ICS67.120.10CCSB40DB36Determinationofamantadineresidueinanimalderivedfood——Quantumdotmicrospherelater江西省市場監(jiān)督管理局發(fā)布IDB36/Z002—2022 12規(guī)范性引用文件 13術(shù)語和定義 14原理 15試劑和材料 16儀器和設(shè)備 27試樣制備 28測定步驟 29結(jié)果表述 3 3DB36/Z002—2022本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。請注意本文件的某些內(nèi)容可能涉及專利。本文件的發(fā)布機(jī)構(gòu)不承擔(dān)識(shí)別專利的責(zé)任。本文件由江西省市場監(jiān)督管理局提出并歸口。本文件起草單位：南昌大學(xué)、江西省市場監(jiān)督管理局、江西省檢驗(yàn)檢測認(rèn)證總院、江西維邦生物科技有限公司。本文件主要起草人：賴衛(wèi)華、龔啟亮、郭平、余頤、彭娟、張威、熊華亮、熊勇華、陳媛、劉文娟、羅凱、李響敏、黃小林、唐麗君、張干、舒馨潓、翟文莉、程昱、熊佳、盧俊。DB36/Z002—20221動(dòng)物源性食品中金剛烷胺的檢測量子點(diǎn)微球熒光免疫層析法本文件規(guī)定了動(dòng)物源性食品中金剛烷胺殘留量的量子點(diǎn)微球熒光免疫層析檢測方法。本文件適用于雞肉、雞蛋和豬肉中金剛烷胺的快速檢測。本方法檢測金剛烷胺的檢出限為0.1μg/kg，定量限為0.3μg/kg。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB31660.5食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)動(dòng)物性食品中金剛烷胺殘留量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法3術(shù)語和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語和定義。4原理本方法以量子點(diǎn)微球?yàn)闊晒鈽?biāo)記物，基于競爭抑制免疫層析技術(shù)原理，通過熒光免疫分析儀進(jìn)行數(shù)據(jù)讀取和分析，根據(jù)已設(shè)定的標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中待測物質(zhì)的含量，對動(dòng)物源性食品中金剛烷胺進(jìn)行定量檢測。5試劑和材料除另有說明外，本方法所用試劑均為分析純，水為GB/T6682規(guī)定的二級水。5.1乙酸乙酯(CH3COOC2H5)。5.2正己烷(C6H14)。5.3二水合磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）。5.4十二水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。5.5氯化鈉（NaCl）。5.6磷酸二氫鉀（KH2PO4）。5.7氯化鉀（KCl）。5.8鹽酸（HCl）。5.9氫氧化鈉（NaOH）。5.10試樣提取劑A：稱取8.0g氯化鈉（5.5）、0.2g磷酸二氫鉀（5.6）、0.2g氯化鉀（5.7）、2.9g十二水合磷酸氫二鈉（5.4），加入約500mL水溶解，再加入鹽酸（5.8）溶液0.5mL，加水定容至1L。DB36/Z002—202225.11試樣提取劑B：稱取20.0g氫氧化鈉（5.9），加入約900mL水溶解混勻，定容至1L。5.12試樣復(fù)溶液磷酸鹽緩沖液（10mmol/L，pH7.0）：稱取8.0g氯化鈉（5.5）、2.77g十二水合磷酸氫二鈉（5.4）、0.352g二水合磷酸二氫鈉（5.3），用水溶解并定容至1L。6儀器和設(shè)備6.1分析天平：感量為0.01g。6.2微量移液器：20μL～200μL、100μL～1000μL和1mL～10mL。6.3旋渦混合器：轉(zhuǎn)速≥2500r/min。6.4恒溫孵育器：設(shè)定孵育溫度為37℃,誤差不超過±1℃。6.5熒光免疫分析儀：激發(fā)波長為365nm±5nm，發(fā)射波長為610nm±5nm。6.6樣品濃縮儀：設(shè)定溫度誤差不超過±1℃。6.7均質(zhì)機(jī)：轉(zhuǎn)速≥5000r/min。6.8離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6.9離心管：10mL和50mL。6.10金剛烷胺量子點(diǎn)微球免疫層析包裝盒：含量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條和標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)置卡（ID卡ID卡內(nèi)設(shè)對應(yīng)批次標(biāo)準(zhǔn)曲線。7試樣制備7.1試樣制備稱取約200g具有代表性的組織或禽蛋（去殼）樣品，充分均質(zhì)混勻，均分成兩份分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標(biāo)記。留樣置于-20℃保存。7.2試樣前處理7.2.1準(zhǔn)確稱取試樣2g（精確至0.01g）于50mL離心管中。7.2.2加入2mL試樣提取劑A（5.10），渦旋振蕩2min，加入1mL試樣提取劑B（5.11），渦旋振蕩30s，最后準(zhǔn)確加入4mL乙酸乙酯（5.1），手動(dòng)振蕩混勻30s，使用離心機(jī)（6.8）4000rpm離心2min或靜置5min待溶液分層。7.2.3準(zhǔn)確吸取2mL上清液于10mL離心管中，于65℃用樣品濃縮儀（6.6）吹干。7.2.4加入1mL正己烷（5.2），漩渦振蕩混勻10s，加入500μL試樣復(fù)溶液（5.12），輕輕顛倒混勻，確保離心管壁上的殘留均能被試樣復(fù)溶液混勻（請勿振蕩）。7.2.5靜置1min，溶液分層后下層液體為待測液。注：不同廠家量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條所用的樣品前處理方法可8測定步驟8.1測試前打開熒光免疫分析儀（6.5），確認(rèn)包裝盒中的ID卡與產(chǎn)品批號是否匹配，插入ID卡，在儀器測試界面點(diǎn)擊“讀卡/讀項(xiàng)目”，界面出現(xiàn)“讀取完成”，點(diǎn)擊“確認(rèn)”即可使用。8.2將恒溫孵育器（6.4）開機(jī)，待溫度升至37℃即可使用。8.3從密封包裝袋中取出金剛烷胺量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條，在30min內(nèi)使用。DB36/Z002—202238.4將試紙條平放，用微量移液器吸取90μL待測液于量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條的加樣孔（S）中，在恒溫孵育器中37℃孵育反應(yīng)10min。8.5反應(yīng)時(shí)間結(jié)束后立即將金剛烷胺量子點(diǎn)微球免疫層析試紙條插入熒光免疫分析儀中，點(diǎn)擊儀器界面的“測試”，儀器會(huì)自動(dòng)給出定量測試結(jié)果，15min內(nèi)測試，結(jié)果有效。注：不同廠家熒光免疫分析儀所用儀器界面設(shè)置可能不同，應(yīng)9結(jié)果表述試樣中金剛烷胺的含量由熒光免疫分析儀自動(dòng)計(jì)算并顯示，單位為微克/千克(μg/kg）。10其他10.1注意事項(xiàng)：使用前請