1、液相色譜柱維護保養(yǎng)及儀器沖洗注意：每個色譜柱使用之前都要閱讀一下使用說明書。色譜柱維護保養(yǎng)是很重要的，關系到色譜柱的使用壽命和檢測結果的準確性，所以任何人用過色譜柱之后，一定要對色譜柱進行保養(yǎng)，管理人員和使用者互相監(jiān)督?？偟脑瓌t是色譜柱要輕拿輕放，避免損壞填料；另外沒有使用的情況下，一定要保證兩端的堵頭封好。對于具體的色譜柱，下面列出常用色譜柱維護保養(yǎng)的具體方法和注意事項，以便使用者參考。C18柱（包括預柱）對于未啟用的新的色譜柱，先用甲醇或乙腈以小流速（0.2ml/min緩慢升高到0.5ml/min）不接檢測器沖洗色譜柱30分鐘后，將色譜柱與檢測器連上，流速調(diào)為1.0 ml/min沖洗色譜柱

2、60分鐘，然后不斷降低有機相的比例（如80%、50%、10%甲醇或乙腈）各沖洗至少30分鐘。若色譜柱暫時不用，則將色譜柱保存在高比例有機相中（如80%甲醇或乙腈，或者參考該色譜柱使用說明書中建議的溶劑中）；色譜柱使用時應用與分析流動相相同比例的有機溶劑（將緩沖鹽溶液換成水）沖洗色譜柱15分鐘，然后再換成流動相進行樣品分析。樣品分析完后，色譜柱維護與保養(yǎng)方法：流動相中若含酸、堿、鹽類物質，則要先用10%甲醇或乙腈沖洗，1.0ml/min的流速沖洗至少30min，再用80%甲醇或乙腈沖洗至少30min，柱子保存在80%甲醇或乙腈里（具體問題具體分析，洗脫程序可以是梯度洗脫程序，注意如果最后色譜柱保

3、存的是高有機相，第二天用之前一定要用高水相過渡一下，再換成流動相）。如柱子長時間未用，則柱子保存在100%的甲醇或乙腈里。對于含有離子對試劑的流動相如庚烷磺酸鈉和十二烷基磺酸鈉等，柱子應采用梯度洗脫，一般用乙腈-水系統(tǒng)（水：90-10；乙腈：10-90）沖洗時間要稍長些，然后保存于90%乙腈。需要特別強調(diào)的是，目前所有的C18柱均不能用純水進行長時間（1小時以上）沖洗，除非有專門耐水的專用柱，否則，用純水長時間沖洗色譜柱，會導致色譜柱的固定相流失和相塌陷，損壞色譜柱。大多數(shù)反相色譜柱的pH穩(wěn)定范圍是28，有的pH穩(wěn)定范圍會寬，具體pH穩(wěn)定范圍參照色譜柱說明書，當分析條件的pH值偏小或偏大時，可

4、選擇pH穩(wěn)定范圍寬的柱子進行分析，否則，會損壞色譜柱。在每次進行樣品分析時，要保證流動相（包括鹽、緩沖鹽、酸等）與色譜系統(tǒng)及柱內(nèi)的保存液要互溶，如不能互溶，則需要用一定比例的有機溶劑（不低于10%）或與分析流動相相當?shù)挠袡C溶劑對柱子進行過渡，否則，流動相中的鹽會在系統(tǒng)與柱內(nèi)析出，影響樣品分析或損壞柱子。硅膠柱、正相手性色譜柱【包括AS-H、AD-H、OD-H系列，5DMB、5TBB系列，OA系列（如OA-3100、OA-3300）】 對于未啟用的新的色譜柱，在保證系統(tǒng)是正相的情況下，可先用異丙醇小流速（流速為0.10.3ml/min）沖洗色譜柱約15分鐘，然后換上正相流動相平衡進行色譜分析。硅

5、膠柱及正相手性柱不能過水相（對于sepax系列的硅膠柱，可以過低比例的水相（有機相不低于50%），接上色譜柱之前要保證液相色譜系統(tǒng)中的所有管路為正相流動相【如是不含鹽的反相溶液（如水/乙腈；水/甲醇），先用異丙醇沖洗所有管路，然后用正相流動相沖洗所有管路，最后再接上色譜柱；若反相流動相中含有緩沖鹽（如緩沖鹽/乙腈；緩沖鹽/甲醇），先用純水沖洗HPLC系統(tǒng)，然后用異丙醇沖洗所有管路，最后用正相流動相沖洗，再接上色譜柱?！渴褂媒Y束后，先用異丙醇沖洗色譜系統(tǒng)與色譜柱，再用色譜級的正己烷沖洗色譜柱，（或者直接用正己烷異丙醇（90：10）沖洗，并保存在正己烷異丙醇（90：10）中）。如長時間未用，則保存

6、在正己烷中。需要特別強調(diào)的是，沖洗硅膠柱時，不能用純水或含水的有機溶劑或緩沖鹽體系沖洗色譜柱，只能用純有機溶劑沖洗色譜柱（對于sepax系列的硅膠柱可以用不低于50%有機相沖洗色譜柱），最后保存在純的有機溶劑中。在進行樣品分析前，一定要保證流動相與色譜系統(tǒng)及色譜柱柱內(nèi)的保存液要互溶，如不互溶，則需要用異丙醇過度，否則，會影響色譜系統(tǒng)與損壞柱子。反相手性色譜柱（如：CHIRALCEL OZ-3R）：同C18柱陰離子柱和陽離子柱： 目前常見的陰子柱有waters IC-PakTM anion，陽離子柱有磺酸基陽離子柱與waters陽離子交換柱（鈣型）。對于waters IC-PakTM anion

7、 和waters陽離子交換柱（鈣型），新柱子使用前用高純水小流速（0.2ml/min緩慢升高到0.5ml/min）沖洗約30分鐘，然后再換成流動相平衡色譜柱。在沖洗色譜柱之前，要保證整個色譜系統(tǒng)為純水相。對于磺酸基陽離子柱（含有硅膠基柱的），使用前用甲醇或乙腈小流速沖洗30分鐘，然后高純水替換系統(tǒng)沖洗，然后接上色譜柱。分析完樣品后，對于waters IC-PakTM anion和waters陽離子交換柱（鈣型）用高純水沖洗色譜柱，色譜柱最后保存在純化水中。對于磺酸基陽離子柱，用50%的乙腈或甲醇沖洗色譜柱30分鐘，最后保存在甲醇或乙腈中（參照柱子說明書）。沖洗所用流速根據(jù)柱子耐壓情況進行調(diào)整。

8、需要特別強調(diào)的是waters IC-PakTM anion和waters陽離子交換柱（鈣型）是不能過有機相（純有機溶劑或有機溶液），否則會損壞色譜柱。氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱目前所使用的氨基柱、氰基柱、苯基柱及C8柱基本都是使用反相系統(tǒng)，其操作方法與維護保養(yǎng)與C18相同。對于新碰到的別的型號的色譜柱，如本規(guī)程沒有說明時，要參照色譜柱說明書具體問題具體分析。液相儀器的沖洗1、沖洗色譜系統(tǒng)（具體情況具體分析，可針對緩沖鹽濃度較高的流動相）一般做完試驗沖洗完色譜柱后，換上兩通，將各通道放于10%乙腈中沖洗至少30分鐘（若原色譜系統(tǒng)中流動相含鹽，則用高純水（有時候用溫水效果更好）沖洗至少30分鐘

9、后再用10%乙腈沖洗）。若儀器長時間不用，則將儀器保存于80%乙腈中。2、清洗進樣針、柱塞桿洗針液應選擇能較好溶解樣品的溶劑（如該樣品在70%甲醇中溶解，則洗針液應選擇70%甲醇或更高比例的甲醇）；清洗柱塞桿的溶劑（為了清洗流動相中析出的鹽），一般選擇低比例的有機相，如10%甲醇或乙腈。3、儀器的鈍化色譜泵溶劑過濾頭、進出口閥及管路（包括進樣器和檢測池）若被污染，系統(tǒng)應做清洗和鈍化處理。一般采用30%磷酸水溶液作為清洗劑，用6mol/L硝酸作為鈍化劑，先清洗再鈍化。清洗的目的是去除不銹鋼管路及系統(tǒng)內(nèi)的污垢。鈍化的目的是使不銹鋼管路的內(nèi)表面形成光滑均勻的氧化膜。30%磷酸水溶液制備：取85%濃磷酸35ml與65ml水混勻。6mol/L硝酸的制備：取濃硝酸40ml與60ml水混勻。方法：將色譜柱取下，用兩通連接進樣器和檢測器，將所有吸濾頭放入高純水中，以1.0ml/min流速過渡（至少3