1、槐米中蘆丁的提取與鑒定一、摘要：蘆丁是一種分布廣泛的黃酮類化合物。目前主要用于治療毛細(xì)血管脆性減弱和滲透性增強(qiáng)所致的出血，蘆丁還可降低人體血脂和膽固醇并具有抗菌和抗放射作用。國(guó)外主要用作食品、化妝品的添加劑和著色劑。文獻(xiàn)報(bào)道的槐米中提取蘆丁的方法較多。本實(shí)驗(yàn)通過煮沸槐米與水的混合物得到粗蘆丁的水溶液，然后利用硅膠色譜柱法得到產(chǎn)物蘆丁。關(guān)鍵詞：槐米 蘆丁 硅膠色譜柱 層板二、引言蘆丁（Rutin）又稱蕓香苷，廣泛存在于植物界中，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)含蘆丁的植物至少在70種以上，如煙葉、槐花、蕎麥和蒲公英中均含有。尤以槐花米（為植物Sophora japonicaL的未開放的花蕾）和蕎麥中含量最高(含量可達(dá)1

2、2-16%)，可作為大量提取蘆丁的原料。蘆丁是由斛皮素（Quercetin）3位上的羥基與蕓香糖（Rutinose）葡萄糖（Glucose）與鼠李糖（Rhamnose）組成的雙糖脫水形成的苷。 蘆丁為淺黃色粉末或極細(xì)的針狀結(jié)晶，含有3分子的結(jié)晶水，熔點(diǎn)為174178，無水物188190。溶解度：冷水中為1:10 000；沸水中1:200；冷乙醇1:650；熱乙醇1:60；冷吡啶1:12。微溶于丙酮、乙酸乙酯，不溶于苯、乙醚、氯仿、石油醚，溶于堿而呈黃色。 蘆丁分子中具有較多酚羥基，顯弱酸性，易溶于堿液，酸化后又可析出，因此，本實(shí)驗(yàn)采用堿提取酸沉淀法提取蘆丁。蘆丁具有維生素P樣作用。能維持血管的

3、正常通透性，減低血管的脆性，縮短流血時(shí)間，可作為高血壓病的輔助治療劑。亦可用于防治因缺乏蘆丁所致的其他出血癥。三、實(shí)驗(yàn)儀器與試劑 【儀器】紫外燈 蒸餾裝置一套 250ml燒杯（一只） 500ml燒杯（兩只） 100ml三角瓶（一只） 紗布 色譜柱（1.530cm） 玻璃板（520cm 3片 2.57.5 8片） 【試劑】硅膠 層析用聚酰胺（60100目） 甲醇 70%工業(yè)乙醇 槐米 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容與步驟1.蘆丁的提取將粉碎好的槐米12g倒入500ml燒杯中，加沸水150ml，煮沸1h（在煮沸的過程中，可補(bǔ)加水），趁熱用紗布過濾，殘?jiān)屑尤?00ml水，再煮沸30min，共進(jìn)行兩次，將兩

4、次濾液合并，放置，冷卻。即有大量黃色沉淀生成，抽濾。1 提取250ml燒杯紗布過濾 150ml沸水，12g槐米 煮沸，1h 合并濾液紗布過濾 濾 渣1000ml沸水，煮沸30min 冷卻抽濾 得粗產(chǎn)品 2.蘆丁的提純將以上得到的粗蘆丁純品約1g，加甲醇58ml，使之溶解，再加柱層析用硅膠（60100目）34g，用刮刀輕輕攪拌，在水浴上趕去甲醇（通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行），待用。將色譜柱垂直大部分在鐵架臺(tái)上，關(guān)閉柱塞（不要涂油脂），加蒸餾水約至色譜柱一半高，將1g層析用聚酰胺（60100目）倒在燒杯中，加蒸餾水50ml，輕輕轉(zhuǎn)搖拌和均勻（不要用攪棒攪動(dòng)，防止顆粒太細(xì)），再打開柱塞使柱內(nèi)不斷流出的同時(shí)，把燒杯

5、內(nèi)聚酰胺緩緩加入，邊加邊用套有橡皮管的玻璃棒輕輕敲打色譜柱，使填料裝填均勻，無氣泡。當(dāng)色譜柱頂部下降到距聚酰胺層高約1.5cm時(shí)，關(guān)閉柱塞。將上述拌好硅膠的粗蘆丁樣品加入柱內(nèi)，用刮刀輕輕鋪平，勿有氣泡，再蓋上剪好的圓形濾紙。用70%工業(yè)乙醇洗脫，當(dāng)有淡黃色的液體從柱下流出時(shí)開始收集洗脫液，每次約25ml，共6瓶，依次編好接收瓶號(hào)。取2.57.5cm的硅膠G板，每板上點(diǎn)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)樣與接受瓶中的溶液，放入層析缸中，加蓋，進(jìn)行展開（展開劑為：乙酸乙酯：丁酮：甲酸：水=5:3:3:1,當(dāng)展開劑前沿距板端約1cm時(shí)，去出，晾干。2 硅膠涂板3g硅膠烘箱11030min自然晾干涂片 于研缽中研細(xì)7ml0.7

6、%CMC3 提純揮干甲醇備用拌勻溶解0.8g粗品 3-4ml甲醇 1g柱層析硅膠 每瓶25ml洗 脫 5g聚酰胺裝柱 適量去離子水 敲打 70%乙醇 上樣 蒸餾濃縮晾干 得產(chǎn)品 點(diǎn)板 冷卻 抽濾 在紫外燈下觀察斑點(diǎn)，將只含蘆丁的接受瓶溶液合并入一圓底燒瓶中，蒸餾，蒸去大部分溶劑后（約留25ml溶液），趨熱傾入一只100ml的三角瓶?jī)?nèi)，冷卻即有蘆丁析出，抽濾，晾干，計(jì)算收率。五、結(jié)果與討論 蘆丁粗產(chǎn)品M=0.7g 蘆丁純產(chǎn)品m=0.4g收率=m/M*100%=57%六、附錄1.層析的基本知識(shí)層析（chromatography）是“色層分析”的簡(jiǎn)稱。利用各組分物理性質(zhì)的不同，將多組分混合物進(jìn)行分離

7、及測(cè)定的方法。有吸附層析、分配層析兩種。一般用于有機(jī)化合物、金屬離子、氨基酸等的分析。層析利用物質(zhì)在固定相與流動(dòng)相之間不同的分配比例，達(dá)到分離目的的技術(shù)。層析對(duì)生物大分子如蛋白質(zhì)和核酸等復(fù)雜的有機(jī)物的混合物的分離分析有極高的分辨力。色譜法：利用不同物質(zhì)在不同相態(tài)的選擇性分配，以流動(dòng)相對(duì)固定相中的混合物進(jìn)行洗脫，混合物中不同的物質(zhì)會(huì)以不同的速度沿固定相移動(dòng)，最終達(dá)到分離的效果。色譜法本質(zhì)是待分離物質(zhì)分子在固定相和流動(dòng)相之間分配平衡的過程，不同的物質(zhì)在兩相之間的分配會(huì)不同，這使其隨流動(dòng)相運(yùn)動(dòng)速度各不相同，隨著流動(dòng)相的運(yùn)動(dòng)，混合物中的不同組分在固定相上相互分離。2. 柱上層析上一個(gè)上層析是最原始的色

8、譜方法，這種方法將固定相注入下端塞有棉花或?yàn)V紙的玻璃管中，將被樣品飽和的固定相粉末攤鋪在玻璃管頂端，以流動(dòng)相洗脫。常見的洗脫方式有兩種，一種是自上而下依靠溶劑本身的重力洗脫，一種是自下而上依靠毛細(xì)作用洗脫。收集分離后的純凈組分也有兩種不同的方法，一種方法是在柱尾直接接受流出的溶液，另一種方法是烘干固定相后用機(jī)械方法分開各個(gè)色帶，以合適的溶劑浸泡固定相提取組分分子。柱色譜法被廣泛應(yīng)用于混合物的分離，包括對(duì)有機(jī)合成產(chǎn)物、天然提取物以及生物大分子的分離。本實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵是：裝柱要緊密，要求無斷層、無縫隙；在裝柱、洗脫過程中，始終保持有溶劑覆蓋吸附劑；一個(gè)色帶與另一色帶的洗脫液的接受不要交叉。七、問題

9、與討論 1、為什么從槐米中提取蘆丁時(shí)開始不能加冷水慢慢煮沸，而要直接加沸水提取？ 答：避免在提取過程中黃酮苷類化合物發(fā)生分解，故用沸水事先破壞其酶的活性。2、蘆丁和其甙元槲皮素在聚酰胺柱色譜上用70%工業(yè)乙醇洗脫時(shí)，哪個(gè)先被洗脫下來？ 答：聚酰胺是一種常用的吸附劑，其分子中存在許多酰胺鍵，可與酚類酸類醌類硝基類化合物形成氫鍵締合而產(chǎn)生吸附作用；又由于不同結(jié)構(gòu)的化合物與聚酰胺形成氫鍵的能力不同因而產(chǎn)生的吸附力大小也不相同，所以聚酰胺特別適合用來分離上述化合物。蘆丁和槲皮素均屬于黃酮類化合物，前者為黃酮苷，后者是其苷元，蘆丁分子中有4個(gè)酚羥基能與聚酰胺形成氫鍵，二槲皮素分子中則有5個(gè)羥基能與聚酰胺形成請(qǐng)柬，因此后者比前者吸附更牢固。選用乙醇進(jìn)行洗脫，蘆丁先出柱，槲皮素后出柱，從而達(dá)到分離的目的。