1、.,1,金黃色葡萄球菌,金黃色葡萄球菌的生物學特性,一、形態(tài)與染色 典型的金黃色葡萄球菌為球型，直徑0.8m左右，顯微鏡下排列成葡萄串狀。 金黃色葡萄球菌無芽胞、鞭毛，大多數(shù)無莢膜。革蘭氏染色陽性。,金黃色葡萄球菌,金黃色葡萄球菌的掃描電鏡照片,金黃色葡萄球菌的透射電鏡照片,金黃色葡萄球菌革蘭氏染色顯微照片,二 培養(yǎng)特性：（1）營養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長良好，需氧或兼性厭氧，最適生長溫度37，最適生長pH 7.4。（2）平板上菌落厚、有光澤、圓形凸起，直徑1-2mm。血平板菌落周圍形成透明的溶血環(huán)。（3）有高度耐鹽性，可在10- 15% NaCl肉湯中生長。,培養(yǎng),生物學性狀,金黃色葡萄

2、球菌,表皮葡萄球菌,普通平板上,在普通平板上的菌落特征,在血平板上的菌落特征,菌落較大，圓形，光滑突起，濕潤，金黃色（有時為白色），菌落周圍為完全透明溶血圈。,在Baird-Parker 平板上的菌落特征,Baird-Parker培養(yǎng)基中含卵黃亞碲酸鉀，可抑制大多數(shù)細菌繁殖，并能促進金黃色葡萄球菌生長。 菌落直徑2-3mm，顏色從灰色到黑色，邊緣為淡色，周圍有一渾濁帶，其外層有一透明圈，用接種針觸碰有奶油樹脂的硬度。,3種葡萄球菌鑒別的主要性狀,1.可分解葡萄糖、麥芽糖、乳糖、蔗糖，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣。甲基紅反應陽性，V-P反應弱陽性。 2.許多菌株可分解精氨酸，水解尿素，還原硝酸鹽，液化明膠。 3.

3、具有較強的抵抗力，對磺胺類藥物敏感性低，但對青霉素、紅霉素等高度敏感。,三 、生化特性,四、抗原種類和血清學分型,金葡水解，獲得兩種抗原成分：蛋白抗原和多糖抗原。 蛋白抗原是凝集抗原，無特異性。多糖抗原有特異性。 絕大多數(shù)金葡含有A型抗原，B型抗原主要存在于凝固酶陰性菌株，C型抗原在致病性和非致病性菌株中都存在。,五、致病物質及致病性,外毒素，分、五種. 對人類在致病作用的主要是溶血素。它是一種“攻擊因子”，化學成分為蛋白質，分子量約為30000，不耐熱，6530分鐘即可破壞。如將-溶血素注入動物皮內，能引起皮膚壞死，如靜脈注射，則導致動物迅速死亡。溶血素還能使小血管收縮，導致局部缺血和壞死，

4、并能引起平滑肌痙攣。溶血素是一種外毒素，具有良好的抗原性，經(jīng)甲醛處理可制成類毒素。,1.葡萄球菌溶血素（Staphyolysin）,2.殺白細胞毒素（Leukocidin） 可破壞人的白細胞和巨噬細胞,3.腸毒素 金黃色葡萄球菌腸毒素主是由血漿凝固酶或耐熱核酸酶陽性菌株所產(chǎn)生的一類結構相關、毒力相似、抗原性不同的胞外蛋白質。50%以上的金黃色葡萄球菌可以產(chǎn)生腸毒素，并且一個菌株可以產(chǎn)生2種或2種以上的腸毒素。 目前，在近18個種和亞種的金黃色葡萄球菌中，有6種為凝固酶陽性，這6種即為與食品有關的重要菌種。迄今從血清型上已被鑒定的腸毒素血清型有10種：A、B、C、D、E、G、H、I、J、K型，其

5、中C型抗原又根據(jù)等電點的不同分為3個亞型(Cl、C2、C3),腸毒素是一種可溶性蛋白質，耐熱，經(jīng)100煮沸30分鐘不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響（破壞食物中存在的腸毒素須加熱至100，并持續(xù)2h），且具有超抗原(superantigen)特性 ，故誤食污染腸毒素的食物后，在腸道作用于內脂神經(jīng)受體，傳入中樞，刺激嘔吐中樞，引起嘔吐，并產(chǎn)生急性胃腸炎癥狀。,4.表皮溶解毒素（Epidermolytic toxin） 表皮溶解毒素也稱表皮剝脫毒素（Exfoliatin)，可引起人類或新生小鼠的表皮剝脫性病變、燙傷樣皮膚綜合征（剝脫性皮炎），多見于新生兒、嬰幼兒及免疫功能低下者。它主要是由噬菌體型金葡

6、菌產(chǎn)生的一種蛋白質，分子量24000，具有抗原性，可被甲醛脫毒成類毒素。,致病性與免疫性,燙傷樣皮膚綜合癥,5.中毒性休克綜合癥毒素-（Toxic shock syndrome toxin-1,TTST-1） 系噬菌體群金黃色葡萄球菌產(chǎn)生。是極強的致病因子，可引起發(fā)熱，增加對內毒素的敏感性，增強毛細血管通透性，引起血管紊亂而導致休克，多個器官系統(tǒng)的功能紊亂或毒性休克綜合癥。它們在介導感染性休克及器官損害中可能具有一定意義。,6.血漿凝固酶（Coagulase） 血漿凝固酶是能使含有枸椽酸鈉或肝素抗凝劑的人或兔血漿發(fā)生凝固的酶類物質，致病菌株多能產(chǎn)生，常作為鑒別葡萄球菌有無致病性的重要標志。,凝

7、固酶有兩種：一種是分泌至菌體外的，稱為游離凝固酶（Free coagulase），為蛋白質。作用類似凝血酶原物質，可被人或兔血漿中的協(xié)同因子(Cofactor)激活變成凝血酶樣物質后，使液態(tài)的纖維蛋白原變成固態(tài)的纖維蛋白，從而使血漿凝固。另一種凝固酶結合于菌體表面并不釋放，稱為結合凝固酶(Bound coagulase)或凝聚因子(Chumping factor)，在該菌株的表面起纖維蛋白原的特異受體作用，細菌混懸于人或兔血漿中時，纖維蛋白原與菌體受體交聯(lián)而使細菌凝聚。,凝固酶和葡萄球菌的毒力關系密切。* 凝固酶陽性菌株進入機體后，使血液或血漿中的纖維蛋白沉積于菌體表面，阻礙體內吞噬細胞的吞噬

8、，即使被吞噬后，也不易被殺死。* 同時，凝固酶集聚在菌體四周，亦能保護病菌不受血清中殺菌物質的作用。* 凝固酶具有免疫原性，刺激機體產(chǎn)生的抗體對凝固酶陽性的細菌感染有一定的保護作用。慢性感染患者血清可有凝固酶抗體的存在。,7.葡激酶（Staphylokinase） 亦稱葡萄球菌溶纖維蛋白酶（Staphylococcal fibrinolysin） 溶纖維蛋白酶是細菌侵襲性酶類的一種，該酶能使凝固的纖維蛋白溶解，有利于細菌在體內的擴散。乙型溶血性鏈球菌等也可以產(chǎn)生溶纖維蛋白酶。,8.透明質酸酶(Hyaluronidase) 透明質酸酶也是細菌侵襲性酶類的一種，金黃色葡萄球菌、乙型溶血性鏈球菌和產(chǎn)

9、氣莢膜桿菌均可產(chǎn)生。該酶可水解機體結締組織中的基質透明質酸，有利于細菌在組織內擴散，所以也叫擴散因子。,9.耐熱核酸酶 (Heat-stable nuclease) 金黃色葡萄球菌產(chǎn)生的脫氧核糖核酸酶（DNA酶）能耐受高溫，可用作鑒定金黃色葡萄球菌的依據(jù)。該酶能分解膿液中粘稠的DNA，使膿液變得稀薄，利于細菌在體內的擴散及毒素的吸收。很多人利用耐熱核酸酶試驗來快速檢測金黃色葡萄球菌,10.其他酶 -明膠酶 -脂酶 -肽酶等。,樣品制備 稀釋、接種胰蛋白胨大豆肉湯 劃線接種于瓊脂平板 挑取菌落,移種到肉湯培養(yǎng)基中培養(yǎng) 凝固酶試驗 對可疑結果進行革蘭氏染色、鏡檢和其他輔助試驗，如耐熱核酸酶試驗等加

10、以證實。 根據(jù)凝固酶試驗結果查最近似值(MPN)表,報告金黃色葡萄球菌 的MPN/g (ml)。,六、 金黃色葡萄球菌的檢驗方法,GB4789.10-2010,血平板的制作,增菌培養(yǎng)：將10-1稀釋液接入7.5%NaCl肉湯或胰蛋白胨肉湯中，37C培養(yǎng)24小時。 金黃色葡萄球菌在血平板上呈金黃或白色菌落，大而凸起，表面光滑，周圍有溶血圈。 在Baird-Parker平板上菌落為圓形，直徑2-3mm，顏色灰或黑色，周圍有一渾濁帶 。,血漿凝固酶試驗,吸取0.5mL兔血漿與0.5mL金黃色葡萄球菌肉浸液肉湯24小時培養(yǎng)物充分混勻，置361培養(yǎng)，每隔半小時觀察一次，連續(xù)觀察6小時，出現(xiàn)凝固，即將小試

11、管傾斜或倒置時，內容物不流動，判為陽性。同時做陰陽性對照。,動物試驗 聚合酶鏈式反應（ PCR） 免疫血清學方法 免疫雙擴法(DD）、 反向被動膠乳凝集(RPLA)、 反向被動血凝(RPHA)酶聯(lián)免疫吸附 固相放射免疫技術(SPRIA)、 免疫印跡技術（Immunobloting) 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA) 生物傳感器技術 超抗原技術等。,金黃色葡萄球菌腸毒素的檢測,其中以反向被動膠乳凝集(RPLA)和反向被動血凝(RPHA)酶聯(lián)免疫吸附試驗為主，也有用親和素-生物素乳膠凝集的方法和放射免疫試驗以及表面等離子體諧振技術（Surface Plasmon Resonesonance ,SPR）

12、,PCR法檢測的結果不一定能夠完全反應體內的生物學效應 DD法所用儀器昂貴，尤其是存在放射性污染，也不易推廣 免疫印跡和RPLA受非特異性干擾易產(chǎn)生假陽性結果 ELISA法穩(wěn)定性較差,各種方法的局限性,金黃色葡萄球菌腸毒素是個世界性衛(wèi)生問題，在美國由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒比例約為33%，加拿大則更多(45%)，某些歐洲國家如匈牙利、芬蘭等占50以上。我國每年由金黃色葡萄球菌所引起的食物中毒占整個細菌性食物中毒的50，且近年來發(fā)現(xiàn)葡萄球菌幾乎都對青霉素產(chǎn)生抗性，特別是耐甲氧西林耐藥株大量出現(xiàn)，已與肝炎、艾滋病等一起統(tǒng)稱為世界上三大難治傳染性頑癥。,金葡萄球菌腸毒素

13、中毒,腸毒素形成條件,存放溫度，在37內，溫度越高，產(chǎn)毒時間越短； 存放地點，通風不良氧分壓低易形成腸毒素； 食物種類，含蛋白質豐富，水分多，同時含一定量淀粉的食物，腸毒素易生成。,主要癥狀為腹瀉、反復嘔吐等急性胃腸炎癥狀。兒童對腸毒素比成人敏感，因此發(fā)病率更高，病情也更重。另外，金黃色葡萄球菌是人類化膿感染中最常見的病原菌，可引起局部化膿感染，也可引起肺炎、偽膜性腸炎、心包炎等，甚至敗血癥、膿毒癥等全身感染。,中毒癥狀,食品被金葡萄球菌污染后，在適宜條件下迅速繁殖，在繁殖過程中分泌到菌細胞外的腸毒素會引起中毒。腸毒素作用于迷走神經(jīng)的內臟分枝而致嘔吐,作用于腸道使水分的分泌與吸收失去平衡而致腹瀉。在一般烹調溫度下，食物中如有腸毒素存在，就能引起食物中毒。A型腸毒素毒力最強，攝入1g即能引起中毒，在葡萄球菌毒素中毒中最為多見。各型腸毒素引起的中毒癥狀基本相同。,中毒機制（毒素型食物中毒）,在我國主要引起中毒的食品有：奶、肉、蛋、魚類及其制品等各種動物性食品。糯米涼糕、涼粉、剩飯和米酒等也曾引起過中毒。,引起中毒的食品,引起葡萄球菌腸毒素中毒的食品必須具備以下條件： (1)食物污染大量產(chǎn)