1、.,結(jié)核分支桿菌培養(yǎng),.,講述內(nèi)容：一、痰標(biāo)本的采集二、結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)操作規(guī)程,.,結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)是結(jié)核病診斷細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)的重要內(nèi)容之一（另外是“抗酸桿菌涂片檢查法”）這里我只講結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)。 講之前我還是要強(qiáng)調(diào)下要保護(hù)好自己（即生物安全問題）。結(jié)核分支桿菌是怎樣傳播我想你們比我懂，由于時(shí)間關(guān)系，這里也不展開講，進(jìn)入正題,.,一、痰標(biāo)本的采集,1、痰標(biāo)本的種類 根據(jù)痰標(biāo)本采集時(shí)間，可將標(biāo)本分為3類： （1）即時(shí)痰：就診時(shí)深呼吸后咳出的痰液； （2）清晨痰：患者晨起立即用清水漱口后咳 出的第2口、第3口痰液； （3）夜間痰：送痰前一日患者晚間咳出的痰液。,.,2、正確的咳痰方法：,（1）咳

2、嗽前應(yīng)緩慢的深吸氣，吸氣后稍屏氣片刻。 （2）軀干略向前傾，兩側(cè)手臂屈曲，平放在兩側(cè)胸壁下部，內(nèi)收并稍加力。 （3） 咳嗽時(shí)腹肌用力快速收縮，使腹壁內(nèi)陷。一次深吸氣可連續(xù)咳嗽三聲。 （4）停止咳嗽并收縮將剩余的氣體盡量呼盡。 （5）在緩慢吸氣或平靜呼吸片刻，準(zhǔn)備再次咳嗽的動(dòng)作。 （6）勿將漱口水、唾液、嘔吐物、鼻咽分泌物等混入痰內(nèi)，以免影響檢驗(yàn)結(jié)果。如標(biāo)本不合格，檢驗(yàn)人員應(yīng)當(dāng)拒收，并和臨床醫(yī)生對接，重新采樣。 （7）標(biāo)本量一般在35毫升。,.,3、痰標(biāo)本的保存和輸送,痰標(biāo)本容器密封，勿倒置，嚴(yán)防痰液外溢。不能立即培養(yǎng)的痰標(biāo)本，須置4冰箱保存，防止痰液干涸或污染。,.,二、結(jié)核分支桿菌培養(yǎng)操作規(guī)

3、程,培養(yǎng)基 酸性改良羅氏（分離培養(yǎng)）目前由州疾控統(tǒng)一購買按任務(wù)數(shù)配發(fā)并4冰箱保存。 1、將培養(yǎng)基從冰箱取出，恢復(fù)到室溫并在培養(yǎng)管上編培養(yǎng)序號，寫上患者姓名、培養(yǎng)日期、痰涂片編號等信息。 2、標(biāo)本前處理：堿處理法 取2mL痰標(biāo)本于前處理管中加1-2倍痰標(biāo)本量的4%NaOH，振蕩器上震動(dòng)30-60s后室溫放置10-15min（不得超過20min）。,.,3、接種方法：取前處理消化后痰液0.1mL,無菌操作接種于培養(yǎng)基斜面上，每份標(biāo)本同時(shí)接種兩支酸性改良羅氏培養(yǎng)基，放37孵育。,.,4、結(jié)果與報(bào)告,接種后37天觀察，此后每周觀察一次菌落生長情況，有菌落生長需經(jīng)抗酸染色確認(rèn)是否為分支桿菌。若至第8周仍無菌落生長方可報(bào)告陰性結(jié)果。 分支桿菌培養(yǎng)報(bào)告方式 分支桿菌培養(yǎng)陰性：斜面無分支桿菌菌落生長 分支桿菌培養(yǎng)陽性（1+）：菌落占斜面面積1/4 分支桿菌培養(yǎng)陽性（2+）：菌落占斜面面積1/2,.,分支桿菌培養(yǎng)陽性（3+）：菌落占斜面面3/4 分支桿菌培養(yǎng)陽性（4+）菌落布滿全斜面。 5、培養(yǎng)基污染情況報(bào)告 在觀察分支桿菌生長情況時(shí)，發(fā)現(xiàn)有非分支桿菌生長，報(bào)告污染，重新送檢