病理科石蠟切片診斷診療指南與技術(shù)操作規(guī)范一、引言病理科石蠟切片診斷是臨床疾病診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”，對于明確疾病的性質(zhì)、指導(dǎo)治療方案的制定以及判斷預(yù)后等方面具有至關(guān)重要的意義。本診療指南與技術(shù)操作規(guī)范旨在為病理科工作人員提供全面、系統(tǒng)、科學(xué)的石蠟切片診斷及相關(guān)技術(shù)操作指導(dǎo)，以確保診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性。二、標(biāo)本采集與處理（一）標(biāo)本采集1.手術(shù)標(biāo)本手術(shù)標(biāo)本的采集應(yīng)遵循無菌操作原則，確保標(biāo)本的完整性。手術(shù)醫(yī)生在切除病變組織時(shí)，應(yīng)盡量完整地獲取標(biāo)本，避免擠壓、損傷標(biāo)本。對于較大的標(biāo)本，可根據(jù)病變的部位、大小等情況進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆指?，但要做好?biāo)記，以便后續(xù)的病理檢查。例如，在切除肝臟腫瘤時(shí)，若腫瘤較大，可將腫瘤及其周圍的部分正常組織一并切除，并在標(biāo)本上用縫線或墨水標(biāo)記出腫瘤的邊界、切緣等重要信息。2.穿刺標(biāo)本穿刺標(biāo)本主要用于獲取深部組織或難以通過手術(shù)切除的病變組織。穿刺操作應(yīng)在超聲、CT等影像學(xué)引導(dǎo)下進(jìn)行，以提高穿刺的準(zhǔn)確性和安全性。穿刺針的選擇應(yīng)根據(jù)病變的性質(zhì)、大小和部位等因素綜合考慮。一般來說，對于實(shí)質(zhì)性病變，可選用18G22G的穿刺針；對于囊性病變，可選用較細(xì)的穿刺針。穿刺時(shí)應(yīng)注意避免穿破血管、神經(jīng)等重要結(jié)構(gòu)，穿刺結(jié)束后，應(yīng)及時(shí)將標(biāo)本放入固定液中。3.內(nèi)鏡標(biāo)本內(nèi)鏡檢查是獲取消化道、呼吸道等部位病變組織的常用方法。在內(nèi)鏡檢查過程中，應(yīng)準(zhǔn)確鉗取病變組織，避免鉗取壞死組織或正常組織。鉗取的標(biāo)本應(yīng)立即放入固定液中，防止標(biāo)本干燥、自溶。如果一次鉗取的標(biāo)本數(shù)量較多，應(yīng)將不同部位的標(biāo)本分別固定，并做好標(biāo)記，以便準(zhǔn)確判斷病變的范圍和性質(zhì)。（二）標(biāo)本固定1.固定液的選擇最常用的固定液是10%中性福爾馬林，它具有固定效果好、價(jià)格低廉、易于保存等優(yōu)點(diǎn)。其配制方法為：取40%甲醛溶液100ml，加入蒸餾水900ml，再加入適量的磷酸二氫鈉和磷酸氫二鈉調(diào)節(jié)pH值至7.07.4。對于一些特殊的標(biāo)本，如需要進(jìn)行免疫組織化學(xué)檢查的標(biāo)本，可選用其他固定液，如Bouin液、Carnoy液等，但這些固定液的使用應(yīng)根據(jù)具體的檢查項(xiàng)目和要求進(jìn)行選擇。2.固定時(shí)間標(biāo)本的固定時(shí)間應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的大小、厚度等因素而定。一般來說，小標(biāo)本（如穿刺標(biāo)本、內(nèi)鏡活檢標(biāo)本）的固定時(shí)間為46小時(shí)，大標(biāo)本（如手術(shù)切除標(biāo)本）的固定時(shí)間為2448小時(shí)。如果固定時(shí)間過短，標(biāo)本固定不充分，會影響后續(xù)的脫水、透明和浸蠟等處理；如果固定時(shí)間過長，標(biāo)本會變得過硬，切片時(shí)容易出現(xiàn)破碎、皸裂等問題。3.固定方法將標(biāo)本放入盛有固定液的容器中，固定液的量應(yīng)至少為標(biāo)本體積的510倍。對于較大的標(biāo)本，可在標(biāo)本上切幾個(gè)小口，以利于固定液的滲透。固定過程中，應(yīng)確保標(biāo)本完全浸沒在固定液中，避免標(biāo)本與容器壁或其他物體接觸造成擠壓。三、標(biāo)本脫水（一）脫水劑的選擇常用的脫水劑有乙醇、丙酮等，其中乙醇是最常用的脫水劑。乙醇具有脫水能力強(qiáng)、對組織損傷小等優(yōu)點(diǎn)。根據(jù)脫水的不同階段，可選用不同濃度的乙醇，一般從低濃度到高濃度依次進(jìn)行脫水。（二）脫水步驟1.將固定好的標(biāo)本從固定液中取出，用蒸餾水沖洗干凈，然后依次放入不同濃度的乙醇中進(jìn)行脫水。2.脫水程序一般為：70%乙醇24小時(shí)，80%乙醇24小時(shí)，90%乙醇24小時(shí)，95%乙醇24小時(shí)，無水乙醇Ⅰ24小時(shí)，無水乙醇Ⅱ24小時(shí)。對于一些質(zhì)地較硬或體積較大的標(biāo)本，脫水時(shí)間可適當(dāng)延長；對于一些質(zhì)地較軟或體積較小的標(biāo)本，脫水時(shí)間可適當(dāng)縮短。四、透明（一）透明劑的選擇常用的透明劑有二甲苯、氯仿、甲苯等，其中二甲苯是最常用的透明劑。它具有透明速度快、能與乙醇和石蠟互溶等優(yōu)點(diǎn)。（二）透明步驟將脫水后的標(biāo)本從無水乙醇中取出，放入二甲苯Ⅰ中24小時(shí)，再放入二甲苯Ⅱ中24小時(shí)，直至標(biāo)本完全透明。透明過程中，應(yīng)注意觀察標(biāo)本的透明度，避免透明過度或不足。如果透明過度，標(biāo)本會變得過于脆弱，切片時(shí)容易破碎；如果透明不足，標(biāo)本中的乙醇不能完全被透明劑取代，會影響后續(xù)的浸蠟效果。五、浸蠟（一）石蠟的選擇應(yīng)選擇熔點(diǎn)適宜、純度高、硬度適中的石蠟。一般來說，對于常溫切片，可選用熔點(diǎn)為5658℃的石蠟；對于冰凍切片，可選用熔點(diǎn)較低的石蠟。（二）浸蠟步驟將透明后的標(biāo)本從二甲苯中取出，放入已熔化的石蠟Ⅰ中24小時(shí)，再放入石蠟Ⅱ中24小時(shí)，最后放入石蠟Ⅲ中24小時(shí)。浸蠟過程中，應(yīng)確保石蠟的溫度恒定，避免石蠟?zāi)獭Ａ?、包埋（一）包埋模具的選擇常用的包埋模具為金屬包埋模具或塑料包埋模具，應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的大小和形狀選擇合適的包埋模具。（二）包埋操作1.將熔化的石蠟倒入包埋模具中，然后迅速將標(biāo)本放入模具中，注意標(biāo)本的擺放方向和位置，使其切面朝上，便于后續(xù)的切片。2.用鑷子輕輕調(diào)整標(biāo)本的位置，使其處于模具的中央，然后將包埋模具放在冷臺上，待石蠟?zāi)毯?，將包埋塊從模具中取出。七、切片（一）切片機(jī)的選擇與調(diào)試應(yīng)選擇性能穩(wěn)定、切片質(zhì)量好的切片機(jī)，如輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)。在切片前，應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的硬度和切片的厚度要求，對切片機(jī)進(jìn)行調(diào)試。一般來說，石蠟切片的厚度為46μm。（二）切片操作1.將包埋塊安裝在切片機(jī)的標(biāo)本夾上，調(diào)整切片機(jī)的切片厚度和速度。2.開始切片時(shí)，應(yīng)先切去包埋塊表面的多余石蠟，露出標(biāo)本組織，然后進(jìn)行連續(xù)切片。切片過程中，應(yīng)保持切片機(jī)的穩(wěn)定，避免切片出現(xiàn)褶皺、斷裂等問題。3.用毛筆輕輕將切下的切片從切片刀上取下，放入溫水中展平，然后用載玻片將切片撈起，使其平整地貼附在載玻片上。八、染色（一）蘇木精伊紅（HE）染色1.脫蠟與水化將貼有切片的載玻片放入二甲苯Ⅰ中510分鐘，再放入二甲苯Ⅱ中510分鐘，以去除切片中的石蠟。然后依次放入無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ、95%乙醇、90%乙醇、80%乙醇、70%乙醇中各23分鐘，進(jìn)行水化處理。2.蘇木精染色將水化后的切片放入蘇木精染液中染色510分鐘，然后用自來水沖洗切片，使切片返藍(lán)。3.伊紅染色將返藍(lán)后的切片放入1%伊紅染液中染色23分鐘，然后用自來水沖洗切片，去除多余的染液。4.脫水、透明與封片將染色后的切片依次放入95%乙醇Ⅰ、95%乙醇Ⅱ、無水乙醇Ⅰ、無水乙醇Ⅱ中各23分鐘，進(jìn)行脫水處理。然后放入二甲苯Ⅰ中510分鐘，再放入二甲苯Ⅱ中510分鐘，進(jìn)行透明處理。最后用中性樹膠封片，蓋上蓋玻片。（二）特殊染色根據(jù)診斷的需要，可進(jìn)行一些特殊染色，如免疫組織化學(xué)染色、原位雜交染色等。特殊染色的操作應(yīng)嚴(yán)格按照相應(yīng)的試劑盒說明書進(jìn)行。例如，免疫組織化學(xué)染色主要用于檢測腫瘤細(xì)胞中的特定抗原或抗體，其操作步驟包括：脫蠟與水化、抗原修復(fù)、封閉內(nèi)源性過氧化物酶、一抗孵育、二抗孵育、顯色、復(fù)染、脫水、透明與封片等。九、診斷報(bào)告（一）報(bào)告內(nèi)容病理診斷報(bào)告應(yīng)包括患者的基本信息（姓名、性別、年齡、住院號等）、標(biāo)本來源（手術(shù)標(biāo)本、穿刺標(biāo)本等）、標(biāo)本檢查情況（標(biāo)本的大小、形狀、顏色等）、病理診斷結(jié)果等。病理診斷結(jié)果應(yīng)明確、準(zhǔn)確，對于良性病變和惡性病變應(yīng)進(jìn)行清晰的區(qū)分，并盡可能給出具體的病理類型和分級。（二）報(bào)告審核與簽發(fā)病理診斷報(bào)告應(yīng)由具有中級以上職稱的病理醫(yī)師進(jìn)行審核，審核無誤后，由審核醫(yī)師簽發(fā)報(bào)告。報(bào)告簽發(fā)后，應(yīng)及時(shí)將報(bào)告發(fā)送給臨床科室。十、質(zhì)量控制（一）標(biāo)本質(zhì)量控制確保標(biāo)本的采集、固定、脫水、透明、浸蠟、包埋等過程符合規(guī)范要求，避免標(biāo)本出現(xiàn)自溶、壞死、擠壓等問題。定期對標(biāo)本的質(zhì)量進(jìn)行檢查和評估，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)整改。（二）切片質(zhì)量控制定期檢查切片機(jī)的性能，確保切片的厚度均勻、無褶皺、無斷裂等。對切片的質(zhì)量進(jìn)行評估，如切片的平整度、染色的均勻度等，不符合質(zhì)量要求的切片應(yīng)重新制作。（三）診斷質(zhì)量控制建立病理診斷會診制度，對于疑難病例或診斷不明確的病例，應(yīng)組織多名病理醫(yī)師進(jìn)行會診，以提高診斷的準(zhǔn)確性。定期對病理診斷報(bào)告進(jìn)行質(zhì)量檢查，分析診斷誤差的原因，采取相應(yīng)的改進(jìn)措施。十一、安全防護(hù)（一）化學(xué)試劑的安全使用在使用甲醛、二甲苯、乙醇等化學(xué)試劑時(shí)，應(yīng)嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，佩戴手套、口罩等防護(hù)用品，避免皮膚接觸和吸入有害氣體?；瘜W(xué)試劑應(yīng)妥善保存，避免泄漏和揮發(fā)。（二）生物安全防護(hù)對于含有病原體的標(biāo)本，應(yīng)按照生物安全的相關(guān)規(guī)定進(jìn)行處理，防止病原體的傳播。在操作過程中，應(yīng)避免標(biāo)本的濺出和污染，操作結(jié)束后，應(yīng)對工作區(qū)域進(jìn)行徹底的消毒。十二、人員培訓(xùn)（一）專業(yè)知識培訓(xùn)定期組織病理科工作人