基因技術(shù)行業(yè)基因測序技術(shù)員崗位招聘考試試卷及答案一、填空題（共10題，每題1分）1.目前主流的二代基因測序（NGS）技術(shù)是基于______的測序法。（邊合成邊）2.一代測序（Sanger）的核心原理是利用______終止DNA鏈延伸。（雙脫氧核苷酸）3.基因測序前常用______方法對DNA樣本進行片段化處理。（超聲打斷/酶切）4.illumina測序儀的核心技術(shù)是______擴增。（橋式PCR）5.測序數(shù)據(jù)質(zhì)量評估的常用指標是______（Q20/Q30）。（Q30）6.基因測序中“接頭”的主要作用是______。（連接測序引物/結(jié)合芯片）7.反轉(zhuǎn)錄測序（RNA-seq）需先將RNA轉(zhuǎn)化為______。（cDNA）8.測序儀的流動池（FlowCell）用于______。（固定DNA簇/擴增反應(yīng)）9.基因測序質(zhì)量控制（QC）中，常用______檢測核酸濃度。（Qubit/納米分光光度計）10.三代測序（如PacBio）的特點是______。（長讀長/單分子測序）二、單項選擇題（共10題，每題2分）1.以下哪項是Illumina測序的關(guān)鍵步驟？（）A.納米孔捕獲單鏈DNAB.橋式PCR擴增DNA簇C.焦磷酸測序檢測信號D.熒光標記的雙脫氧核苷酸摻入【答案：B】2.測序數(shù)據(jù)中“覆蓋度”指的是：（）A.測序讀長的平均長度B.目標區(qū)域被測序的平均次數(shù)C.數(shù)據(jù)中有效reads的比例D.測序錯誤率的倒數(shù)【答案：B】3.以下哪種試劑用于DNA樣本的純化？（）A.反轉(zhuǎn)錄酶B.AMPure磁珠C.dNTP混合液D.聚合酶【答案：B】4.一代測序（Sanger）的分辨率最高可達：（）A.100bpB.1000bpC.5000bpD.10000bp【答案：B】5.RNA測序前需去除的主要干擾物質(zhì)是：（）A.基因組DNAB.蛋白質(zhì)C.鹽離子D.引物二聚體【答案：A】6.測序儀的“簇生成”（ClusterGeneration）發(fā)生在：（）A.文庫構(gòu)建階段B.擴增階段C.測序反應(yīng)階段D.數(shù)據(jù)分析階段【答案：B】7.以下哪項不是NGS的常見應(yīng)用？（）A.全基因組測序（WGS）B.單細胞測序C.病毒分型D.蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)解析【答案：D】8.測序數(shù)據(jù)“接頭污染”主要源于：（）A.樣本核酸降解B.文庫構(gòu)建時接頭過量C.測序儀溫度波動D.數(shù)據(jù)分析參數(shù)錯誤【答案：B】9.三代測序（PacBio）的主要缺點是：（）A.讀長過短B.錯誤率較高C.通量過低D.成本過高【答案：B】10.基因測序?qū)嶒炇业摹皾崈魠^(qū)”主要用于：（）A.樣本前處理（如DNA提?。〣.文庫擴增（PCR）C.測序儀運行D.數(shù)據(jù)分析【答案：A】三、多項選擇題（共10題，每題2分，多選、錯選不得分）1.基因測序中“文庫構(gòu)建”的主要步驟包括：（）A.DNA片段化B.末端修復C.加接頭（Adapter）D.熒光標記【答案：ABC】2.以下屬于測序質(zhì)量控制（QC）指標的是：（）A.片段大小分布（AgilentBioanalyzer）B.測序深度（Depth）C.重復序列比例（DuplicationRate）D.樣本性別（XY染色體覆蓋）【答案：ABCD】3.測序過程中可能導致樣本交叉污染的原因有：（）A.移液槍未更換槍頭B.不同樣本共用同一管試劑C.實驗區(qū)域未分區(qū)（如前處理區(qū)與擴增區(qū)混用）D.測序儀流動池清洗不徹底【答案：ABCD】4.以下屬于二代測序（NGS）平臺的是：（）A.IlluminaNovaSeqB.PacBioSequelC.華大智造MGISEQ-2000D.OxfordNanoporeMinION【答案：AC】5.RNA測序（RNA-seq）需注意的關(guān)鍵點包括：（）A.避免RNA酶污染B.去除rRNA（核糖體RNA）C.樣本需新鮮或凍存于RNA保護液D.無需考慮基因組DNA污染【答案：ABC】6.測序數(shù)據(jù)“低質(zhì)量reads”的可能原因有：（）A.測序儀光學信號采集誤差B.文庫濃度過低C.接頭二聚體過多D.樣本降解嚴重【答案：ABCD】7.以下哪些操作符合基因測序?qū)嶒炇乙?guī)范？（）A.實驗前后用75%乙醇擦拭臺面B.戴手套操作，接觸不同樣本后更換手套C.擴增區(qū)（PCR）使用專用移液槍D.樣本管未蓋緊直接離心【答案：ABC】8.三代測序（長讀長）的優(yōu)勢包括：（）A.解決重復序列區(qū)域組裝難題B.檢測結(jié)構(gòu)變異（SV）更準確C.錯誤率低，無需校正D.適合小片段測序【答案：AB】9.基因測序中“索引（Index）”的作用是：（）A.區(qū)分不同樣本（多重測序）B.提高測序讀長C.減少測序錯誤D.輔助數(shù)據(jù)拆分（Demultiplexing）【答案：AD】10.以下哪些情況需要重新制備測序文庫？（）A.文庫片段大小不符合預期（如過短或過長）B.文庫濃度低于測序儀要求的最低值C.文庫Qubit濃度與NanoDrop濃度差異過大（污染）D.測序數(shù)據(jù)中目標區(qū)域覆蓋度達標【答案：ABC】四、判斷題（共10題，每題2分，正確填“√”，錯誤填“×”）1.一代測序（Sanger）適合大規(guī)模樣本的高通量測序。（×）2.NGS測序前必須對DNA樣本進行片段化，否則無法擴增。（√）3.測序儀的Q30值越高，說明數(shù)據(jù)中錯誤率越低。（√）4.RNA測序（RNA-seq）可以直接使用基因組DNA作為模板。（×）5.測序過程中，流動池（FlowCell）的溫度波動不會影響數(shù)據(jù)質(zhì)量。（×）6.文庫構(gòu)建時，接頭濃度過高會導致接頭二聚體污染。（√）7.三代測序（PacBio）無需PCR擴增，可直接讀取單分子DNA序列。（√）8.基因測序?qū)嶒炇抑?，前處理區(qū)（DNA提?。┖蛿U增區(qū)（PCR）可以共用同一套移液槍。（×）9.測序數(shù)據(jù)“GC偏向性”是指高GC或低GC區(qū)域測序覆蓋度異常。（√）10.測序完成后，原始數(shù)據(jù)（RawData）可直接用于變異分析，無需過濾。（×）五、簡答題（共4題，每題5分）1.簡述NGS文庫構(gòu)建的主要步驟。答案：主要步驟包括：①DNA片段化（超聲打斷或酶切至目標長度）；②末端修復（補平或加A尾）；③連接接頭（Adapter，用于結(jié)合測序引物和區(qū)分樣本）；④片段篩選（磁珠或電泳去除過小/過大片段）；⑤PCR擴增（富集帶接頭的DNA片段）；⑥質(zhì)量控制（檢測濃度、片段大小和純度）。2.測序數(shù)據(jù)中“Q20”和“Q30”的含義是什么？有何意義？答案：Q20表示測序堿基正確的概率為99%（錯誤率1%），Q30表示正確概率為99.9%（錯誤率0.1%）。Q值越高，數(shù)據(jù)質(zhì)量越好。實驗室通常要求Q30≥70%，以保證后續(xù)變異檢測（如SNP、Indel）的準確性。3.基因測序中如何避免樣本間的交叉污染？答案：①分區(qū)操作（前處理區(qū)、擴增區(qū)、測序區(qū)分開）；②使用帶濾芯槍頭，避免氣溶膠污染；③不同樣本操作時更換手套；④試劑分裝（避免反復取用同一管試劑）；⑤擴增后產(chǎn)物（如PCR產(chǎn)物）與前處理區(qū)域嚴格隔離；⑥定期清潔實驗臺面和儀器（如用DNA酶清除殘留核酸）。4.簡述一代測序（Sanger）與二代測序（NGS）的核心區(qū)別。答案：①通量：Sanger為低通量（單次反應(yīng)1個樣本），NGS為高通量（單次可測數(shù)萬樣本）；②讀長：Sanger讀長約1000bp，NGS讀長較短（50-300bp）；③原理：Sanger基于雙脫氧核苷酸終止法+毛細管電泳，NGS基于邊合成邊測序（如Illumina）或邊連接邊測序（如華大）；④應(yīng)用：Sanger用于小片段驗證（如基因克隆），NGS用于全基因組、轉(zhuǎn)錄組等大規(guī)模分析。六、討論題（共2題，每題5分）1.某實驗室測序數(shù)據(jù)中出現(xiàn)大量“接頭二聚體”，可能的原因有哪些？如何解決？答案：可能原因：①文庫構(gòu)建時接頭濃度過高；②DNA樣本量不足（片段化后DNA量少，導致接頭自連）；③連接反應(yīng)時間過長；④磁珠篩選時條件不當（未有效去除小片段）。解決措施：①優(yōu)化接頭與DNA的摩爾比（通常1:3-1:10）；②確保DNA輸入量符合要求（如Illumina建議100-500ng）；③縮短連接反應(yīng)時間（如從15分鐘調(diào)整為5分鐘）；④調(diào)整磁珠用量（如用0.8×磁珠去除小片段接頭二聚體）；⑤測序前通過電泳或Bioanalyzer檢測文庫片段大小，確認無異常峰。2.作為基因測序技術(shù)員，在實驗中發(fā)現(xiàn)某樣本的測序數(shù)據(jù)“覆蓋度不均”（部分區(qū)域無覆蓋，部分區(qū)域過深），你會如何排查原因？答案：排查步驟：①檢查樣本質(zhì)量：是否有降解（如DNA斷裂嚴重）、是否存在抑制物（如鹽離子、蛋白污染）；②文庫構(gòu)建環(huán)節(jié)：片段化是否均勻（超聲儀參數(shù)是否正常）、P