1、第十章,甾體激素類藥物的分析,基 本 要 求,1掌握甾體結(jié)構(gòu)類藥物的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)與分析方 法之間的關(guān)系。 2掌握甾體類藥物的鑒別原理與方法。 3掌握甾體類藥物的含量原理與方法。 4熟悉甾體類藥物雜質(zhì)檢查的方法。,返 回,基本結(jié)構(gòu)：環(huán)戊烷駢多氫菲,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,概述,分類：,甾體激素,腎上腺皮質(zhì)激素,性激素,雄性激素及蛋白同化激素,孕激素,雌激素,結(jié)構(gòu)特點(diǎn),腎上腺皮質(zhì)激素,氫化可的松,地塞米松磷酸鈉,醋酸地塞米松,雄性激素,甲睪酮,雄性激素,丙酸睪酮,蛋白同化激素,苯丙酸諾龍,孕激素,黃體酮,孕激素,醋

2、酸甲地孕酮,雌性激素,炔雌醇,雌性激素,雌二醇,炔諾酮,此外,炔諾孕酮,返 回,一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì),1. 腎上腺皮質(zhì)激素,2. 雄性激素及蛋白同化激素,3. 孕激素,4. 雌性激素,返 回,二、鑒別試驗(yàn),（一）與強(qiáng)酸的呈色反應(yīng),甾體激素類藥物,呈色,H2SO4 H3PO4 HClO4 HCl,（母核）,與硫酸顯色反應(yīng),顯 色 熒光 加水稀釋,潑尼松龍 深紅 絮狀灰,潑尼松 橙 黃藍(lán)綠,炔雌醚 橙紅 黃綠 紅色,炔雌醇 橙紅 黃綠 絮狀玫紅,醋酸可的松 黃或微 褪色并澄 帶橙 清,(二) 官能團(tuán)的反應(yīng),腎上腺皮質(zhì)激素藥物,呈色,四氮唑鹽 OH,1、C17 醇酮基,還原性,呈色反應(yīng),此外還有斐林試液、

3、多倫試液,甾酮類激素藥物,呈色,羰基試劑,2.C3酮基和C20酮基,常用的羰基試劑： 2,4-二硝基苯肼、異煙肼、硫酸苯肼,具有甲酮基或活潑亞甲基的甾體激素類藥物,呈色,亞硝基鐵氰化鈉 間二硝基酚 芳香醛,3.甲酮基,黃體酮,藍(lán)紫色,亞硝基鐵 氰化納,其他甾體,淡橙色 不顯色,有機(jī)氟,F,有機(jī)破壞,有機(jī)氯,Cl,4.有機(jī)鹵素,茜素氟藍(lán) 硝酸亞鈰,硝酸硝酸銀,AgCl,呈色,雌激素類藥物,紅色偶 氮染料,重氮苯磺酸,5. 酚羥基,含炔基的甾體激素,銀鹽沉淀,硝酸銀,6. 乙炔基的沉淀反應(yīng),(三)制備衍生物測(cè)定m.p.,1. 縮氨基脲的生成,m.p.約180（分解）,2. 酯的水解,m.p.為15

4、0 156,-3-酮、苯環(huán)、其他共軛結(jié)構(gòu),（四）UV法,1. 結(jié)構(gòu)依據(jù),240nm左右,280nm左右,2. 示例,曲安西龍,丙酸倍氯米松,溶劑,甲醇,乙醇,20g/ml,濃度,20g/ml,結(jié)果判斷,在238nm處有最大吸收,在239nm有最大吸收，A為0.570.60，在239nm與263nm的吸收度比值為2.252.45,結(jié)構(gòu)特征：酚羥基、C17 OH C17 乙炔基,炔雌醇,（五）IR法,1505cm-1,3505cm-1,3300cm-1,1590cm-1,3610cm-1,酚羥基,醇羥基,1615cm-1,苯環(huán)的骨架振動(dòng),黃體酮,結(jié)構(gòu)特征：-3-酮、C17-酮基,1700cm-1,

5、C=O,20位酮基,1665cm-1,3位酮基,1615cm-1,870cm-1,C-H,雙鍵,（七）TLC法,主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別,方法：對(duì)照品法 要求供試品溶液所顯主斑點(diǎn)的顏色和位置與對(duì)照品溶液的主斑點(diǎn)相同。,（八） HPLC法,主要用于甾體激素類藥物制劑的鑒別（如：醋酸曲安奈德軟膏、醋酸氟輕松軟膏）,方法：對(duì)照品法 要求在含量測(cè)定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品峰的tR與對(duì)照品峰的tR一致。,返 回,三、 特殊雜質(zhì)檢查,（一）其他甾體的檢查,檢查意義：其他甾體與甾體激素藥物結(jié) 構(gòu)相似，也有一定的藥理作 用而又互不相同.,檢查方法（具有一定分離能力） TLC法（高低濃度對(duì)比法） HP

6、LC法（類似高低濃度對(duì)比法）,（1）TLC法（高低濃度對(duì)比法）,判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)斑點(diǎn)顏色,例：氫化可的松中其他甾體的檢查 供試液：本品+氯仿-甲醇（9：1） 濃度：3.0mg/ml 對(duì)照液：供試液（3.0mg/ml）+氯仿-甲醇（9：1） 60g/ml 層析：供試液 點(diǎn)樣、展開、斑點(diǎn)檢出。 對(duì)照液 判斷：供試液如顯雜質(zhì)斑點(diǎn)，不得多于3個(gè)，其顏 色與對(duì)照液的主斑點(diǎn)比較，不得更深。,（2）HPLC法（主成分自身對(duì)照法）,判定方法： 規(guī)定雜質(zhì)峰數(shù)目 規(guī)定雜質(zhì)峰面積,硒的檢查,（二）,來源 合成中用二氧化硒(SeO2)脫氫,有毒,方法,藥物,氧瓶燃燒,二氨基萘比色法測(cè)定,（三）有

7、機(jī)溶劑殘留量的檢查,（靈敏度法）,甲醇 不得出峰 檢測(cè)限= 3.1ng,丙酮 5.0% 內(nèi)標(biāo)法 + 校正因子,以地塞米松磷酸鈉為例 GC法,地塞米松磷酸鈉,檢查 甲醇和丙酮,精密稱取本品0.16g，置10ml量瓶 中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液2ml，加水稀釋至 刻度，作為供試液；另精密量取甲醇10 l(7.9mg)與丙酮100l(79mg)置 100ml量瓶中，精密加內(nèi)標(biāo)溶液20ml， 加水至刻度，作為對(duì)照液。照氣相色譜 法測(cè)定，含丙酮不得過5.0%，并不得 出現(xiàn)甲醇峰。,（二）游離磷酸鹽的檢查,地塞米松磷酸鈉,對(duì)照品比色法,供試液+鉬酸銨+1-氨基-2-萘酚-4-磺酸 鉬藍(lán)：740nm 對(duì)照液：同上,

8、（對(duì)照液 0.0035%KH2PO4）,返 回,USP、BP、JP均采用,RPHPLC（大多內(nèi)標(biāo)法）,（甾體激素類藥物常含有結(jié)構(gòu)相似的其他甾體雜質(zhì)，對(duì)利用結(jié)構(gòu)特征設(shè)計(jì)的比色法有干擾）,四、含量測(cè)定,測(cè)定對(duì)象： 甾體激素類藥物的原料和制劑。,示例：黃體酮的含量測(cè)定色譜條件：固定相 ODS，流動(dòng)相 甲醇-水 （65:35），檢測(cè)波長254nm， 內(nèi)標(biāo)物 己烯雌酚 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：n 1000，R符合規(guī)定。,測(cè)定樣品：黃體酮原料、注射液。定量方法：內(nèi)標(biāo)法,（二）UV法,-3-酮 240nm（）,腎上腺皮質(zhì)激素 雄性激素和蛋白同化激素 孕激素、口服避孕藥,苯環(huán) 280nm（）,雌激素,示例：醋酸地塞米

9、松片的含量測(cè)定 （1）配制供試液（2）測(cè)定：240nm（3）計(jì)算,腎上腺皮質(zhì)激素、 雄性激素和蛋白同 化激素、孕激素,C3酮基,（1） 原理,異煙腙（黃）,酮基,異煙肼,-,3,C,HCl,（縮合）,（三）比色法,異煙腙（黃色）,（2）方法,對(duì)照品法,（3）討論,反應(yīng)速度（反應(yīng)專屬性）,A.,C3= O C17= O 、 C20= O C11= O 不反應(yīng),反應(yīng)專屬性 C3酮基,B. 溶劑的選擇,異煙肼鹽酸鹽甲醇、乙醇,無水甲醇 無水乙醇,C.水分、溫度、O2與光線的影響,含水量腙水解A%,不揮發(fā)溶劑、不吸收水分時(shí) O2與光線無影響,t ,D. 酸的種類和濃度及異煙肼的濃度,腎上腺皮質(zhì)激素類,C17 -醇酮基,強(qiáng)還原性,（1）原理,2. 四氮唑比色法,三苯甲瓚深紅,H,藍(lán)四氮唑（BT）,（2）方法,對(duì)照品法,B. 溶劑、水分的影響,以無醛乙醇為溶劑,C. O2與光線的影響,避