ICS65.020.30

CCSB44

14

山西省地方標準

DB14/T2290—2021

實驗動物貓微生物等級與監(jiān)測

2021-07-20發(fā)布2021-10-20實施

山西省市場監(jiān)督管理局??發(fā)布

DB14/T2290—2021

目次

前言.......................................................................................................................................................................II

1范圍...................................................................................................................................................................1

2規(guī)范性引用文件...............................................................................................................................................1

3術語和定義.......................................................................................................................................................1

4等級分類...........................................................................................................................................................1

5檢測要求...........................................................................................................................................................1

6檢測程序...........................................................................................................................................................2

7檢測規(guī)則...........................................................................................................................................................3

8檢測方法...........................................................................................................................................................4

9結果判定...........................................................................................................................................................4

10報告.................................................................................................................................................................5

附錄A（規(guī)范性）貓泛白細胞減少癥病毒和貓皰疹病毒I型的多重PCR檢測方法.................................6

附錄B（規(guī)范性）貓杯狀病毒RT-PCR檢測方法...........................................................................................7

附錄C（規(guī)范性）貓血巴爾通體PCR檢測方法.............................................................................................8

附錄D（規(guī)范性）貓傳染性腹膜炎病毒巢式RT-PCR檢測方法...................................................................9

附錄E（規(guī)范性）貓免疫缺陷病毒巢式RT-PCR檢測方法.........................................................................10

附錄F（規(guī)范性）貓白血病病毒巢式RT-PCR檢測方法.............................................................................11

I

DB14/T2290—2021

前言

本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規(guī)則》的規(guī)定

起草。

本文件由山西省科學技術廳提出、歸口并監(jiān)督實施。

本文件起草單位：山西醫(yī)科大學。

本文件主要起草人：宋國華、軒瑞晶、陳朝陽、高繼萍、劉茂林、續(xù)國強、王曉堂、肖蘭飛。

II

DB14/T2290—2021

實驗動物貓微生物等級與監(jiān)測

1范圍

本文件規(guī)定了實驗動物貓（以下簡稱實驗貓）微生物等級與監(jiān)測的術語和定義、等級分類、檢測

要求、檢測程序、檢測規(guī)則、檢測方法、結果判定及報告。

本文件適用于普通級和SPF級實驗貓微生物等級與監(jiān)測。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，

僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T14926.1實驗動物沙門菌檢測方法

GB/T14926.4實驗動物皮膚病原真菌檢測方法

GB/T14926.14實驗動物金黃色葡萄球菌檢測方法

GB/T14926.46實驗動物鉤端螺旋體檢測方法

GB/T14926.56實驗動物狂犬病病毒檢測方法

NY/T541動物疫病實驗室檢驗采樣方法

3術語和定義

下列術語和定義適用于本文件。

實驗貓experimentalfeline

經人工飼育，對其攜帶的病原微生物和寄生蟲實行控制，遺傳背景明確或者來源清楚，用于科學研

究、教學、生產和檢定以及其他科學實驗的貓。

普通級貓conventional(CV)feline

不攜帶重要人獸共患病和貓烈性傳染病病原的實驗貓，簡稱普通貓。

無特定病原體級貓specificpathogenfree(SPF)feline

除普通級貓應排除的病原外，不攜帶所主要潛在感染或條件致病和對科學實驗干擾大的病原的實驗

貓，簡稱無特定病原體貓。

4等級分類

實驗貓分為普通級與無特定病原體級。

5檢測要求

1

DB14/T2290—2021

臨床觀察

對實驗貓的精神狀態(tài)、行為、被毛、分泌物進行檢查，觀察有無異常。

微生物檢測項目

各等級實驗貓病原微生物指標見表1。

表1各等級實驗貓微生物檢測項目

動物等級病原微生物檢測項目檢測要求

貓泛白細胞減少癥病毒Felinepanleukopeniavirus●

貓皰疹病毒I型Felineherpesvirustype1●

貓杯狀病毒Felinecalicivirus●

貓狂犬病毒Felinerabiesvirus●

普通級

沙門菌Salmonellaspp.●

貓巴爾通體Bartonella●

無特定病原體級

致病性鉤端螺旋體Leptospira●

皮膚病原真菌Pathogenicdermalfungi○

貓傳染性腹膜炎病毒Felineinfectiousperitonitisvirus●

金黃色葡萄球菌Staphylococcusaureus●

貓免疫缺陷病毒Felineimmunodeficiencyvirus○

貓白血病病毒Felineleukosisvirus○

注：●必須檢測項目；○必要時檢查項目。

檢測項目分類

微生物檢測項目分為必須檢測項目和必要時檢查項目。必須檢測項目是指在進行實驗貓質量評價時

必須檢測的項目。必要時檢查項目是指從省外或國外引進實驗貓，懷疑有寄生蟲流行感染或申請生產許

可證或實驗特殊需要時必須檢測的項目。

6檢測程序

檢測程序按圖1執(zhí)行。在采樣時，結合臨床癥狀和實驗室檢查結果，需要進一步確證的，可取特定

樣本進行檢測。

2

DB14/T2290—2021

圖1檢測程序

7檢測規(guī)則

檢測頻率

3

DB14/T2290—2021

普通級與無特定病原體級貓群至少每6個月檢測1次。

采樣

7.2.1方式

選擇成年實驗貓用于檢測（也可根據需求抽樣），隨機抽樣。新鮮糞便樣本應在飼養(yǎng)單元中選取至

少4個點隨機取樣。血液采樣量每只動物至少1mL。

7.2.2數量

根據實驗貓群體大小，抽樣數量見表2。

表2實驗貓抽樣量

群體大小（只）抽樣數量

小于100不少于5只

100～500不少于10只

大于500不少于15只

7.2.3方法

采樣方法遵守NY/T541第3章樣品的采集。受檢動物應當日采樣，可按病毒、細菌、真菌及寄生

蟲檢測要求聯(lián)合采樣。

送檢要求

樣本要求有明顯標識，包裝完好，送檢單應寫明檢品名稱、品系、等級、數量及檢測項目等內容，

安全送達送檢單位。

8檢測方法

貓泛白細胞減少癥病毒和貓皰疹病毒I型采用多重PCR方法檢測，見附錄A。

貓杯狀病毒采用RT-PCR方法檢測，見附錄B。

狂犬病病毒按GB/T14926.56的規(guī)定進行。

沙門氏菌按GB/T14926.1的規(guī)定進行。

貓巴爾通體采用PCR方法檢測，見附錄C。

鉤端螺旋體按GB/T14926.46的規(guī)定進行。

皮膚病原真菌按GB/T14926.4的規(guī)定進行。

貓傳染性腹膜炎病毒采用巢式RT-PCR方法檢測，見附錄D。

金黃色葡萄球菌按GB/T14926.14的規(guī)定進行。

貓免疫缺陷病毒采用巢式RT-PCR方法檢測，見附錄E。

貓白血病病毒采用巢式RT-PCR方法檢測，見附錄F。

9結果判定

4

DB14/T2290—2021

在檢測的各等級動物中，如有某項指標不符合該等級標準指標要求，則判為不符合該等級標準。

10報告

檢測結束出具報告，報告應包括檢測結果、檢驗結論等內容。

5

DB14/T2290—2021

A

A

附錄A

（規(guī)范性）

貓泛白細胞減少癥病毒和貓皰疹病毒I型的多重PCR檢測方法

采用PCR方法，特異性擴增貓泛白細胞減少癥病毒（FPV）的NS基因序列和貓皰疹病毒I型（FHV-I）

的TK基因序列，用于貓泛白細胞減少癥病毒和貓皰疹病毒I型的檢測。

A.1病毒DNA的提取

按照病毒DNA提取試劑盒操作方法進行，提取的DNA于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

A.2PCR反應引物

A.2.1貓泛白細胞減少癥病毒PCR反應引物

上游引物序列（5'-3'）：ATGGTTGGTGACTCTTTGTTT

下游引物序列（5'-3'）：TACATTTGATTGACACTTCCC

A.2.2貓皰疹病毒I型PCR反應引物

上游引物序列（5'-3'）：GACGTGGTGAATTATCAG

下游引物序列（5'-3'）：CAACTAGATTTCCACCAGG

A.3PCR反應條件

94℃變性5min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30個循環(huán)；72℃延伸10min。

A.4PCR產物

A.4.1檢測方法

1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物。

A.4.2產物大小

貓泛白細胞減少癥病毒目的片段大小為392bp；貓皰疹病毒I型目的片段大小為290bp。

6

DB14/T2290—2021

B

B

附錄B

（規(guī)范性）

貓杯狀病毒RT-PCR檢測方法

采用PCR方法，特異性擴增貓杯狀病毒（FCV）的ORF2基因序列，用于貓杯狀病毒的檢測。

B.1病毒RNA提取

按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

B.2反轉錄

使用反轉錄試劑盒對所提RNA進行反轉錄，制備cDNA。

B.3PCR反應引物

上游引物序列（5'-3'）：AACCTGCGCTAACGTGCTT

下游引物序列（5'-3'）：CAGTGACAATACACCCAGAA

B.4PCR反應條件

94℃預變性5min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸1min，30個循環(huán)；72℃延伸10min。

B.5PCR產物

B.5.1檢測方法

1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物。

B.5.2產物大小

貓杯狀病毒目的片段大小為922bp。

7

DB14/T2290—2021

C

C

附錄C

（規(guī)范性）

貓血巴爾通體PCR檢測方法

采用PCR方法，特異性擴增貓血巴爾通體16SrDNA基因片段，用于貓血巴爾通體的檢測。

C.1DNA提取

按照DNA提取試劑盒操作方法進行，提取的DNA于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

C.2PCR反應引物

上游引物序列（5'-3'）：TCACAATGGACGAAAGTCTG

下游引物序列（5'-3'）：CCAAACATCTCAAGACACGAG

C.3PCR反應條件

95℃預變性2min；95℃變性15s，55℃退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃延伸5min。

C.4PCR產物

C.4.1檢測方法

1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物。

C.4.2產物大小

貓血巴爾通體目的片段大小為711bp。

8

DB14/T2290—2021

D

D

附錄D

（規(guī)范性）

貓傳染性腹膜炎病毒巢式RT-PCR檢測方法

采用RT-PCR方法，特異性擴增貓傳染性腹膜炎病毒ORF1b基因片段，用于貓傳染性腹膜炎病毒的

檢測。

D.1病毒RNA提取

按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

D.2反轉錄

使用反轉錄試劑盒對所提RNA進行反轉錄，制備cDNA。

D.3PCR反應引物

上游引物序列（5'-3'）：GTGATGCTATCATGACTAG

下游引物序列（5'-3'）：CAGTGACAATACACCCAGAA

D.4PCR反應條件

95℃預變性2min；95℃變性30s，48℃退火35s，72℃延伸45s，30個循環(huán)；72℃延伸5min。

D.5PCR產物

D.5.1檢測方法

1%瓊脂糖凝膠電泳檢測PCR產物。

D.5.2產物大小

貓傳染性腹膜炎病毒目的片段大小為417bp。

9

DB14/T2290—2021

E

E

附錄E

（規(guī)范性）

貓免疫缺陷病毒巢式RT-PCR檢測方法

采用巢式RT-PCR方法，特異性擴增貓免疫缺陷病毒pol基因片段，用于貓免疫缺陷病毒的檢測。

E.1病毒RNA的提取

按照病毒RNA提取試劑盒操作方法進行，提取的RNA于-20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

E.2反轉錄

使用反轉錄試劑盒對所提RNA進行反轉錄，制備cDNA。

E.3PCR反應引物

E.3.1第一次反應引物

上游引物序列（5'-3'）：TGGCCWYTAWCWAATGAAAARATWGAAGC

下游引物序列（5'-3'）：GTAATTTRTCTTCHGGNGTYTCAAATCCCC

E.3.2第二次反應引物

上游引物序列（5'-3'）：TGAAAARATWGAAGCHTTAACAGAMATAG

下游引物序列（5'-3'）：GTAATTTRTCTTCHGGNGTYTCAAATCCCC

E.4PCR反應條件

E.4.1第一次PCR反應條件

以制備的cDNA為模板，進行第一次PCR反應，條件如下：95℃預變性2min；95℃變性45s，58℃

退火30s，72℃延伸1min，35個循環(huán)；72℃延伸7min。

E.4.2第二次PCR反應條件

以第一次PCR產物為模板，進行第二次PCR反應，條件如下：95℃預變性