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1、實(shí)驗(yàn)八 重金屬離子脅迫下植物組織膜脂過氧化產(chǎn)物的測(cè)定,（MDA,一，實(shí)驗(yàn)?zāi)康呐c要求,掌握比色法測(cè)定植物組織MDA含量的方法和步驟； 觀察重金屬脅迫下植物組織膜脂過氧化的程度。,二，實(shí)驗(yàn)原理,MDA是植物細(xì)胞膜脂過氧化反應(yīng)的最終產(chǎn)物之一。 逆境脅迫導(dǎo)致自由基（O 2 、OH 等）積累，誘導(dǎo)細(xì)胞膜中的不飽和脂肪酸發(fā)生過氧化反應(yīng)。,MDA的積累加劇對(duì)細(xì)胞的傷害。 MDA可與蛋白質(zhì)、核酸等結(jié)合使之失去其活性, 從而進(jìn)一步破壞了生物膜及細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能, 最終導(dǎo)致植物受傷害, 甚至死亡。,在酸性和高溫條件下，MDA可以與硫代巴比妥酸（TBA）反應(yīng)生成紅棕色的三甲氚，在532nm處有最大光吸收。,排

2、除干擾： 蔗糖與TBA反應(yīng)后，在450nm有最大光吸收，在532nm也有光吸收，通過公式排除干擾。,三，實(shí)驗(yàn)材料與試劑,材料 Cd 2+處理7d的菹草葉片； 試劑 10%三氯乙酸（TCA）； 0.6%硫代巴比妥酸（TBA）。,四，實(shí)驗(yàn)步驟,MDA的提?。?0.1g植物葉片洗凈、擦干、剪碎，置于研缽中加少許石英砂、5mLTCA（分次），研磨勻漿后轉(zhuǎn)移至離心管。4000 rpm離心10min，上清液即為樣品提取液。,2，顯色反應(yīng)與測(cè)定,2mL提取液+2mL TBA，混勻，沸水浴15min，迅速冷卻。 另取mLTCA+2mLTBA同樣操作，為對(duì)照液。 反應(yīng)液3500rpm離心15min，取上清液，測(cè)量體積（），以對(duì)照液調(diào)零，測(cè)定532nm、600nm、450nm處的光吸收值。,3，計(jì)算含量,MDA的濃度： (mol/L)6.45(A532-A600)-0.56A450 MDA的含量 含量( mol

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