹脂作為包埋劑，能固定樣品結(jié)構(gòu)并提供切割支撐。6.B.碳化鎢解析：超薄切片機(jī)常用碳化鎢刀片，硬度高，適合切割樹脂樣品。7.B.戊二醛解析：戊二醛是常用的固定劑，能有效固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，但需與鋨酸聯(lián)用。8.D.以上都是解析：丙酮能去除水分，并作為包埋劑的過渡介質(zhì)。9.C.70-90nm解析：超薄切片的厚度通常為70-90nm，適合電鏡觀察。10.B.鋨酸解析：鋨酸是電鏡樣品常用的染色劑，能增強(qiáng)樣品電子密度。二、多選題答案與解析1.A.戊二醛,B.鋨酸解析：戊二醛和鋨酸是常用的固定劑，能固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)。2.A.固定,B.脫水,C.包埋,D.切片,染色解析：超薄切片制備步驟包括固定、脫水、包埋、切片和染色。3.B.真空干燥,C.臨界點干燥,D.乙醇梯度脫水解析：這些方法能有效去除水分，防止樣品變形。4.A.切割刀,B.支撐臺,C.冷凍系統(tǒng)解析：這些是超薄切片機(jī)的主要組成部分。5.A.鋨酸,B.鈾鹽解析：鋨酸和鈾鹽是電鏡樣品常用的染色劑。6.A.防止樣品收縮,B.增加樣品透明度,D.去除水分解析：乙醇梯度脫水能去除水分，防止收縮，并增加透明度。7.A.樣品收縮,B.樣品變形,C.染色不均勻,D.切片斷裂解析：這些是電鏡樣品制備的常見問題。8.A.固定樣品結(jié)構(gòu),B.提供切割支撐,C.防止樣品變形解析：包埋劑能固定樣品結(jié)構(gòu)，提供切割支撐，并防止變形。9.A.與樣品組織親和力強(qiáng),B.能有效固定細(xì)胞結(jié)構(gòu),C.對樣品損傷小,D.易于去除解析：固定劑的選擇需考慮親和力、固定效果、損傷小和易于去除。10.A.定期清潔切割刀,B.檢查冷卻系統(tǒng),C.校準(zhǔn)切割參數(shù)解析：這些是超薄切片機(jī)的常見維護(hù)保養(yǎng)措施。三、判斷題答案與解析1.×解析：固定劑的作用是固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，去除水分是脫水的功能。2.×解析：超薄切片的厚度通常為70-90nm，而非1μm。3.√解析：臨界點干燥能快速去除水分，防止樣品收縮和變形。4.×解析：脫水過程中，乙醇濃度應(yīng)從低到高，以防止樣品收縮。5.√解析：碳化鎢刀片硬度高，適合切割樹脂樣品。6.√解析：鋨酸和鈾鹽是電鏡樣品常用的染色劑。7.×解析：超薄切片常用樹脂（如Epon或Spurr），而非石蠟。8.×解析：丙酮的作用是去除水分，引入包埋劑是后續(xù)步驟。9.√解析：固定劑的選擇應(yīng)考慮與樣品組織的親和力。10.√解析：定期清潔切割刀能保證切片質(zhì)量。11.√解析：超薄切片制備步驟包括固定、脫水、包埋、切片和染色。12.√解析：自然風(fēng)干和真空干燥是常用的干燥方法。13.√解析：切割刀和支撐臺是超薄切片機(jī)的主要組成部分。14.×解析：電鏡樣品染色常用鋨酸和鈾鹽，而非甲基綠和伊紅。15.√解析：包埋劑能固定樣品結(jié)構(gòu)，便于切片和觀察。四、簡答題答案與解析1.脫水步驟的目的和作用答：脫水步驟的目的是去除樣品中的水分，防止樣品收縮、變形，并為后續(xù)包埋劑滲透做準(zhǔn)備。脫水通常采用乙醇梯度，逐步提高乙醇濃度，最終用丙酮過渡到包埋劑，以減少樣品損傷。2.超薄切片機(jī)的主要組成部分及其功能答：超薄切片機(jī)的主要組成部分包括切割刀、支撐臺和冷卻系統(tǒng)。切割刀用于切割樹脂樣品，支撐臺用于固定樣品，冷卻系統(tǒng)用于保持樣品低溫，防止變形。3.電鏡樣品染色常用的染色劑及其作用答：電鏡樣品染色常用的染色劑包括鋨酸和鈾鹽。鋨酸能增強(qiáng)細(xì)胞器的電子密度，鈾鹽能染色細(xì)胞核和蛋白質(zhì)，使結(jié)構(gòu)更清晰。4.電鏡樣品干燥方法的選擇原則答：選擇干燥方法需考慮樣品類型、結(jié)構(gòu)完整性等因素。生物樣品常用真空干燥或臨界點干燥，以防止收縮和變形。5.超薄切片的包埋劑作用及其選擇原則答：包埋劑的作用是固定樣品結(jié)構(gòu)，提供切割支撐，并防止變形。選擇原則包括與樣品親和力強(qiáng)、固定效果好、易于去除等。常用Epon或Spurr樹脂。五、論述題答案與解析1.電鏡樣品制備過程中，固定劑的選擇原則及其對樣品結(jié)構(gòu)的影響答：固定劑的選擇原則包括：①與樣品組織親和力強(qiáng)，能快速滲透；②能有效固定細(xì)胞結(jié)構(gòu)，防止變形；③對樣品損傷??；④易于去除。常用的固定劑有戊二醛和鋨酸。戊二醛能固定蛋白質(zhì)，鋨酸能固定脂質(zhì)，兩者聯(lián)用效果更好。選擇不當(dāng)會導(dǎo)致樣品結(jié)構(gòu)模糊或變形，影響電鏡