1、實驗一CTAB法提取植物基因組DNA實驗的目的：學習從植物組織中提取基因組DNA的基本原理和方法。實驗原理：用機械研磨的方法粉碎植物的組織和細胞，植物細胞的勻漿中含有很多酶類(特別是氧化酶類)，會對DNA的提取產生不良影響，所以在提取緩沖液中添加抗氧化劑和強還原劑(如巰基乙醇)，使這些酶類的活性降低。 在液氮中研磨，材料容易損壞，研磨中各種酶類的作用減少。CTAB (hexadecyltrimethylamioniumbromide，十六烷基三甲基溴化銨)是一種陽離子除污劑，能溶解細胞膜，與核酸形成復合體。該復合體在高鹽溶液中(0.7mol/L NaCl )可溶，用有機溶劑提取除去蛋白、多糖類

2、、酚類等雜質后，加入乙醇沉淀(CTAB可溶于乙醇)就能分離核酸。由于CTAB溶液在低于15度時會沉淀溶出，所以在加入冷植物材料之前必須進行預熱(65度)，離心溫度不能低于15度。實驗步驟：取年輕植物的葉子(3-5g )將液氮粉碎，放入離心管內1.5ml。 加入同體積的65預熱的DNA提取緩沖液，在65的恒溫水浴床上放置1-2h(1.5h )。加入2，等體積的氯仿：異丙醇(24:1 )，輕輕上下顛倒5分鐘，靜置5分鐘，然后以12000rpm離心10分鐘。3、吸取上層水相，重復步驟2一次。4、吸入上層水相，加入預冷的2/3體積的異丙醇，輕輕翻轉2分鐘，放入-20的冰箱10分鐘，DNA沉淀后以120

3、00rpm離心收集，收集到的DNA用70%乙醇洗23次。 扔掉乙醇，在風干的DNA中加入適量的水使之溶解。5、DNA完全溶解后，加入不含RNAasea的12l(10mg/ml )，在37下保溫1h，去除DNA中的RNA。6、在Eppendorf管中加入1mL氯仿：異丙醇(24:1 )，輕輕上下反轉10分鐘后，以10000rpm離心10分鐘。7、吸入上層水相，加入1/10體積的3M乙酸鈉和2倍體積的預冷無水乙醇，放入-20冰箱中，10分鐘后以10000rpm離心10分鐘，丟棄無水乙醇，加入70%乙醇洗滌23次，風干，最后8.DNA完全溶解后，進行1%瓊脂糖凝膠電泳，檢查DNA的質量，根據已知的D

4、NA分子量標準來估計其濃度。 調整過濃度的DNA在-20下預備使用。實驗試劑：1，1米三級HCl (ph8.0)121.1g Tris溶解于800ml無菌水中，加入HCL將pH調節(jié)到8.0，定容調節(jié)到1L，進行高壓滅菌。2，0.5m EDTA (ph 8.0 )186.1g EDTA-Na2H2O溶解于800ml無菌水中，用磁力攪拌器激烈攪拌，用NaOH將pH調節(jié)到8.0 (約20g )，定容至1L，進行高壓滅菌。3，3.5m NaCl204.75g NaCL溶解于1L無菌水中，進行高壓滅菌。4，10 % CTAB溶液10gCTAB溶解于80ml無菌水中，定容至100mL，進行高壓滅菌。5、DNA提取液(500ml )3.5米NaCl200毫升TRISS-HCl50毫升PS50毫升10 % PS100毫升Water100毫升6、氯仿-異丙醇(24:1體積比)七、RNA東盟8、異丙醇9、無水乙醇10，3m乙酸鈉11、1TE緩沖液實驗器具：液氮罐，離心管1.5ml，離心架1.5ml，恒溫水浴床，槍和槍口(1ml和200ul )，離心分離機(轉速可調整為4000rpm和10000rpm )，剪刀注意事項(1)葉片越磨越好。(2)移液管的使用