1、酶催化劑的分離和純化的注意事項(xiàng)和酶催化劑的分離純化為何進(jìn)行酶活力和酶催化劑比活性測(cè)定，PPT制作：陳玉成，金暉資料檢索：郭女士PPT說(shuō)明：田恩平，酶催化劑的提取，分離純化技術(shù)途徑，細(xì)胞球破碎，酶催化劑提取，酶催化劑分離純化，酶濃縮，酶貯藏，動(dòng)物，植物和微生物細(xì)胞，發(fā)酵液，離心分離，過(guò)濾酶催化劑的純化過(guò)程大致分為3個(gè)階段： (1)粗蛋白(crude protein):樣品均質(zhì)，破壞細(xì)胞球，提取全蛋白，可粗略地除去大多數(shù)采用鹽析沉淀法的蛋白質(zhì)以外的物質(zhì)。 (2)部分純化：的初步純化采用各鐘柱色譜分析法。 (3)同工酶(homogeneous):目的酶催化劑的進(jìn)一步純化，可以使用制備式陽(yáng)離子電泳或H

2、PLC .酶催化劑分離純化的不同階段，本章的目錄、酶催化劑的提取是指將含有酶催化劑的原料在一定條件下用適當(dāng)?shù)娜軇┗蛉芤禾幚?，使酶催化劑溶解于溶劑或溶液中的過(guò)程。 也稱為提取酶催化劑。 提取酶催化劑時(shí)，首先要根據(jù)酶催化劑的結(jié)構(gòu)和溶解性，選擇合適的溶劑。 一般來(lái)說(shuō)，極性物質(zhì)容易溶于極性溶劑，非極性物質(zhì)容易溶于非極性有機(jī)溶劑，酸性物質(zhì)容易溶于堿性溶劑，堿性物質(zhì)容易溶于酸性溶劑。 酶催化劑可以溶解于水中，但通?？梢杂盟蛳∷?、稀堿、稀鹽溶液等提取，一部分酶催化劑可以與脂質(zhì)結(jié)合，含有大量非極性化學(xué)基時(shí)可以用有機(jī)溶劑提取。酶催化劑的提取：提高溫度、降低溶液的黏性系數(shù)、增加擴(kuò)散面積、縮短擴(kuò)散距離、增大濃度差

3、有助于提高酶催化劑分子的擴(kuò)散速度。 為了提高酶催化劑的提取率，防止酶催化劑的變性失活，應(yīng)注意在提取過(guò)程中對(duì)溫度、pH等提取條件的特羅爾。酶催化劑提取過(guò)程中應(yīng)注意的事項(xiàng)：根據(jù)酶催化劑提取時(shí)采用的溶劑和溶液，酶催化劑提取的方法主要有鹽溶液提取、酸溶液提取、堿溶液提取、有機(jī)溶劑提取等。 鹽溶液提?。憾鄶?shù)酶催化劑在一定濃度的鹽存在的條件下，酶催化劑的溶解度增加，即鹽溶解，但鹽濃度過(guò)高則要不得。 否則，溶解度反而降低，即析出鹽。 因此，一般用稀鹽溶液進(jìn)行酶催化劑的提取，鹽濃度控制在0.020.5mol/L。 例如，固體發(fā)酵生產(chǎn)麩質(zhì)中的淀粉酶、糖化酶催化劑、蛋白酶等胞外酶， 用0.15molL氯化納金屬釷

4、溶液或0.020.05molL的磷酸緩沖液提取的酵母醇脫氫酶有用0.50.6molL的磷酸氫二鈉溶液提取的霉菌等少數(shù)酶催化劑，在酶催化劑的提取過(guò)程中，為了提高提取率、防止酶變性失活，溫度：通常提取溫度控制在0-10oC(0-4 oC ) 某種耐溫酶催化劑，如百事達(dá)等，可以適當(dāng)提高提取溫度，用37 oC保溫提取，效果好。 提高溫度可以提高酶催化劑的擴(kuò)散速度，提高酶催化劑的溶解度，有利于酶催化劑的提取。 2 .試劑其次要注意避免使用導(dǎo)致酶催化劑變性的試劑，如重金屬鹽、有機(jī)試劑。 嚴(yán)格意義上，提取活性酶催化劑，必須避免可能使蛋白質(zhì)沉淀的試劑和方法。 最好在液體環(huán)境下直接進(jìn)行，理想的方法是柱色譜分析法

5、。 并且，為了防止蛋白質(zhì)實(shí)際在提取過(guò)程中釋放的內(nèi)因性蛋白酶(爸爸層、枯草蛋白酶等)分解蛋白質(zhì)，需要在提取環(huán)境中加入適當(dāng)?shù)牡鞍酌缸杌瘎?酶活力酶催化劑的比活力，酶活力的測(cè)定單位。 1961年國(guó)際酶催化劑學(xué)會(huì)議規(guī)定，一個(gè)酶活力單位是指在特定條件(2.5等最佳條件)下，1分鐘感受態(tài)1微摩爾基質(zhì)的酶催化劑量，或感受態(tài)基質(zhì)中1微摩爾相關(guān)化學(xué)基的酶催化劑量。 1、在特定條件下，單位重量(mg )蛋白或RNA具有的酶活力單位數(shù)。2、比活力(性)是酶催化劑純度的尺度，是指：?jiǎn)挝恢亓康牡鞍踪|(zhì)中含有的酶催化劑的活力單位數(shù)，一般用IU/mg蛋白質(zhì)表示。 一般來(lái)說(shuō)，酶催化劑的比活力越高，酶催化劑越單純。 3、比活力是每1mg蛋白質(zhì)的酶活力單位數(shù)，一般用酶活力單位/mg蛋白質(zhì)表示。 酶催化劑的比活力被酶催化劑學(xué)研究用于測(cè)定酶催化劑的純度，同一酶催化劑的比活力越大，酶催化劑的純度越高。 利用比活力的大小比較酶制劑中單位質(zhì)量蛋白質(zhì)的催化能力，是顯示酶催化劑純度高低的重要指標(biāo)。 在酶催化劑分離純化過(guò)程中為